Waters高效液相(Waters e2695 2489 Emp2)使用维护和校正-WX-R1

DocumentNo.:FQC01002VersionNo.:01Page1of7Title:Waters高效液相(Waterse26952489Emp2)使用维护和校正EffectiveDate:2009.09.20FarmtecResearchCo.,Ltd.Page1of7FarmtecResearchCo.,Ltd.WrittenBy:ReviewedBy:ApprovedBy:RevisionHistoryCCRNumberRevisionEffectiveDateSummaryofChangesDocumentNo.:FQC01002VersionNo.:01Page2of7Title:Waters高效液相(Waterse26952489Emp2)使用维护和校正EffectiveDate:2009.09.20FarmtecResearchCo.,Ltd.Page2of7FarmtecResearchCo.,Ltd.本文件所包含的章节和修订记录本如下：1.目的2.适用范围3.参考4.职责5.安全6.操作7.保养8.注意事项9.校正修订记录表1.目的建立HPLC（Waterse2695/2489/Emp2）的使用、维护和校正方法2.适用范围适用于所有此仪器的使用、维护和校正人员3.参考Waterse2695/2489/Emp2的操作手册。4.职责实验员应严格遵照该操作规程，主管负责监督本规程的实施5.安全实验人员应穿戴实验服，配戴乳胶手套6.操作6.1开机6.1.1首先确认所有的电源插头已插好，开启e2695的开关，仪器开始自检（4-5min），待屏幕上方出现“Idle”字样，表示自检成功6.1.2开启2489的开关，进入仪器的自检状态，面板显示一系列自检过程，约5分钟，通过自检后显示吸光度主屏幕。6.1.3在2695屏幕上，进入status界面，选中要用的通道，设定“100%”，然后点击DirectFunction，再点击WetPrime清洗通道,将每一个会用到的溶剂通道按照上述操作一次。6.1.4打开电脑，使用相应用户名及密码登陆Windows。6.1.5双击图标打开仪器软件（Empower2）。6.2数据的采集6.2.1进入运行样品DocumentNo.:FQC01002VersionNo.:01Page3of7Title:Waters高效液相(Waterse26952489Emp2)使用维护和校正EffectiveDate:2009.09.20FarmtecResearchCo.,Ltd.Page3of7FarmtecResearchCo.,Ltd.6.2.2在出现的页面的左框中选择欲数据储存的‘项目’，在右框中选择所需的仪器系统，然后单击“确定”。6.2.3出现“运行样品”窗口后，在“编辑”菜单中，选择“新建方法组”。6.2.4出现对话框，单击“是”，选择使用向导来创建方法。6.2.5出现“新方法组-选择仪器方法：，可以在现有的仪器方法中选择一个，或单击“新建”来创建新的仪器方法。6.2.5.1如果单击了“新建”，会出现仪器方法编辑器。6.2.5.2可根据需要编辑每个仪器的参数。6.2.5.3编辑仪器参数完成后单击“文件-保存”或“另存为”，出现“保存仪器方法”对话框，输入仪器方法名，单击保存，保存该仪器方法。6.2.5.4关闭“仪器方法编辑器”窗口。6.2.5.5新建的仪器方法出现在仪器方法列表中。6.2.6选中所要的仪器方法，单击“下一步”，出现“选择缺省方法”页。6.2.7选择“处理方法”与“报告方法”，如尚未建立合适的方法，也可不选，单击“下一步”，出现“命名方法组”，输入方法组名，必要时输入注释后，单击“完成”。6.2.8出现“方法组编辑器”，可根据需要进行编辑，或者暂不编辑，然后关闭窗口，回到运行样品窗口。6.2.9在“方法组”下拉菜单中选择欲使用的方法组，同时在右下方的“仪器方法”下拉菜单中，选择欲使用的仪器方法。6.2.10单击“监视器”键，观察基线。6.2.11待系统平衡后，可单击“停止键”，终止观察基线。6.2.12样品组编写好后，应请他人复核，并核对瓶号、仪器方法、方法组，复核人员应在仪器使用记录表的备注栏内写上“已复核”并签名加注日期。6.3进样6.3.1等到系统空闲后，设定采集的参数—样品名、功能、样品瓶以及样品体积与运行时间，最后单击“进样”。6.3.2当所有样品运行完成后，从菜单中选择“文件-退出”，结束运行样品的过程。6.4数据处理6.4.1单击鼠标左键进入“浏览项目”。6.4.2选择欲浏览数据所在的项目，然后单击“确定”，进入该项目。6.4.3在“通道”选项卡中选择欲处理的数据，单击查看打开。6.4.4单击处理方法向导，出现“处理方法向导”对话框，选择新建或者编辑现有的处理方法，然后单击“下一步”。6.4.5出现“新处理方法”对话框。6.4.6在“积分-峰检测1”中，设定峰宽或者接受缺省值，单击“下一步”。6.4.7在“积分-峰检测1”中，设定积分阈值或者接受缺省值，单击“下一步”。6.4.8在“积分-积分区域”中，直接输入保留时间或用鼠标左键拖曳放大选定积分区域，单击“下一步”。6.4.9在“积分-峰剔除”中，根据需要设定最小面积或最小高度，或者不作任何DocumentNo.:FQC01002VersionNo.:01Page4of7Title:Waters高效液相(Waterse26952489Emp2)使用维护和校正EffectiveDate:2009.09.20FarmtecResearchCo.,Ltd.Page4of7FarmtecResearchCo.,Ltd.改动，单击“下一步”。6.4.10在“校正-普通”页中，除了特定要求外，接受缺省选项，单击“下一步”。6.4.11出现对话框，选择“否”。6.4.12在“校正-名称和保留时间”页中，在名称栏中，输入组分的名称或不作改动，单击“下一步”。6.4.13“校正-缺省量”页中，单击“下一步”。6.4.14“校正-内标样”页中，接受缺省选项，单击“下一步”。6.4.15在“处理方法名”中输入方法名，必要时输入注释后，单击“完成”结束处理方法向导。6.4.16在主窗口中，“峰”表中出现积分结果，同时将组分名称及保留时间标记在色谱图上。6.4.17单击“方法组”图标，出现方法编辑器。6.4.18在处理方法下拉框中，选择刚才建立的处理方法或者根据需要选择其他的处理方法。6.4.19如希望加入采集仪器方法，则可在仪器方法下拉菜单中选择指定的方法后，单击“文件”保存方法组。6.4.20出现对话框，输入方法组的名称，单击保存即可。6.4.21单击全部保存，进行保存。6.4.22关闭窗口。6.5定量计算6.5.1回到“通道”选项卡，选中要处理的全部样品，然后单击鼠标右键出现快捷菜单，选“处理”。6.5.2出现“后台处理及生成报告”对话框。6.5.3在“处理”中，选“使用指定的方法组”，并在下拉菜单中选择刚才利用向导建立的方法组，使“打印”和“导出”方框为空，并在“清除校正”方框中打勾，单击“确定”。6.5.4在本“项目”窗口中选中“结果”选项卡。6.5.5单击“更新”键更新结果。6.5.6选中欲浏览的结果，单击查看，出现查看主窗口。6.5.7在打开的“查看”窗口中可以观察计算的“含量”结果。6.5.8窗口的上部为曲线方程的回归系数等内容，可通过下拉菜单，查看不同组分的相关信息。6.6数据的打印6.6.1单击鼠标左键进入“浏览项目”。6.6.2选择欲打印数据所在的项目，然后单击确定，进入该项目。6.6.3在“结果”选项卡中选择欲打印的结果，单击预览出版。6.6.4出现“打开报告方法”对话框。6.6.5选择“使用对选中的数据适用的报告方法”。或者在“使用以下的报告方法”下拉菜单中选择适当的报告方法，然后单击“确定”。6.6.6在屏幕的右侧即出现报告，如欲在打印前预览，单击打印报告预览。6.6.7如预览后无误，单击打印，打印报告。DocumentNo.:FQC01002VersionNo.:01Page5of7Title:Waters高效液相(Waterse26952489Emp2)使用维护和校正EffectiveDate:2009.09.20FarmtecResearchCo.,Ltd.Page5of7FarmtecResearchCo.,Ltd.6.7清洗色谱柱及管路分析结束后，保持原流动相冲洗两倍以上的保留时间(至少半小时)，再依据样品的流动相性质，将流动相改为相应的清洗溶剂（依据所分析样品的流动相性质选用，通常涉及使用水溶液的用超纯水，有机系统可直接用甲醇），冲洗约60ml后，再改用甲醇冲洗约30ml，待系统正常后，关闭色谱工作站，关闭HPLC各部件电源及电脑。6.8记录实验结束填写记录，除去杂物，整理干净。7.保养7.1仪器基本资料和规格见附件二。7.2擦拭仪器外表，保持清洁。7.3柱子使用后需保存在合适的环境中以便下次使用。7.4Pump使用过结晶性或缓冲液的流动相之后必须用水清洗。7.5Plunger及Seal若磨损时，应更新以免产生误差（会有漏液现象）。7.6每周定期由指定人员进行清洁保养并留记录。（见附件3）。8.注意事项8.1仪器应避免放在有腐蚀性气体或易振动的地方，应置于温度10-40℃且具温度调节的地方。8.2仪器应有“接地”装置，并有“稳压”装置供应电源。8.3使用当中切勿搬动，以免损坏仪器。8.4若需维修仪器时，切勿自行拆卸装置，以免损坏零件。9.校正9.1校正周期：三个月。9.2校正程序9.2.1开机及准备9.2.1.1打开电脑，自检自动进行，当在2695分离单元上显示Idle后，系统自检结束。9.2.1.2PrimeNd/Wash检测，当在2695分离单元上显示Idle后，按Diag按钮，再按PrimeNd/Wash按钮，按Start按钮，开始进行Nd/Wash，结束后，按Close回到Diag。9.2.1.3PrimeSealWash：在Diag窗口，按PrimeSealWash，按Start按钮，开始进行SealWash，结束后，按Close回到Diag。9.2.2流速准确性DocumentNo.:FQC01002VersionNo.:01Page6of7Title:Waters高效液相(Waterse26952489Emp2)使用维护和校正EffectiveDate:2009.09.20FarmtecResearchCo.,Ltd.Page6of7FarmtecResearchCo.,Ltd.9.2.2.1流动相为超纯水9.2.2.2取经过校正的容量瓶和秒表备用，于管柱出口端（不接检测器）收集滴出的溶液。9.2.2.3分别设定流速于5.0，1.0，0.5ml/min，分别用25ml,10ml,10ml干燥容量瓶收集25ml,10ml,10ml，当流速稳定时开始计时，各执行三次，流速接受标准为±1.2%。9.2.3进样准确性9.2.3.1在样品瓶中装入1.5ml脱气后的超纯水，精密称定为W1。9.2.3.2流动相为甲醇，流速为1.0ml/min，柱温为25℃，样品室温度设定为25℃，（平衡15min后，温度计测实际值，查找对应的水密度ρ）进样体积为50μL，样品运行时间为0.1min。9.2.3.3连续进样6次后，取出样品瓶，精密称定为W2，每针进样量=（W1-W2）/6ρ,接受标准为49.0-51.0μL。9.2.4柱温准确度9.2.4.1温度范围由25℃上升至50℃。9.2.4.2升温幅度为5℃，并逐个测定，接受标准为偏差±1.5℃。9.2.5线性考察9.2.5.1配制0.025，0.035，0.05，0.07，0.1mg/ml五种浓度的Paracetamol,以流动相为溶剂。9.2.5.2用C18色谱柱，流动相水：甲醇70：30（V/V）,流速为1.0ml/min，进样量20μL，AUFS:1.0,于254nm处检测。9.2.5.3进样并记录各浓度样品的色谱峰面积。9.2.5