抗生素残留量检查法标准操作规程

抗生素残留量检查法标准操作规程目录1目的...............................................................................................................................................22范围...............................................................................................................................................23职责...............................................................................................................................................24依据...............................................................................................................................................25定义...............................................................................................................................................26内容...............................................................................................................................................26.1说明.................................................................................................错误!未定义书签。6.2原理.................................................................................................................................26.3实验材料.........................................................................................................................26.4操作步骤.........................................................................................................................36.5判定标准.........................................................................................................................36.6注意事项.........................................................................................................................47相关文件.......................................................................................................................................48附件...............................................................................................................................................49变更历史记录...............................................................................................................................41目的1.1本规程规范了抗生素残留量检查法的操作过程。2范围2.1本规程适用于供试品中氨苄西林的残留量检查。3职责3.1质量检验人员：应严格执行本规程的规定。3.2质量保证人员：负责对本程序的执行进行监督、检查。4依据4.1《中国药典》2010年版三部，附录ⅨA，“抗生素残留量检查法”P59~P60。5定义N/A6内容6.1原理6.1.1抗生素残留量检查法是依据在琼脂培养基内抗生素对微生物的抑制作用，比较对照品与供试品对接种的试验菌产生的抑菌圈的大小，检查供试品中抗生素的残留量。6.2实验材料6.2.1仪器6.2.1.1生物安全柜6.2.1.2恒温培养箱6.2.1.3恒温水浴锅6.2.1.4游标卡尺6.2.2器具6.2.2.1牛津杯规格：内径6mm、外径8mm、高10mm6.2.2.2玻璃平皿规格：直径约90mm6.2.2.3试管及硅胶塞规格：18×180mm6.2.2.4吸管规格：10ml6.2.3标准物质6.2.3.1取氨苄西林对照品适量，用0.01mol/L的盐酸溶解，并稀释成每1ml中含氨苄西林10mg的溶液，作为氨苄西林对照品储备液，200ul/支无菌分装，-20℃保存，备用。6.2.4试剂、试液6.2.4.1磷酸盐缓冲液（pH6.0）称取磷酸二氢钾8.0g、磷酸氢二钾2.0g，加水溶解并稀释至1000ml，经121℃灭菌30分钟。6.2.4.2抗生素II号培养基：称取蛋白胨6g、牛肉提取粉1.5g、酵母浸出粉6g，加入适量水溶解后，加入琼脂13～14g，加热使之溶胀，滤过除去不溶物，加入葡萄糖1g，溶解后加水至1000ml，调节pH值使灭菌后为6.5～6.6；分装于玻璃管或锥形瓶中，经115℃灭菌30min，4℃保存。6.2.4.30.01mol/L盐酸溶液：取9ml浓盐酸，加纯化水至1000ml，混匀即得0.1mol/L的盐酸溶液，临用前取10ml加纯化水稀释至100ml，混匀即得。6.2.5实验菌种：6.2.5.1金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〔CMCC(B)26003〕6.3操作步骤6.3.1对照品溶液的制备6.3.1.1取氨苄西林对照品储备液1支，用磷酸盐缓冲液稀释成每1ml中含1.0ug的溶液。6.3.2菌悬液的制备6.3.2.1取金黄色葡萄球菌营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，35℃~37℃培养20~22小时。临用前，用适量的灭菌水将菌苔洗下，备用。6.3.3底层培养基制备6.3.3.1取直径约90mm的培养皿，注入已融化的抗生素Ⅱ号培养基约15~20ml，使在平皿内均匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层（临用前制备）。6.3.4菌层制备6.3.4.1取抗生素Ⅱ号培养基10~15ml置于1支50℃水浴预热的试管中，加入适量浓度的菌悬液300μl，混匀，注入已铺好底层的培养皿中，放置水平台上，冷却。6.3.5加样6.3.5.1在培养皿上等距离均匀放置牛津杯，向牛津杯中依次加入供试品溶液、阴性对照溶液（磷酸盐缓冲液）及对照品溶液。各200μl，将加好样的培养皿置37℃培养18~22小时。6.4判定标准6.4.1实验成立判断标准6.4.1.1对照品溶液应有抑菌圈，阴性对照溶液应无抑菌圈，否则判定实验无效。6.4.2供试品检测结果判断标准6.4.2.1供试品溶液不应有抑菌圈出现，否则判定为不符合规定。6.5注意事项6.5.1本实验应在无菌条件下进行，在生物安全柜内操作，使用的玻璃仪器、牛津杯等应无菌。6.5.2供试品溶液一般指待测原液自身，除另有规定外，不作其它处理。7相关文件名称编码8附件附件附件名称附件编码版本号9变更历史记录文件编码生效日期版本号变更原因变更内容提要：检验人/日期：复核人/日期：抗生素（氨苄西林）残留量检查记录品名批号/编号请验日期规格请验部门检验日期检验依据1实验材料1.1仪器与用具名称型号设备编号1.2标准物质名称来源规格/含量批号/编号1.3试药与试液名称来源批号1.4实验菌种名称编号代数2操作步骤2.1对照品溶液的处理检验人/日期：复核人/日期：2.2菌悬液的制备2.2.1取金黄色葡萄球菌琼脂斜面培养物，用ml灭菌水将菌苔洗下，备用。2.3底层的制备2.3.1取直径90mm培养皿，注入融化的抗生素Ⅱ号培养基15~20ml，使在平皿内均匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。2.4菌层的制备2.4.1取10~15ml抗生素Ⅱ号培养基置于1支50℃水浴预热的试管中，加入适量浓度的菌悬液300μl，混匀，注入已铺制底层的培养皿中，放置水平台上使凝固。2.5加样2.5.1在培养皿上等距离均匀放置牛津杯，并于牛津杯中依次滴加ul供试品溶液、阴性对照溶液（磷酸盐缓冲液）及对照品溶液。将培养皿置于℃培养小时后观察。3结果分析对照品抑菌圈直径为：；供试品抑菌圈直径为：；阴性对照抑菌圈直径为：；4结果判定4.1标准规定：□对照品溶液应有抑菌圈，阴性对照溶液应无抑菌圈，则实验成立；供试品溶液应无抑菌圈。4.2检验结果：4.2.1实验是否成立：□成立□不成立4.2.2供试品溶液抑菌圈。4.3检验结论：4.3.1□符合规定□不符合规定□N/A5备注5.1附氨苄西林残留量检查照片，共页5.2