(新课)动物细胞融合与单克隆抗体

蛇身马首鹿角兽脚鹰爪鱼鳞虎须鬣尾（lie）植物体细胞杂交过程：植物细胞A植物细胞B去除细胞壁去除细胞壁原生质体A原生质体B诱导融合融合的原生质体再生出细胞壁杂种细胞细胞分裂（脱分化）分化发育（再分化）愈伤组织杂种植株原生质体的制备原生质体的融合筛选组织培养1、如果让动物细胞进行融合/杂交，应注意动、植物之间的哪些区别？•无细胞壁•全能性受限制，不能发育成杂种动物动物细胞融合与植物细胞杂交的不同：•无需去除细胞壁•不能培养成新的动物个体细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合受精作用A细胞B细胞人工诱导1.1动物细胞融合的概念杂交细胞动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。一、动物细胞融合细胞膜的流动性灭活病毒、PEG、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞诱导的手段？融合后细胞的类型？AB杂种细胞遗传物质有什么特点？三种AA、AB、BB（A、B）含两种生物的遗传物质1.2动物细胞融合过程原理？1.2动物细胞融合过程为什么灭活的病毒能作诱导剂？灭活丧失感染性保留融合活性灭活病毒诱导细胞融合的原理：•病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。•灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。P52生物技术资料卡意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。这一项技术成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。应用：最重要的用途是：制备单克隆抗体植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞膜的流动性、植物细胞全能性细胞膜的流动性细胞融合的方法去处细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合诱导方法物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒（P52）用途获得杂种植株制备单克隆抗体小结：一、动物细胞融合（细胞杂交）1.概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2.结果：形成含有2或多个细胞遗传物质的单核杂交细胞3.融合原理：细胞膜的流动性4.诱导方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒5.意义：突破有性杂交局限，使远缘杂交成为可能广泛应用多个领域重要用途：制备单克隆抗体强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。二、单克隆抗体B淋巴细胞效应B淋巴细胞(浆细胞)记忆B淋巴细胞分化抗体的传统生产方法：从血清中分离抗体该法制备抗体的特点（缺陷）：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。多种效应B细胞动物体内多种抗体抗原抗原动物体刺激浆细胞抗体抗体不纯抗原不纯反复注射读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。2.1单克隆抗体的概念•单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体科学家的设想：克隆（无性繁殖）单一的B淋巴细胞，形成细胞群，产生大量高纯度抗体。存在的困难：体外培养的B淋巴细胞不可无限增殖问题1：哪种细胞可以无限增殖呢？骨髓瘤细胞问题2：怎样让细胞既能大量繁殖，又能产生专一抗体呢？B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,制备单克隆抗体怎样获得大量高纯度抗体呢？一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验①为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？②会有几种融合方式？③杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？④是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？⑤如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？BB、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活获得产生相应抗体的B细胞（二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞(多孔培养板)√体外培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。杂交瘤细胞有何特点？本过程利用的哪些技术？用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。）细胞融合技术、动物细胞培养技术单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？2.3单克隆抗体的应用诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。（如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）（2）治疗疾病：运载药物：生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤(“生物导弹”——单抗制导瞄准，药物为弹药)主要用于癌症治疗——瞄准癌细胞的生物导弹优势：既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法－－灭活病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是（）A.离心B.灭活的病毒C.电刺激D.振动【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（）A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息B.能无限增殖C.可形成新个体D.培养过程会贴壁【例3】动物细胞融合的作用中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂种细胞BBA【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞B.不经过免疫的T淋巴细胞D.不经过免疫的B淋巴细胞【例5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（）A.B淋巴细胞B．T淋巴细胞C．骨髓瘤细胞D．杂交瘤细胞AD【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（）A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D．筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体B×B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC7.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体不能，没有注射抗原，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。(1)该实验方案的目的是：(2)该方案能达到预期效果吗？为什么？(3)A是从小鼠的脾脏中取得__________该细胞能够产生______。(4).图中B为________________过程，常用_________________诱导，该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能__________,又能___________。B淋巴细胞抗体细胞融合灭活的病毒分泌专一抗体迅速大量增殖