检验仪器分析-第八章--血液分析相关仪器

MedicalLaboratoryinstrumentsMedicalLaboratoryinstruments第八章血液分析相关仪器主要内容第一节血细胞分析仪第二节血液凝固分析仪第三节全自动血型分析仪第五节自动血沉分析仪本节要点1.电阻抗（库尔特）法血细胞计数原理2.联合检测型血细胞分析仪的主要技术特点3.血细胞分析仪检测血红蛋白和网织红细胞原理4.红细胞直方图的临床应用5.血细胞分析仪的基本结构、性能评价及结果比对6.血细胞分析仪的维护保养及故障排除第一节血细胞分析仪返回目录掌握血细胞分析仪的库尔特分析原理、血红蛋白检测原理。熟悉联合检测型血细胞分析仪器的检测原理、网织红细胞检测原理、仪器的基本结构、仪器性能评价和维护。了解血细胞分析仪的分类、性能指标、常见故障和排除。第一节血细胞分析仪学习目标返回目录一、概述血细胞分析仪（bloodcellanalyzer）是临床检验应用最广泛的仪器之一，可以对一定体积全血内血细胞的数量和质量进行自动化分析。返回目录•手工计数时代•1947年，华莱士·库尔特先生发现库尔特原理•1953年，第一台血细胞计数仪诞生•20世纪60年代，测定参数达7项•20世纪70年代，全血细胞计数（CBC）•20世纪80年代，双通道、白细胞2～3分群、五分类•90年代以来，多功能、多参数、流水线一、概述返回目录二、工作原理1.白细胞计数及分类计数检测原理2.红细胞检测原理•成熟红细胞检测•网织红细胞检测•有核红细胞检测3.血小板检测原理4.血红蛋白含量检测返回目录二、工作原理1.白细胞计数及分类计数检测原理返回目录电阻抗法计数原理联合检测型检测原理血细胞与等渗的电解质溶液相比为相对的不良导体当血细胞通过检测器微孔的孔径感受区时，在内外电极之间恒流电路上，电阻值瞬间增大，产生一个电压脉冲信号产生的脉冲数量，等于通过的细胞数量；脉冲信号幅度大小与细胞体积大小成正比请记哦！二、工作原理——白细胞计数之电阻抗法返回目录电阻抗法血细胞计数原理示意图二、工作原理——白细胞计数之电阻抗法返回目录多角度偏振光散射分析技术容量、电导、光散射联合检测技术光散射与细胞化学联合检测技术核酸染色技术双鞘流DHSS五分类技术二、工作原理——白细胞计数之联合检测型返回目录前向角（0°）散射光强度——细胞的大小和数量；小角度（10°）散射光强度——细胞内部结构和核染色质复杂性；垂直角度（90°）偏振光散射强度——细胞内部颗粒及分叶状况；垂直角度（90°D）消偏振光散射强度——将嗜酸性粒细胞从多个核群中区分出来。多角度偏振光散射分析技术二、工作原理——白细胞计数之联合检测型返回目录容量（V）——完整原态细胞的体积；电导（C）——细胞内部结构，将大小相近的细胞区分开来；光散射（S）——提高对细胞颗粒的构型和颗粒质量的鉴别能力。各类白细胞在VCS三维空间中的分布特点各类白细胞在散点图中的分布特点原文地址：容量、电导、光散射联合检测技术（volumeconductivitylightscatter,VCS）二、工作原理——白细胞计数之联合检测型返回目录联合应用细胞化学染色(过氧化物酶染色)过氧化物酶在5种白细胞中的活性存在差异光散射与细胞化学联合检测白细胞分布图光散射与细胞化学联合检测技术二、工作原理——白细胞计数之联合检测型返回目录以半导体激光作为光源，在试剂中增加了核酸荧光染料Polymethine(聚次甲基)，可以对核酸物质DNA/RNA进行染色。染色后白细胞着色深（未成熟粒细胞、异常细胞荧光染色更深，成熟白细胞荧光染色浅），红细胞不染色，血小板稍染色。核酸染色技术二、工作原理——白细胞计数之联合检测型返回目录核酸染色技术白细胞分类散点图原文地址：二、工作原理——白细胞计数之联合检测型返回目录流式细胞术、化学染色和电阻抗法。设置3个通道完成对白细胞五分类和异常白细胞的测定。–白细胞计数通道–双鞘流通道–嗜碱性粒细胞通道双鞘流DHSS五分类技术二、工作原理——白细胞计数之联合检测型返回目录双鞘流图二、工作原理——白细胞计数之联合检测型返回目录双矩阵巨大未成熟细胞（LIC）散点图二、工作原理——白细胞计数之联合检测型返回目录二、工作原理2.红细胞检测原理电阻抗电阻抗法检测原理流式细胞激光核酸荧光染色和鞘流电阻抗法有核红细胞检测返回目录•检测原理同白细胞计数相似•脉冲多少的累积即红细胞数量，脉冲高度的累积可换算成红细胞比容•红细胞直方图上，在50～125fl区域内有一个接近正态分布的曲线，为正常大小的红细胞正常红细胞直方图小红细胞且大小不等大红细胞且大小不等巨幼细胞性贫血治疗有效（呈双峰）电阻抗法检测原理二、工作原理——红细胞计数原理返回目录成熟红细胞无DNA/RNA不被染色；网织红细胞内RNA经荧光染色后，荧光强度与RNA含量成正比，网织红细胞的成熟度不同，RNA含量不同，因此产生的荧光强度就有差异。根据荧光强度差异，可分成三区：低荧光强度网织红细胞（LFR）区中荧光强度网织红细胞(MFR)区高荧光强度网织红细胞(HFR)区流式细胞激光核酸荧光染色和鞘流电阻抗法二、工作原理——红细胞计数原理返回目录光学法检测网织红细胞、成熟红细胞和血小板散点图二、工作原理——红细胞计数原理返回目录•通过有核红细胞检测程序和专用通道，加入专用试剂。•试剂中的荧光染料可渗透进入白细胞膜内。•通过检测荧光强度得到：•白细胞核大、荧光强度高•有核红细胞核小、荧光强度低•正常红细胞无细胞核和破碎、荧光强度极低•根据荧光强度差和前向散射光信号测定的细胞体积。二、工作原理——红细胞计数原理有核红细胞计数返回目录检测参数：NRBC独立的有核红细胞检测通道，能对外周血有核红细胞进行定量分析最新研究：外周血有核红细胞还可对重症监护病人的生存给予预测前向散射光有核红细胞（NRBC）检测通道二、工作原理——红细胞计数原理返回目录二、工作原理3.血小板检测原理电阻抗电阻抗法检测原理流式细胞激光核酸荧光染色和鞘流电阻抗法激光散射法返回目录二、工作原理——血小板计数原理•正常人红细胞体积与血小板体积有明显的差异•血小板计数设置64个通道，体积分布范围在2～30fl之间电阻抗法检测原理返回目录二、工作原理——血小板计数原理单个球形化血小板通过流式通道被激光束照射后•低角度（2°～3°）光散射—测量血小板的大小•高角度（5°～15°）光散射——测量血小板折射指数(refactiveindex,RI),此参数与血小板密度有关。•血小板的体积2～30fl，RI在1.35～1.40之间•红细胞含有高浓度血红蛋白，RI在1.35～1.44之间此法可以在一定程度上纠正由于小红细胞、红细胞或其它细胞碎片以及血小板聚集等因素导致的血小板计数的偏差，可用于血小板计数的纠正。激光散射法返回目录同网织红细胞检测原理类似。荧光染料能够迅速通过细胞膜，与RNA结合后，其荧光强度可提高3000倍左右。其中IPF1和IPF2区域为未成熟血小板二、工作原理——血小板计数原理流式细胞激光核酸荧光染色和鞘流电阻抗法返回目录二、工作原理4.血红蛋白含量检测电阻抗改良氰化高铁血红蛋白法非氰化高铁血红蛋白法返回目录机械系统电子系统血细胞检测系统血红蛋白测定系统计算机和键盘控制系统等三、基本结构返回目录主要性能指标–包括：测试参数、细胞形态学分析、测试速度、样本量主要测试指标的示值范围–示值范围:WBC(0～250)×109/L；RBC(0～7.7)×1012/L；HGB(0～230)g/L；PLT(0～2000)×109/L性能评价–包括：精密度、正确度、携带污染率、线性范围、白细胞分类计数和可比性–不同血细胞分析仪检测结果的比对四、性能指标与评价返回目录开机参数设置检查试剂和废液桶，依次打开主机、电脑，仪器自行启动，完成初始化和自检，开始工作选择校准、质控、静脉血、末梢血模式等菜单检查室内质控结果，若不在控，查找原因，重新运行。若在控，继续样本测定样本（EDTA抗凝血）编号、混匀、放测试位按已设定的参数和程序，按测试键自动检测运行质控样本装载样本测定结果传送以标准模式传送报告结果关机按日保养程序，清洗保养后关机五、检测流程返回目录维护–检测器维护–液路维护–机械传动部分维护常见故障处理–开机时的常见故障及排除–测试过程中常见的错误信息–设备故障修复后：应进行相关的检测和验证六、维护与常见故障处理返回目录本节要点1.全自动血凝仪常用的检测原理及异同点2.全自动血凝仪的基本结构、性能评价3.全自动血凝仪常见错误及故障排除第二节血液凝固分析仪返回目录第二节血液凝固分析仪掌握血凝仪的检测原理和基本结构熟悉半自动、全自动血凝仪的特点，血凝仪的性能评价以及各种检测方法的优缺点了解血凝仪的分类、临床应用、仪器的维护和进展学习目标返回目录一、概述血液凝固分析仪（automatedcoagulationanalyzer,ACA）是采用一定分析技术，对血栓与止血有关成分进行自动检测分析的临床常规检验仪器。返回目录•1910年，Kottman发明了最早的血凝仪•1950年，Schnitger和Gross发明了基于电流法的血凝仪•20世纪70年代，较精确的各种半自动血凝仪先后问世，特点是：单通道、终点法的半自动血凝仪，也称第一代产品•20世纪80年代末，多通道、多种分析方法与原理的半自动血凝仪相继诞生，称之为第二代产品•20世纪90年代，多通道、多方法、多功能全自动第三代血凝仪不断涌现一、概述返回目录•生物学方法•光学法：散射比浊法、透射比浊法•磁珠法•电流法•超声分析法•发色底物法•免疫分析法•干化学技术二、工作原理返回目录将凝血因子激活剂加入到待检血浆中，凝血仪连续记录在血浆凝固过程中一系列物理量（光、电、超声、机械运动等）的变化，并将这些变化信号转变成数据，再由计算机分析所得数据并将之换算成最终结果。概念二、工作原理——生物学方法返回目录是根据血浆凝固过程中浊度的变化，导致光强度变化来测定相关因子。–散射比浊法–透射比浊法二、工作原理——比浊法返回目录散射比浊法原理示意图二、工作原理——散色比浊法返回目录双磁路磁珠法原理：其中一对磁路产生恒定的交替电磁场，用于吸引测试杯内磁珠，使之保持等幅振荡运动；另一对磁路利用测试杯内磁珠摆动过程中对磁力线的切割所产生的电信号,对磁珠摆动幅度进行监测，当磁珠摆动幅度衰减到50%，确定凝固终点。二、工作原理——磁珠法返回目录双磁路磁珠法检测原理示意图二、工作原理——磁珠法返回目录又称为生物化学方法，主要是通过测定产色物质的吸光度变化来推算所测定物质的含量。人工合成多肽待测凝血因子人工合成多肽产色基团释放+产色基团发色底物法检测原理使溶液呈色呈色深浅与凝血因子活性成比例定量分析获得凝血因子活性二、工作原理——发色底物法返回目录利用抗原抗体的特异性结合反应来对被检物质进行定性或定量的测定。包被后的抗体与抗原结合后形成的复合物体积增大，引起透射光的变化，由吸光度变化推算出所检测物质的含量。血凝仪使用的是免疫比浊法二、工作原理——免疫分析法返回目录磁场磁场加血样本磁场磁场仪器光电检测器记录光亮变化定量测定干化学技术检测原理示意图试剂板试剂板颗粒振动幅度改变发色底物法该法主要应用于床旁即时检测的便携式血凝分析仪二、工作原理——干化学技术返回目录•半自动血凝仪的基本结构–主要由样本和试剂预温槽、加样器、检测系统（光学、磁场）及微机组成•全自动血凝仪基本结构–包括样本传送及处理装置、试剂冷藏位、样本及试剂分配系统、检测系统、计算机、输出设备及附件等三、基本结构返回目录•主要性能指标•性能评价–一般性能评价–技术性能评价：包括精密度、正确度、携带污染、线性范围、干扰、可比性分析等•不同血凝仪结果比对四、性能指标与评价返回目录五、检测流程返回目录开机运行质控检查仪器