2695-2489-HPLC维护与使用指南

沃特世2695-2489HPLC系统操作规程[]2695-2489系统的标准化操作规程开机及准备系统实验打开计算机，运行EmpowerTM软件，选择存放数据文件的Project，运行RunSamples；按软件中的DevelopMethods按钮，建立仪器方法,并保存至方法组；按Monitor按钮，观察基线，待基线平稳，可准备进样。关机实验结束后，退出RunSamples界面，退出Empower2软件，关闭检测器电源；然后依次进行以下操作：1.清洗色谱柱约60分钟(详见附录一)2.灌注柱塞密封，清洗1分钟(详见1.3)3.灌注针头清洗2次(详见1.4)4.冲洗进样器(详见1.9，对于缓冲盐或离子对试验，建议用50%乙腈：50%水冲洗进样器)5.降低流速至0，待系统压力回零后，关闭2695电源。关闭计算机及显示器电源。2695系�速�表WETPRIME�系��力/systempsiWETPRIME��力波�/DeltapsiWETPRIME参数7.5mL/min50040溶�乙�清洗�向��芯a和吸��b；或排气不充分，��湿灌注清洗�向��芯a和吸��b；或排气不充分，��湿灌注清洗在���器�板b80甲醇110水198�冲�2109101213典型�允�范�典型�允�范�低于10超出�范�超出�范�注：a清洗�向�：�向�(共�个)先放在超�水中超声10分�，再放在甲醇中超声10分�。b清洗在���器或吸��：将在���器拆下，取出�板，用30%H3PO4水溶液超声清洗20分�，�水反�超声清洗至清洗后的水pH�呈中性，然后用甲醇超声清洗10分�。1.1开机(PoweringOn)1.打开Alliance®2695和2489的电源开关至ON(1)的位置，仪器开始进行自检。2.仪器将进行大约5分钟的自检过程，待仪器自我测试完毕后，出现以下画面，画面上方的状态显示区会出现“Idle”状态，表示开机测试正常。MainDefaultIdleWaters2695SeparationsModuleMenu/Status*PressforMonitoringanddirectcontrol*04/21/9803:22:03pm©1996WatersCorporationRevision1.20DevelopRunMethodsSamplesDiagConfigLogUser:User:当此处显示“Idle”即“空闲”时，表明仪器处于待命状态，可以用仪器面板上的按键来控制仪器。当此处显示“Remote”即“远程控制”时，表明仪器处于Empower软件控制，则仪器面板上的按键无效。n清洗柱塞密封垫(SealWash)的溶液配制：含5%-10%甲醇的超纯水；n洗针液(NeedleWash)的配制：50%甲醇：50%水(反相实验)；95%乙腈：5%水(HILIC方法)；*特别提示:n玻璃容器必须使用超纯水清洗；n所有溶剂和溶液在使用前必须用0.45μm的滤膜过滤，并超声脱气1分钟；n用洁净的玻璃容器盛放溶液和流动相，避免污染21.2准备溶剂瓶(PreparingSolventReservoirs)n必须用色谱纯有机溶剂(最好选择进口品牌)，水或缓冲盐溶液要用超纯水(18.2M)；n水相流动相需要每隔48小时重新配制，特别是100%含水流动相的使用时间不得超过两天；n首先要检查6根管子是否在液面下，必须确保6根管子全部插到溶剂瓶的底部；n溶剂瓶液面必须高于溶剂混合阀(GradientProportioningValve)的位置；而洗针液的溶剂瓶应放于试验台面上，与2695仪器底部位于同一水平面上；2)Status(2)画面n显示仪器内部工作状态，如系统与注射器压力、压力变化(Deltapsi)、阀门运转状态说明：按“NextPage”键，可进行Status(1)与Status(2)画面切换。Log：又称“日志”，是仪器的使用记录。这是一个非常有用的工具，在这里可以查到仪器的开关机时间、错误的使用记录等有用的信息！操作画面说明:BannerArea:当前仪器状态显示区。DataArea:操作画面显示区，可分为两大功能画面，可利用面板的Menu/Status键进行切换。ScreenKeys(屏幕功能键)菜单(Menu)画面下：ScreenKeys(屏幕功能键)如下：nDevelopMethod:编辑、修改、删除仪器方法。nRunSample:执行样品注射、仪器分析条件。nDiag:诊断维护仪器。nConfig:设置仪器系统装置。nLog:查询仪器使用记录。MainDefaultIdleWaters2695SeparationsModuleMenu/Status*PressforMonitoringanddirectcontrol*04/21/9803:22:03pm©1996WatersCorporationRevision1.20DevelopRunMethodsSamplesDiagConfigLogUser:User:Status/Control画面下：(1)Status(1)画面n脱气装置(Degasser)的开启n仪器流速(FlowRate)的设定n溶剂比例(SolventComposition)的设定[]3注意：密封圈清洗(Sealwash)的溶液，在反相液相色谱中可使用90%水/10%甲醇或者使用95%水/5%乙腈(体积比，根据实际需要进行选择)。1.4灌注针头清洗泵(PrimetheneedleWashPump)操作目的：n防止执行样品进样时的交叉污染。n当流动相为缓冲液或样品在注射针头内，延长进样器密封圈(InjectorSeal)使用寿命。溶剂的选择：n根据样品及流动相的化学特性来作选择。n若为浓度较高的样品需要较强的溶剂来清洗。[]1.3灌注柱塞密封清洗泵(PrimingthePlungerSealWashPump)操作步骤：1.回到Menu画面，选择Diag。2.确定SealWash的管路放在正确的位置。3.按PrimeSealWash，再按Start，直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，按Halt。4.按Close。色谱条件洗针液反相缓冲溶液50%水，50%甲醇反相非缓冲溶液100%甲醇注意：若上述清洗溶剂无法避免进样时的交叉污染，请用较强的溶剂系统进行清洗。洗针液的溶剂瓶应放于试验台面上，与2695仪器的底部同一水平面上。操作步骤：1.回到Main的画面，选择Diag，选择PrimeNdlWash。2.缺省设定值为30秒，若想要多清洗几次时，请按StartAgain。n不同的色谱实验，所建议使用的清洗溶剂如下表：4注意：在开启真空脱气机时，要确认所有溶剂管路都充满溶剂；若没有溶剂时请执行溶剂的DryPrime操作。1.6执行干灌注(DryPrime)何时进行DryPrime?当溶剂的管子是空的时候，或不小心走干溶剂的时候。操作步骤：1.首先检查确认流动相溶剂的管子在正确的位置，检测器(Detector)废液管及定量环(SampleLoop)的废液管置于合适的废液容器中。2.摇动溶剂瓶内的过滤器(SolventFilter)，防止气泡附着在过滤器表面。3.将空的针筒插入抽液阀(Prime/Ventvalue)中，打开抽液阀(以逆时针的方向将抽液阀旋转3圈)。4.按“Menu/Status”键，进入Status(1)画面，按“DirectFunction”功能键，选择DryPrime，按Enter。5.按下欲使用的溶剂开启阀门(例如:OpenA)，然后将针筒向外拉，抽出约5~10mL溶剂并完全抽出溶剂管子内的气泡，完成后关闭Prime/Vent阀门。6.在“Enteraduration”中输入3分钟，按“Continue”键，泵即以3.0mL/min的流速进行清洗(Purge)。1.5打开真空脱气机(Degasser)1.按“Menu/Status”键，进入Status(1)画面。2.利用方向键将光标移至“Degasser”位置，按Enter。3.利用上下键选择模式为ON，如下图所示：degassermodeON真空脱气机degasser的模式mode调至ON7.重复上述步骤，对所有要使用的流动相溶剂进行DryPrime。[]51.7执行湿灌注(WetPrime)何时执行WetPrime?当需要排除气泡时。操作步骤：1.按“Menu/Status”键，进入Status(1)画面，利用方向键将光标移至“Composition”字段，将欲WetPrime的溶剂输入100%。2.按“DirectFunction”功能键，选择WetPrime，按Enter。WetPrime的设定值，一般为FlowRate:7.5mL/min，Time:3.0min，然后按下“OK”键，泵即开始进行WetPrime操作。3.重复上述的步骤直到对所有溶剂的WetPrime执行完毕。1.8设定流动相条件来平衡色谱柱1.按“Menu/Status”键，进入Status(1)画面，利用方向键将光标移至“Composition”字段，利用仪器面板右侧的数字键设置试验要求的溶剂组成比例，此时会在原溶剂比例表的下方出现新编辑溶剂比例表(NewComposition)，如下图所示：2.设定好新的溶剂组成比例后，按“ChangeComp”功能键(即改变溶剂组成比例changecomposition)，新设定的溶剂组成比例即确定为当前的比例。3.利用方向键将光标移至“Flow”字段，利用仪器面板右侧的数字键设定流速，此时仪器即用设定的溶剂组成比例和流速来平衡色谱柱。*特别提示:常规的反相色谱条件约需要20~30倍柱体积的流动相来平衡色谱柱；对于离子对方法，可能需要多达500倍柱体积的流动相来平衡色谱柱。1.9冲洗进样器(PurgeInjector)何时执行？n改变溶剂时。n发现注射器及其管路内有气泡时。n每天开机和关机的时候。操作步骤：1.按“Menu/Status”键，进入Status(1)画面，在设定溶剂的画面中设定适当的流速与溶剂比例（针对缓冲盐或离子对试验，建议设定50%乙腈：50%水的溶剂来冲洗进样器)。2.按“DirectFunction”键，选择PurgeInjector，按Enter。3.输入SampleLoop体积清洗的倍数(原定值为6倍)，按Enter。4.压缩测试(CompressionCheck)请先不需要测试，设定完成后按OK。[]6代号ABCDE颜色蓝色黄色红色绿色白色编号1–2425–4849–7273–9697–1201.10装载样品转盘(LoadingCarousels)样品盘的颜色及编号如下：n打开样品管理器门，放入样品盘。n若要换下一个样品盘时请按Next。n将样品瓶放入样品盘内，并记录各瓶号名称.n当所有样品盘都放入时，关起舱门转盘会自动定位。[]7附录一反相色谱柱的使用注意事项新色谱柱的安装和平衡使用新色谱柱前需要对色谱柱进行润湿和平衡，注意确保您所使用的流动相和色谱柱储存溶剂“相溶”。Symmetry/Sunfire反相色谱柱是在100%乙腈中储存的。a)依次用水和乙腈（或甲醇）冲洗液相色谱泵系统中含有缓冲盐的流路，然后将色谱柱按照标签上的箭头方向``连接到进样器或保护柱的出口端，标签上的箭头指向检测器流向(先不要接检测器)。b)在0.1ml/min流速条件下用100%纯甲醇或乙腈冲洗色谱柱，然后在5分钟内将流速升至1ml/min。c)当溶液均匀地从柱子出口流出时，停掉流速，将色谱柱出口端接到检测器上（这样操作可以避免气泡进入检测系统，并且可快速达到基线平衡）。d)按照步骤b)的方法逐渐提高流速。e)当压力达到稳定值并且基线平稳后，缓慢降低流速，停泵。f)用5:95乙腈:水（体积比）冲洗色谱柱30分钟(注意流速要从0.1ml/min缓慢上升至1ml/min)。g)换上含有离子对试剂的流动相，对色谱柱进行平衡，直到基线平稳。h)进标准溶液和样品溶液进行分析。注意：n至少用10倍柱体积的流动相平衡色谱柱直到