直立白薇活性成分及质量控制研究

上海交通大学硕士学位论文直立白薇活性成分及质量控制研究姓名：袁鹰申请学位级别：硕士专业：药剂学指导教师：张卫东20070101上海交通大学硕士学位论文摘要直立白薇CynanchumatratumBunge为萝藦科Asclepiadaceae鹅绒藤属CynanchumBunge植物，生于山地灌木丛中，在全国各地广有分布，特别是在东北三省，云南，贵州等地。具有清热凉血、利尿通淋、解毒疗疮的功效，临床上常用于温邪伤营发热、阴虚发热、骨蒸劳热、产后血虚发热、热淋、血淋、痈疽肿毒等症。现代药理研究表明，直立白薇的粗提物具有抗炎、平喘等生理活性。本文通过药理活性跟踪指导分离的方法，确定了直立白薇中具有抗炎镇痛作用的活性部位，并对其进行了重点分离。通过溶剂提取、萃取、AB-8树脂柱层析、HP-20树脂柱层析、硅胶层析、SephadexLH-20柱层析，RP-18低压柱分离，RP-18中压柱分离以及C18柱半制备，从中分离得到了32个化合物，并运用UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HMBC、HMQC、COSY、TOCSY、NOESY等光谱技术和物理、化学方法鉴定了其中24个化合物的化学结构，其结构分别为BW-1：β-谷甾醇BW-2：β-胡萝卜苷BW-3：豆甾醇BW-4：壬二酸BW-5：4-羟基苯乙酮BW-6：2,4-二羟基苯乙酮BW-7：棕榈酸BW-8：正十八烷酸BW-9：4-羟基苯甲醇BW-10：苯甲酸BW-11：β-香树素乙酸酯BW-12：2,6-二羟基苯乙酮BW-13：正三十二烷醇BW-14：cynatratosideCBW-15：cynatratosideD1上海交通大学硕士学位论文BW-16：cynatratosideEBW-17：4-羟基-3-甲氧基苯乙酮BW-18：glaucosideHBW-19：4',7-二羟基二氢黄酮BW-20：3,4-二羟基苯乙酮BW-21：glaucosideCBW-22：cynanversicosideABW-23：cynanversicosideCBW-24：α-香树脂醇对直立白薇化学成分进行研究的同时，我们还利用小鼠耳肿胀炎症模型和小鼠扭体镇痛模型对直立白薇的90%乙醇粗提取物及各提取部分进行抗炎镇痛活性跟踪筛选。结果显示，直立白薇的150，300mg/kg的90%乙醇粗提物和40，80mg/kg的氯仿部位经小鼠灌胃给药后，显示出显著的抗炎和镇痛的作用，从而确定直立白薇的抗炎镇痛的活性部位。此外，我们建立了HPLC-ELSD方法对药材的4个主要活性C21甾体皂苷成分BW-15,BW-16,BW-22和BW-23的含量测定进行研究，为直立白薇药材和制剂提供了质控依据。我们还比较了混淆品种徐长卿，白前与白薇色谱行为之间的差别，为对白薇鉴定提供科学依据。关键词：直立白薇，化学成分，药理活性，成分分析2上海交通大学硕士学位论文AbstractCynanchumatratumBunge,locallycalled‘paiwei’(Asclepiadaceae),asonespeciesoftraditionalChinesemedicine,widelydistributsallaroundChinaespeciallyinNorthChina,Yunnan,Guizhouprovinces.CynanchumatratumBungehasbeenusedasamedicineforthetreatmentofhecticfevers,acuteurinaryinfectionandabscessesforalongtimeinChina.MordenresearchonpharmacologyhaveindicatedthattheextractsofCynanchumatratumhavetheactivitiesofanti-inflammatory,analgesicactivity,anti-asthmaetal.Inordertostudyfurthertheresourceof“Paiwei”,toillustratethemechanismoftheanti-inflammatoryandanalgesicactivitiesandtofindmoreactivecompounds,weusethebioactivity-screeningonanti-inflammatoryandanalgesicactivitiestodeterminatetheactivefractions,andthentomaketheemphasesisolationofthisfraction.Weareconductingathoroughsolventextraction,usingnon-polarmacroreticularresinAB-8、HP-20、sephadexLH-20、ODS、HPLC、MPLC、silicagelchromatographyandsemi-preparativecolumns,weisolated32compoundsfromthechloroformfractionand24structuresofthemwereestablishedonthebasisofspectraldataincludingUV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HMBC、HMQC、COSY、TOCSY、NOESY,physicalandchemicalproperties,asfollows:BW-1：β-sitosterolBW-2：β-daucosterolBW-3：stigmasterolBW-4：azelaicacidBW-5：4-hydroxyacetophenoneBW-6：2,4-dihyroxyacetophenoneBW-7：palmiticacidBW-8：n-octadecilyacidBW-9：4-hydroxybenzenemethanolBW-10：benzoicacid3上海交通大学硕士学位论文BW-11：β-amyrinacetateBW-12：2,6-dihyroxyacetophenoneBW-13：dotroacotanolBW-14：cynatratosideCBW-15：cynatratosideDBW-16：cynatratosideEBW-17：4-hydroxy-3-methoxyacetophenoneBW-18：glaucosideHBW-19：4',7-dihydroxyflavanoneBW-20：3,4-dihyroxyacetophenoneBW-21：glaucosideCBW-22：cynanversicosideABW-23：cynanversicosideCBW-24：α-amyrinDuringresearchingthechemicalconstituentsofCynanchumatratumBunge,wealsouse90%ethanolextractsofCynanchumatratumandtheirpetroleumether,chloroform,n-BuOHandaqueousfractionstoevaluatetheanti-inflammatoryandanalgesicactiviesinmicewithearoedemainducedbyxylnenasinflammationmodel,andthewrithingtestinducedbyaceticacidasachemodelrespectively.Theresultsindicatesthatstomachperfusionpretreatmentofthe90%ethanolextract(150，300mg/kg)andchloroformfraction(40，80mg/kg)couldcausesignificantanti-inflammatoryandanalgesicactivities.Theseresultsindicatedthattheanalgesicandanti-inflammatoryactivitiesofCynanchumatratumwasconcentratedonchloroformfraction.Moreover,wedevelopedasimple,preciseandreproducibleHPLC-ELSDmethodforthequantificationof4activecompoundsBW-15,BW-16,BW-22andBW-23inmedicinalmaterialsimultaneously,whichisbeneficialforthequalitycontrolofthethemedicinalmaterial.AndwealsocompareCynanchumatratumBungewithCynanchumstauntonii,CynanchumpaniculatumthroughHPLC-ELSD4上海交通大学硕士学位论文method,whichishelpfulforthedeterminationofplantmaterial.KeyWords:CynanchumatratumBunge,chemicalconstituents,pharmacologyactivies,compoundsanalysis5上海交通大学硕士学位论文缩略语说明cymcymaropyranosylCOSYCorrelationSpectroscopyDEPTDistortionlessenhancementbypolarizationtransferDADDiodearraydetectorDMSODimethylsulfoxidedgndiginopyranosyldgtdigitoxopyranosyl2D-NMRTwo-DimensionalNuclearMagneticResonanceEI-MSElectronimpactionization-massspectrumESI-MSElectrosprayionization-massspectrumgluglucopyranosylHMBCH-detectedheteronuclearmultiple-bondcorrelationHMQCH-detectedheteronuclearmultiple-quantumcorrelationHPLCHighperformanceliquidchromatographyHREI-MSHighresolutionEI-MSHSCCCHigh-speedcounter-currentchromatographyIRInfaredabsorptionspectrummpmeltingpointNMRNuclearmagneticresonanceNOESYNuclearoverhauserenhancementspectroscopyoleoleandropyranosylthethevetopyranosylTLCThinlayerchromatographyTOCSYTotalcorrelationsoscopy6上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：袁鹰日期：2007年2月8日II上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许