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酶反应条件的选择知识背景•酶的化学本质是蛋白质,与一般催化剂一样,只能催化热力学允许的化学反应,但又具有不同于一般催化剂催化反应的特点和反应机制•酶具有不稳定性,酶促反应的速率受酶浓度、底物浓度、pH、温度、抑制剂及激活剂有关。一、温度•实验原理:•一、尿素在酸、碱、酶作用下(酸、碱需加热)能水解成氨和二氧化碳•新鲜大豆中含有较高活性的尿素酶,可以水解尿素生成NH3•CO(NH2)2+H2O------2NH3+CO2•尿素养在尿素酶作用下,在中性或酸性环境下生成碳酸胺,在NaOH环境下生成Na2CO3和NH3、NH3与纳氏试剂作用,生成棕黄色碘化双汞胺•尿素酶•CO(NH2)2+H2O------------(NH4)2CO3------------NH3••NH3+纳氏试剂(HgI2.2KI)------------NH2.Hg2I3•(棕黄色)二、pH•淀粉水解产物与碘液反应生成不同的颜色反应•淀粉+碘生成蓝色•糊精+碘根据水解程度,由紫色到橙色,水解越彻底,颜色越浅,直到生成无色糊精(碘不显色)麦芽糖、葡萄糖遇碘不显色三、激活剂和抑制剂•尿素酶为巯基酶,重金属离子可与其巯基结合而使尿素酶的活性丧失。•氯化钠为唾液淀粉酶的激活剂,硫酸铜为其抑制剂。唾液淀粉酶可催化淀粉生成各种不同大小的糊精及麦芽糖。不同大小的糊精遇碘呈现不同颜色,可用颜色淀粉水解程度,从而研究激活剂和抑制剂的影响。实验材料•器材:•控温水浴锅(每个实验室3个)•制冰机•电磁灶•不锈钢锅•白瓷板•试管、滴管、移液管(1-2ml)•烧杯•试剂:•蒸馏水•1%淀粉液•1%蔗糖液•0.1%尿素液、大豆尿素酶溶液•0.1%CuSO4、0.1%HgCl2、0.1%NaCl•1MNaOH、0.5MH2SO4•纳氏试剂•碘液•各种pH缓冲液:5.0;6.8;8.0、唾液淀粉酶应用液的制备(1)每人取一个干净的饮水杯,装上蒸馏水。(2)先用蒸馏水漱口,将口腔内的食物残渣清理干净。(3)口含约20mL蒸馏水,做咀嚼动作1-2min,以分泌较多的唾液。然后将口腔中的唾液吐入一个干净的小烧杯中。.温度对酶活性的影响(1)取3支试管,按表4-2进行实验。(2)按上述表格进行试验,实验完成后,比较各试管中黄红色的深浅。取尿素液与尿素酶液尿素液预温尿素酶溶液温度时间冷却纳氏试剂【1】20滴冰水10滴冰水10min10滴【2】20滴55度10滴55度10min10滴【3】20滴100度10滴100度10min10滴3.pH对酶活性的影响%淀粉(mL)222不同pH的缓冲液(mL)pH5.02——pH6.8—2—pH8.0——2稀释唾液(滴)101010•(1)取3支试管,按表4-3编号后进行实验。取淀粉与唾液淀粉酶•摇匀后,将各管置37℃水浴中处理。•(2)每隔1min从pH6.8的试管中取1滴反应液滴于白瓷板上,随后滴加稀碘液1滴,观察颜色变化。•(3)待颜色呈棕色时,向各管中加稀碘液3滴。观察各管颜色,比较各管中淀粉水解的程度。、唾液淀粉酶的激活剂和抑制剂(1)取3支试管,按下表编号后进行实验。(2)将各管摇匀后,一起放入37℃水浴保温。(3)每隔1min从第2支试管中取出1滴反应液滴于白瓷板上,滴加稀碘液1滴,观察其颜色变化。(3)待颜色呈棕色时,向各管中加稀碘液1-3滴。观察各管颜色,比较各管中淀粉水解的程度。尿素液氯化高汞溶液尿素酶溶液氯化高汞溶液纳氏试剂【1】20滴1滴充分10滴55度保温冷却10滴【2】20滴混匀10滴10min2滴10滴按上述表格中的顺序进行操作
本文标题:酶活性的影响因素
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