单宁含量测定(三种方法)

不同方法测定单宁（tannin）含量的比较研究测定单宁含量的方法一、比色法二、EDTA络合滴定法三、高锰酸钾滴定法三种方法的比较方法一、比色法一、实验目的了解单宁的性质及熟练掌握单宁含量的测定方法二、实验原理样品中的单宁在碱性溶液中将磷钨钼酸还原，生成深蓝色化合物，其颜色的深浅与单宁的含量成正比，可与标准进行比较定量。三、材料、仪器与试剂1、材料：香蕉（未熟透）50g2、仪器：天平组织捣碎机烧杯移液管分光光度计容量瓶恒温箱（30℃）3、试剂：①标准单宁酸溶液（0.5mg/mL）：准确称取标准单宁酸50mg，溶解后用水稀释至100mL，用时现配。②F-D(Folin-Donis)试剂：称取钨酸钠（Na2WO4·H2O）50g、磷钼酸10g，置于500mL锥形瓶中，加375mL水溶解，再加磷酸25mL，连接冷凝管，在沸水浴上加热回流2h，冷却后用水稀释至500mL。③60g/L偏磷酸溶液。④1mol/L碳酸钠溶液：称取无水碳酸钠53g，加水溶解并稀释至500mL。⑤95%和75%乙醇溶液。四、实验步骤1、标准曲线的绘制按下表编号，分别加入试剂于50mL容量瓶，加完后，剧烈振摇，以蒸馏水稀释至刻度，充分混合，于30℃恒温箱中放置，1.5h后，用分光光度计在波长680处测定吸光值，并绘制标准曲线。101010101010101mol/l碳酸钠溶液/ml2.52.52.52.52.52.52.5F-D试剂/ml25252525252525蒸馏水/ml0.10.10.10.10.10.10.160g/L偏磷酸溶液/ml1.71.71.71.71.71.71.7乙醇（75%）/ml1.00.80.60.40.20.10标准单宁溶液/ml66554433221100管号试剂101010101010101mol/l碳酸钠溶液/ml2.52.52.52.52.52.52.5F-D试剂/ml25252525252525蒸馏水/ml0.10.10.10.10.10.10.160g/L偏磷酸溶液/ml1.71.71.71.71.71.71.7乙醇（75%）/ml1.00.80.60.40.20.10标准单宁溶液/ml66554433221100管号试剂2、样品测定果实去皮，迅速称取50g，加入95%乙醇50mL、偏磷酸50mL、水50mL，置于高速组织捣碎机中打浆1min（或在研钵中研磨成浆状）。称取匀浆20于100容量瓶中，加75%乙醇40mL，在沸水浴中加热20min，冷却后用75%乙醇稀释至刻度。充分混合，以慢速定量滤纸过滤，弃去初滤液。吸取上述滤液2置于已盛有25mL蒸馏水、2.5mLF-D试剂的50mL容量瓶中，然后加入，剧烈振摇后，以水稀释至刻度，充分摇匀（此时溶液的蓝色逐渐产生）。同时做空白试验。于30℃恒温箱中放置后，用分光光度计在波长处，以试剂空白调零，测定吸光值。四、结果计算式中:x—样品中单宁的质量分数，%；c—比色用样品溶液中单宁的含量（由标准曲线查得），μg；m—样品质量，g；K—稀释倍数，如按上述方法取样50时，K=（20/200）×（2/100）=1/500五、注意事项1、样品处理时要尽快进行，以免单宁氧化而造成误差。2、维生素C也能与F-D试剂作用产生蓝色，因此当样品含有维生素C时需要进行校正，1㎎维生素C相当于0.8㎎单宁酸。610100cxmK方法二、EDTA络合滴定法一、实验目的了解单宁的性质及熟练掌握单宁含量的测定方法二、实验原理根据单宁可与重金属离子形成络合物沉淀的性质，在样品提取液中加入过量的标准Zn(Ac)2溶液，待反应完全后，再用EDTA标准溶液滴定剩余的，根据EDTA标准溶液的消耗量，可计算出样品中单宁的含量。三、材料、仪器与试剂1、材料：香蕉（未熟透）5g2、仪器：容量瓶电子天平研钵碱式滴定管3、试剂：①1.000mol/L醋酸锌标准溶液：准确称取Zn(Ac)2·H2O21.95g,用水溶解后定容至100mL。②0.0500mol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA）标准溶液：准确称取乙二胺四乙酸二钠9.306g,溶解于水，并用水稀释至500mL.③pH=10的NH3-NH4Cl缓冲溶液：称取54gNH4Cl加水溶解后加入浓氨水350mL,用水定容至1000mL。④铬黑T指示剂：称取0.59铬黑T，溶于10mLpH=10的NH3-NH4Cl缓冲溶液中，用95%乙醇定容至100mL。四、实验步骤1.样品处理称取切碎混匀的样品5~10g，置于研钵中，加少许石英砂研磨成浆状（干样品经磨碎过筛后，准确称取1~2g），转入150mL锥形瓶中，用50mL水分多次洗净研钵，洗液一并转入锥形瓶中，振动、提取10~15min.2.络合沉淀在100mL容量瓶中，准确加入Zn（Ac）2标准溶液5mL、浓氨水3.5mL，摇匀（开始有白色沉淀产生，摇动使沉淀溶解）。慢慢将提取物转入容量瓶中，不断振摇，在35℃水浴中保温20~30min.冷却，用水定容至100mL，充分混匀，静置、过滤（处滤液弃去）。3.滴定准确吸取滤液10mL，置于150mL锥形瓶中。加水40mL、NH3-NH4Cl缓冲溶液12.5mL、铬黑T指示剂10滴，混匀。用0.0500mol/L的ＥＤＴＡ标准溶液滴定，溶液由酒红色变为纯蓝色金额为终点。四、注意事项1.单宁遇Fe3+会发生颜色反应，因此处理样品时，不能与分歧接触，切碎样品应采用不锈钢刀。2.单宁容易被氧化，样品处理后应立即进行测定。同时要注意控制加热温度，加热过程中要加些摇动数次，意识反应完全。４．结果计算1122(10)0.1556100cVcVxm式中:χ——样品中单宁的质量分数，％Ｃ１——Ｚｎ（Ａｃ）２标准溶液的浓度，ｍｏｌ／ＬＶ１——吸取Ｚｎ（Ａｃ）２标准溶液的体积，mLＣ２——EDTA标准溶液的浓度，ｍｏｌ／ＬV2——滴定时消耗ＥＤＴＡ标准溶液的体积，mL0.1556——由实验得出的比例常数，ｇ／ｍｍｏｌｍ——样品质量，ｇ10——分取倍数，及样品络合沉淀后定容至100mL，吸取其中的1/10进行滴定。方法三、高锰酸钾法一、目的了解单宁性质及熟练掌握单宁含量的测定方法二、原理作为多酚，单宁是一种强还原剂，极易被氧化剂氧化，还可被活性炭吸附。本测定以高锰酸钾为氧化剂，根据样品中单宁可以被活性炭吸附，测定样品液用活性碳吸附前后的氧化值之差，计算单宁物质的含量。三、材料、仪器与试剂1、材料：香蕉（未熟透）2、仪器：天平研钵烧杯（50、100mL）漏斗滤纸（Φ15㎝）2张刻度试管（5、10mL）三角瓶（100mL）量筒10mL25mL碱式滴定管容量瓶100mL恒温水浴锅50℃3、试剂①0.01mol/LKMnO4标准溶液：称取约1.60gKMnO4溶于1000mL蒸馏水中，盖上表面皿，加热至沸并保持微沸状态约1h。冷却后，放暗处约一周后用垂熔玻璃漏斗或玻璃丝过滤。将滤液转至棕色瓶内暗处保存。用NaC2O4标定KMnO4。②2.5mol/L硫酸溶液：取138.8mL浓硫酸稀释至1000mL。③活性炭四、操作步骤1、称取5g样品在研钵中研磨成匀浆，用漏斗转移容量瓶定容至100mL，混匀后用干燥滤过滤，保留滤液。2、吸取样品滤液5.0mL，于100mL三角瓶中，加10mL水和5mL2.5mol/LH2SO4，混匀，微热（50℃）5min后用0.01mol/LKMnO4标准溶液滴定至淡粉色维持30s不褪色即为终点，记下消耗的体积V1，重复一次做两个平行样。3、吸取样品滤液5.0mL，于100mL烧杯中，并加3g活性炭，加热搅拌10min，过滤用少量的热蒸馏水冲洗残渣，收集的滤液中加2.5mol/L硫酸5mL，同样用0.01mol/LKMnO4标准溶液滴定至终点，记下消耗的体积V2,重复一次做两个平行样。12()0.04157100cVVxm式中：C——KMnO4摩尔浓度，mol/LV1——滴定样品消耗KMnO4的毫升数，mLV2——活性碳吸附单宁后所消耗的KMnO4的毫升数，mLW——样品克数，g0.0416——1mL0.01mol/LKMnO4溶液相当于单宁的毫克数，mg六、记录实验结果项目样品活性碳吸附后样品消耗VKMnO4（mL）平均消耗VKMnO4（mL）单宁含量（mg/100g）七、注意事项1、过滤时由于溶液粘度大，过滤缓慢，只保留接下来的10mL滤液，以部分代整体。且过滤时要用干燥滤纸。2、开始滴定时反应速度慢，待溶液中产生了Mn2+后，由于Mn2+的催化作用，加快了反应速率，故能顺利地滴定到呈现稳定的淡粉色为终点，因而此反应称为自动催化反应，稍过量的滴定剂本身是紫红色即显示终点。单宁（tannin）是涩味（acerbity）的重要代表物，食品化学分析中有多种测定单宁含量的方法。