第四章-无菌系的建立

第四章无菌系的建立Madebylionchp一外植体预处理•地方：准备室•预处理流程：1.外植体在去污消毒剂（KMnO4、洗衣粉等）中泡10min左右：去外植体表面泥土、细菌等2.流水冲洗：洗去去污消毒剂3.将所需组织（叶、芽、茎）切下：待用二工作台上外植体深度灭菌•地方：超净工作台上•流程：1.切下的组织放入消毒瓶在75%酒精中泡约5s：使表面细菌脱水死亡，但不可时间过长，防组织脱水死亡，75%酒精可杀菌（破坏蛋白、脱水）2.组织在0.1%升汞（HgCl）中泡10min左右：可加入几滴TWeen-20、TWeen-80染料加强杀毒力，此步用于外植体表面终极灭菌3.升汞倒入废液缸（不可直接倒入池子），消毒瓶中：外植体用无菌水涮洗多次，洗去残余升汞三工作台无菌系的建立•超净工作台的使用：1.打开通风系统：工作台边按钮2.关闭紫外灯：工作台边按钮3.就座：凳子尽量靠近工作台，利于无菌操作•人手的消毒1.点酒精灯：酒精灯不能离人太近，也不能离太远2.喷酒精到手上，两手搓干：使酒精在手上分布均匀且挥发掉，也可用酒精棉球擦手搓干•器具的消毒：眼科刀、镊子：器具上喷酒精，在酒精灯外焰上烤接种盘：器具上喷酒精，用无菌纱布擦干擦匀，用消毒后的镊子夹住盘子，在酒精灯外焰上烤接种环、针：在外焰上灼烧，使前端铂丝环、针头烧红，要注意拐角处难烧到的部位要更细心的烧，柄也要烧（操作时，柄要插入容器内）※接种室无菌系的建立打扫：扫除废纸、垃圾、灰尘甲醛熏蒸：紫外灯灭菌：打开紫外灯通宵（晚上紫外杀菌能力强，原因？）△培养室无菌系的建立：同上※使用前，工作台无菌系的建立：1.打开工作台通风系统2.工作台各部位喷酒精：纱布擦干3.打开工作台上的紫外灯：紫外灯照射10min后可使用※重点总结•外植体预处理：地方、预处理流程•外植体在工作台上的深度灭菌：流程、步骤•工作台上无菌系的建立：超净工作台的使用、人手消毒、器具消毒△接种室无菌系的建立：打扫、甲醛熏蒸、紫外灯灭菌