Thermo-TSQ-Quantum液质联用仪操作规程

TSQQuantum液质联用仪操作说明Step1.使用LC-MS/MS前的准备工作1.查阅文献，获得目标分析物质或相近物质的液质条件。2.阅读ThermoAccelaUPLC操作说明，熟悉UPLC的操作方法及注意事项。3.检查线路是否连接完好。检查流动相是否充足，不足则根据要求添加。4.有机流动相必须为进口HPLC级，水相可使用Millipore纯水机出水或娃哈哈屈臣氏纯净水。流动相中添加的酸或胺类物质必须为色谱纯，其中水相需每天更换以保持新鲜。5.标样和样品在使用前必须用0.2μm的针头式滤器（进口非分装）过滤。6.在做LC/MS/MS之前，需将样品放置在样品托盘上，并记录相应的位置。且第一个和最后一个样品为空白采用不含盐或酸的流动相做样，用于清洗进样系统及管路。本操作说明适用于ThermoFisherScientificTSQQuantum液质联用仪，介绍了包括SurveyorAS自动进样器,SurveyorLCPump,SurveyorMSPump,AccelaPump溶剂输送泵,TSQQuantum系列三重四极杆质谱仪及其工作站的使用方法。主要包括以下内容：第1页Step2.开机、关机方法第6页日常维护第6页Step7.分析结束页码任务第6页注意事项第5页Step6.样品报告生成第3页第3页第4页Step5.定量数据处理Step5.1定量数据处理方法建立Step5.2定量数据处理及定量结果浏览第3页Step4.样品序列建立及样品分析第2页第2页第2页Step3.LC-ESI/MS/MS分析方法建立Step3.1化合物ESI/MS/MS质谱条件优化建立Step3.2化合物LC/MS/MS方法建立第1页Step1.使用LC-MS/MS前的准备工作第1页Step2.开机、关机方法Step2.1开机方法Step2.2关机方法1.打开质谱电源，即打开质谱主电源开关（MainPowerSwitch）至On（/）位置；2.打开真空开关（VacuumSwitch）在Operational状态；真空开关开启约一小时后，打开电子开关ElectronicsServiceSwitch）在Operational状态；3.用密封垫或者放电针堵上离子传输毛细管；4.打开数据处理系统，即打开计算机和打印机；5.双击桌面图标，打开QuantumTuneMaster界面；6.单击QuantumTuneMaster界面上图标，查看质谱状态，确认IonGaugePressure小于5×10-6Torr。7.打开液相部分各模块电源。1.双击桌面图标，打开QuantumTuneMaster界面，将质谱设置为待机Standby状态;2.关闭电子服务开关(ElectronicsServiceSwitch);3.关闭真空开关(VacuumSwitch);4.3分钟后关闭质谱主电源开关(MainPowerSwitch)至Off(O)位置；5.关闭液相部分各模块电源。主电源开关电子开关真空开关Step3.1化合物ESI/MS/MS质谱条件优化建立Step3.LC-ESI/MS/MS分析方法建立1.双击桌面图标，打开QuantumTuneMaster界面；2.在TuneMaster中界面上，选择菜单Workspace,选择CompoundOptimizationWorkspace按钮，显示CompoundOptimization工作界面;3.使用标示了“Sample”字样的进样针及管线，按照优化要求连接管线，并选择合适的标样浓度。4.设置优化参数:A.选择OptimizationModes(优化模式):MSOnly按钮;B.在OptimizationMass列表中，输入母离子质量数;C.在优化参数列表中，选择(9)优化的参数(SprayVoltage,Sheathgaspressure,Auxgaspressure,Tubelensoffset,Skimmeroffset);D.单击Start按钮，开始优化;优化结束后,选择Accept按钮;E.选择OptimizationModes(优化模式):MS+MS/MS按钮;F.在OptimizationMass列表Numproduct列中，输入子离子个数(1~8);G.在优化参数列表中,选择(9)优化的参数(Collisionenergy);H.单击Start按钮,开始优化;优化结束后,选择Accept按钮;I.参数优化完成,保存质谱方法:选择Savetuneas按钮,选择保存位置,输入文件名称,保存质谱方法(.TSQTune文件);J.单击定义扫描模式Definescan快捷图标,在扫描模式区单击鼠标右键,选择Copyscanevent.C,G.优化参数列表D,H.Start按钮(优化结束后变为Accept按钮)B.OptimizationMass列表E.优化模式MS+MS/MSA.优化模式MSOnlyF.Numproduct列J.扫描模式DefinescanI.保存质谱方法SavetuneasStep3.2化合物LC/MS/MS方法建立1.双击桌面上Xcalibur快捷图标,打开Xcalibur工作站;2.在XcaliburRoadmap主页上,点击InstrumentSetup按钮,建立LC/MS/MS方法;3.设置液相色谱部分参数:A.Surveyor液相泵的参数设置:1)点击InstrumentSetup窗口中Surveyor(Accela)pump图标;2)输入A,B,C,D流动相名称，ColumnDescription(色谱柱标注);3)设置流动相条件(流动相比例,流速等).B.Surveyor自动进样器参数设置:1)点击InstrumentSetup窗口中的Surveyor(Accela)AS图标;2)输入WashVolume(如400μl),FlushVolume(如400μl);4.设置质谱部分(TSQQuantum)参数:1)点击InstrumentSetup窗口中的TSQQuantum图标;2)单击Pastescanevent按钮.5.LC/MS/MS方法保存:单击File菜单,选择SaveAs,选择保存路径并输入文件名称,保存方法(.Meth文件).3.A.Surveyor(Accela)pump图标4.TSQQuantum图标3.B.Surveyor(Accela)AS图标2.XcaliburRoadmap主页2.InstrumentSetup按钮,LC/MS/MS方法建立2.SequenceSetup按钮,建立样品序列第2页3.A,B,C,D流动相溶剂名称3.洗脱方法4.PasteCopyEventStep4.样品序列建立及样品分析1.在XcaliburRoadmap主页上,点击SequenceSetup按钮,建立样品序列;2.序列建立:A.选择样品类型SampleType:Unknown,QC,Blank,StdBracket.B.输入文件名称FileName:可以手动输入,也可点击鼠标右键浏览,选择已经存在的文件的文件名;C.设定文件保存路径Path:双击鼠标左键(或者点击鼠标右键,选择Browser,设定文件保存路径;D.选择分析方法InstMeth:双击鼠标左键(或者点击鼠标右键,选择Browser,打开Step1.2中所建立的分析方法;E.设定样品瓶在进样器中的位置Position:A:1-A:40,B:1-B:40,C:1-C:40,D:1-D:40.E:1-E:40;F.输入进样体积;G.保存序列:单击File菜单,选择SaveAs,选择保存路径并输入序列文件名称,保存序列(.Sld文件)。3.样品分析:A.运行单个样品:在Sequence序列表中鼠标点击选择需要运行的样品，单击按钮,在出现的界面中输入操作人员姓名User,设定样品运行结束后仪器状态AfterSequenceSetSystem(On,仪器仍在扫描状态,Standby,仪器处在待机状态,Off,仪器关机),单击OK,开始进样分析;B.运行多个样品:单击按钮,在出现的界面中,输入操作人员姓名User,在RunRows空格中输入要运行的样品范围(在序列表中的行标,如1－6),设定样品运行结束后仪器状态AfterSequenceSetSystem(On,仪器仍在扫描状态,Standby,仪器处在待机状态,Off,仪器关机),单击OK,开始进样分析.4.样品运行时可将界面切换到实时监测界面:点击按钮进行界面切换.1.XcaliburRoadmap主页2.SequenceSetup按钮,建立样品序列2.A.样品类型2.B.文件名称2.C.文件保存路径2.D.分析方法2.E.样品位置2.F.进样体积3.A.运行单个样品3.B.运行多个样品3.A.操作人员姓名User3.B.运行多个样品的范围(输入序列行标范围)3.B.设定样品运行结束后仪器状态4.切换到实时监测界面Step5.定量数据处理Step5.1定量数据处理方法建立1.在XcaliburRoadmap主页上,点击ProcessingSetup按钮,建立定量数据处理方法;2.设置定量方法:A.定义色谱方法:单击Option菜单,单击Chromatographyby,选择液相色谱方法LC,点击OK;B.定义定量方法(内标法,外标法):单击Option菜单,单击Calibrationby,选择定量方法(内标法,InternalStandard,外标法ExternalStandard),点击OK;C.打开一演示数据文件:单击File菜单,选择OpenRawFile,打开一原始数据文件(在要作定量处理的数据中选择一个,最好是打开一个标样的数据文件);1.XcaliburRoadmap主页1.ProcessingSetup按钮,建立定量数据处理方法4.定量结果浏览2.Option菜单2.A.定义色谱方法2.B.定义定量方法2.B.外标法2.B.内标法2.A.LC第3页3.设置定量方法(内标法)参数:A.定量组分的识别Identification参数:设定定量组分的名称Name(下拉菜单中选择New,直接输入该组分名称),扫描方法Filter(下拉菜单中选择该组分对应的扫描方法),点击OK,输入保留时间Retentiontime,点击OK(如果是多组分定量,点击Name栏内下拉菜单,选择NEW,输入第二个组分名称,其他参数设定相同).B.内标物的识别Identification参数:在Name下拉菜单中选择New,直接输入内标物名称,扫描方法Filter(下拉菜单中选择内标物对应的扫描方法),点击OK,输入内标物保留时间Retentiontime,点击OK;C.内标物积分参数设定Detection:单击Detection缺省菜单,输入内标物各积分参数,点击OK;D.定量组分积分参数设定Detection:点击界面右上角组分(Components)列表栏内定量组分的名称,输入该组分各积分参数,点击OK;E.校正曲线Calibration参数设定:单击Calibration缺省菜单;F.点击界面右上角组分(Components)列表栏内内标物的名称,定义其为内标物:在组分类型Componenttype栏内选择ISTD,点击OK;G.点击界面右上角组分(Components)列表栏内定量组分的名称,在Targetcompounds栏内,ISTD的下拉菜单中选中内标物,点击OK;H.标准溶液浓度Levels设定:单击Level缺省菜单,在左侧浓度列表内,CalLevel列内从上到下依次输入每个浓度的代号(如1,2,3···,或cal-1,cal-2,cal-3···,或者A,B,C···等等),Amount列内从上到下依次输入各标准溶液浓度值,单击OK,定量方法(内标法)建立完成.I.保存方法:单击File菜单,选择SaveAs,选择保存路径并输入文件名称,保存方法(.pmd文件).4.设置定量方法(外标法)参数:A.定量组分的识别Identification参数:设定定