酵母实验方法

酵母实验安排准备工作：1活化酵母的平板培养基2摇菌用的液体培养基31.5ml离心管，250ml,500ml，1L三角瓶4去离子水5TE-LiAC，TE-LiAc-PEG,DMSO,1XTEbuffer6carrierDNA,目的质粒7水浴42℃，摇床，离心机等。酵母转化实验步骤：酵母细胞的准备：1AH109，BD-ASR酵母平板划线，活化，30℃培养2-4天2接种1ml培养基到1.5ml离心管中，加入2-4个酵母克隆（选择直径在2-3mm的酵母克隆，培养不超过1周），充分摇晃培养基，直到看不见细胞块存在；3在250ml烧瓶中加入50ml培养基，并加入1ml酵母菌液；30℃，225-250rpm，培养稀释过的菌液18-24h；4检测OD600值，OD600=1.2，大于1.2时，加入培养基稀释重摇，小于1.2时，培养1-2h再检测，超过24h仍然小于1.2时，重新摇菌；5在1L的烧瓶中添加300ml培养基，然后吸取50ml的酵母菌液加入，30℃培养3h，225-250rpm；6在1000rpm下离心5min，常温下获取细胞；7除去上清液，用50ml的去离子水重新旋起细胞；8在室温1000rpm离心5min细胞液；9除去上清，并用1.5mlTE-LiAC溶液旋起细胞；感受态细胞的转化：1carrierDNA制备，水浴煮沸carrierDNA20min,迅速放置在冰上冷却；2将100ul的酵母细胞均匀分在各个离心管中，使用直径较大的离心管；3在每个离心管中加入100ulcarrierDNA；4在每个离心管中加入100ng的目的质粒，为了双重转化，每种质粒加入200ng,使每管中质粒DNA总量达到400ng；5加入600ul的TE-LiAc-PEG溶液到每个离心管中，并涡旋混匀；6在30℃，200rpm，30min培养7每管中添加70ul的DMSO，慢慢混匀；842℃水浴条件下热激样品10min；9将样品放置在冰上10min;103000rpm离心样品10s，收集细胞11用标准移液枪移出离心管中所有上清，如果有必要，可以移出上清后在离心机上离心几秒，移出多余的上清液；12添加0.5ml1XTEbuffer，并涡旋使细胞重悬，如果除去上清时使细胞重悬，则需要用直径较大的枪头，降低吸液的压力。（可以重复几遍，清洗多余的DMSO）13用直径较大的枪头将细胞液加到选择培养基上。单转化在每板加入150ul细胞液；共转化事件在每板上加入125ul的转化细胞；14在30℃条件下培养平板2-4天，知道克隆出现；酵母质粒提取：