球菌及检验ppt课件

球菌及检验成都医学院临床微生物学教研室•球菌（coccus）是引起人类化脓性感染主要细菌,又称化脓性球菌（pyogeniccoccus）。•常见需氧和兼性厌氧球菌包括：革兰阳性球菌奈瑟菌属Neisseria卡他布兰汉菌B.catarrhalis葡萄球菌属Staphylococcus链球菌属Streptococcus肠球菌属Enterococcus革兰阴性球菌葡萄球菌属Staphylococcus一、分类•Bergy’s分类32种、15亚种。常见金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、头状葡萄球菌、人葡萄球菌等。•凝固酶分类凝固酶阳性：如金黄色葡萄球菌凝固酶阴性：如表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌等•噬菌体分型将金黄色葡萄球菌分为5群26型。二、细菌特性（一）形态染色革兰阳性球菌，菌体呈球形，散在或呈葡萄状排列（图1、图2），无鞭毛、无芽胞，少数菌株能形成荚膜。在青霉素等药物诱导下可形成L型（图3）。（图1）（图2）（图3）(二)培养特性多数为兼性厌氧，少数为专性厌氧菌；营养要求不高，最适生长温度37℃，最适pH7.4。多数菌株具有耐盐性，能在含10%～15%NaCl的培养基中生长。在肉汤培养基中生长迅速，呈均匀混浊生长（三）生化试验触酶试验阳性（图1）。分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气（图2）。金黄色葡萄球菌能分解甘露醇，凝固酶试验及耐热DNA酶试验阳性。（图1）（图2）（四）抗原结构主要有两种抗原：1.葡萄球菌A蛋白（SPA）有种、属特异性。2.多糖抗原有型特异性，存在于细胞壁。三、临床意义（一）致病物质外毒素葡萄球菌溶素、杀白细胞素、肠毒素、表皮剥脱毒素、毒性休克综合征毒素-1等。侵袭性酶类血浆凝固酶、耐热核酸酶、透明质酸酶等2.所致疾病皮肤软组织感染疖、痈、毛囊炎、蜂窝组织炎、伤口化脓、脓肿等。组织器官及全身性感染肺炎、心包炎、骨髓炎、脑膜炎、肾盂肾炎、尿道感染、败血症、脓毒血症等。医院感染伪膜性肠炎、人工瓣膜性心内膜炎、静脉导管感染等。毒素性疾病食物中毒烫伤样皮肤综合征毒性休克综合征四、微生物学检验（一）检验程序（二）标本采集根据病变部位不同，采集相应标本。（三）检验方法1．显微镜检查除血液标本外，其他标本均可直接涂片作革兰染色检查。脓液直接涂片（革兰染色）血标本培养后涂片（革兰染色）2.分离培养血液标本增菌培养分离培养（血平板）一般标本分离培养（血平板）污染标本（粪便、呕吐物等）分离培养（高盐甘露醇平板）3.鉴定（玻片法）（试管法）血浆凝固酶试验胶乳凝集试验新生霉素敏感试验金黄色葡萄球菌与CNS的鉴别方法金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌血浆凝固酶＋－－耐热核酸酶＋－－甘露醇发酵＋－－SPA＋－－新生霉素敏感试验SSR葡萄球菌属与微球菌属的鉴别方法葡萄球菌属微球菌属形态葡萄状排列为主，菌体较小四联排列为主，菌体较大O-F试验发酵型氧化型链球菌属Streptococcus一、分类Bergy’s分类40个种和亚种溶血现象分类甲型溶血性链球菌α溶血。草绿色链球菌、肺炎链球菌等乙型溶血性链球菌β溶血。化脓性链球菌、无乳链球菌等丙型链球菌γ溶血。牛链球菌Lancefield血清学分类A、B、C、D……20群，最常见A群三、微生物特性（一）形态染色革兰阳性球菌，菌体呈球型或卵圆性，链状排列，无鞭毛、无芽胞，幼龄菌可形成荚膜。肺炎链球菌常呈瓜仁状或矛头状，呈双排列。兼性厌氧，营养要求较高，普通培养基中不能生长，在血琼脂平板上生长良好。最适温度37℃，最适pH7.4～7.6。菌落小、圆形、凸起，表面光滑湿润，边缘整齐，灰白色、半透明或不透明，周围有α、β、γ三种不同的溶血。(二)培养特性肺炎链球菌：菌落扁平，中央呈脐状凹陷，α溶血。（三）生化试验触酶－,能分解多种糖类和蛋白质。肺炎链球菌分解菊糖，胆盐溶解试验阳性和optochin敏感试验阳性，籍此可与草绿色链球菌相区别。（四）抗原结构1.多糖抗原：群特异性抗原，将链球菌分为20群。对人致病的90％属A群。2.蛋白质抗原：具型特异性，与致病性有关的是M抗原。3.荚膜多糖抗原根据荚膜多糖抗原不同，将肺炎链球菌分为85个血清型。三、临床意义（一）致病物质细菌表面结构M蛋白、脂磷壁酸、荚膜外毒素链球菌溶血素O（SLO）、链球菌溶血素S（SLS）、致热外毒素（红疹毒素）侵袭性酶类链激酶、链道酶、透明质酸酶等1.A群链球菌(化脓性链球菌)约占临床上链球菌感染的90%。（1）化脓性感染皮肤软组织感染痈、蜂窝织炎、脓疱疮、丹毒、淋巴结炎、医源性伤口感染（二）所致疾病组织器官及全身性感染扁桃体炎、急性咽炎、咽峡炎、中耳炎、乳突炎和产后感染等。（2）毒素性疾病猩红热（3）变态反应性疾病急、慢性风湿热和急性肾小球肾炎等。以A群12型多见。扁桃体炎猩红热乳突炎2.B群链球菌（无乳链球菌）新生儿败血症和脑膜炎的主要病原菌。3.草绿色链球菌（α链球菌）亚急性细菌性心内膜炎的常见病原菌。4.肺炎链球菌大叶性肺炎、支气管肺炎、化脓性脑膜炎、鼻窦炎、中耳炎等。四、微生物检验（一）检验程序（二）标本采集根据病变部位不同，采集相应标本。痰液、血液、脑脊液等（三）检验方法1.显微镜检查除血液标本外，其他标本均可直接涂片作革兰染色检查。肺炎链球菌脑脊液涂片化脓性链球菌脓汁涂片2.分离培养血液标本增菌培养分离培养（血平板）37℃18～24h一般标本分离培养（血平板）3.鉴定（1）Lancefield血清学分群（2）化脓性链球菌鉴定杆菌肽敏感（3）无乳链球菌鉴定CAMP试验＋马尿酸钠试验＋（4）D群链球菌胆汁七叶苷试验＋65g／LNaCl耐盐试验－（5）肺炎链球菌鉴别菊糖＋Optochin敏感试验＋胆汁溶菌试验＋荚膜肿胀试验＋草绿色链球菌与肺炎链球菌的鉴别菌名细菌形态菌落胆汁溶菌试验Optochin敏感试验菊糖分解荚膜肿胀小鼠毒力肺炎链球菌矛头状，成双，有荚膜梢大，扁平，湿润，脐状+++++草绿色链球菌圆形，链状，无荚膜较小，凸起，稍干，圆形－－－－－肠球菌Enterococcus一、分类1984年从链球菌属分离出来。Bergy’s分类19种粪肠球菌、鸟肠球菌、屎肠球菌等Lancefield血清学分群D群二、细菌特性(一)形态染色革兰阳性球菌，单个、成双或呈短链状排列。无芽胞、无荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。(二)培养特性与链球菌相似。兼性厌氧，厌氧要求较高，在血琼脂平板上形成较小、灰白色、湿润、凸起、α、β或γ溶血。(三)生化反应触酶试验－胆汁七叶苷试验＋65g/L氯化钠生长试验＋吡咯烷酮芳基酰胺酶（PYR）试验＋二、临床意义人类肠道和女性生殖道的正常菌群。医院感染最常见的革兰阳性球菌，仅次于金黄色葡萄球菌。最多见于尿路感染，其次为腹腔和盆腔等部位的创伤和外科手术后感染。四、微生物检验（一）检验程序脓液、尿液、穿刺液初报挑选可疑菌落血液涂片染色分离培养增菌培养（5％CO2）（血平板、5％CO2）(葡萄糖肉汤等)鉴定试验PYR试验胆汁七叶苷试验6.5％NaCl生长试验血清学试验（二）标本采集血、尿、创伤标本和其他拭子。（三）检验方法1.显微镜检查除血液标本外，其他标本均可直接涂片作革兰染色检查。2.分离培养血液标本增菌培养分离培养（血平板）37℃18～24h一般标本分离培养（血平板）3.鉴定肠球菌与D群链球菌的鉴别Lancefield血清学鉴定胆汁七叶苷65g/L氯化钠生长PYR45℃生长肠球菌属D群＋＋＋＋D群链球菌D群＋－－－奈瑟菌属和布兰汉菌属一、分类（一）奈瑟菌属(Neisseria)共11个种，脑膜炎奈瑟菌(N.merningitidis)和淋病奈瑟菌(N.gonorrhoeae)为最重要的病原菌。（二）布兰汉菌亚属（subgenusBranhamella）莫拉菌属（Moraxella）布兰汉菌亚属（subgenusBranhamella）共4个种，仅卡他布兰汉菌（M.(B.)catarrhalis）对人类有致病性。二、细菌特性（一）形态染色革兰阴性球菌，肾形、成双排列，凹面相对。标本直接涂片镜检，可位于中性粒细胞细胞内、外。无鞭毛、无芽胞，新分离株多有荚膜和菌毛。脑膜炎奈瑟菌卡他布兰汉菌淋病奈瑟菌(二)培养特性1.脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌专性需氧，初次分离培养需要5％～10％CO2。营养要求高，最适培养基为巧克力琼脂平板。菌落较小，圆形凸起、表面光滑湿润、边缘整齐、透明或半透明、无色或呈灰白色，似露滴状，不溶血。有自溶酶。脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌专性需氧，营养要求不高，普通培养基上即可生长。菌落灰白色或红棕色、光滑、圆形凸起、不透明、不溶血；培养48h，菌落表面干燥，坚韧，不平，边缘不繁齐；如用接种环推移，整个菌落可移动。2.卡他布兰汉菌（三）生化反应三种细菌均为氧化酶＋、触酶＋。奈瑟菌和卡他布兰汉菌的主要生化反应菌种氧化酶触酶葡萄糖麦芽糖蔗糖硝酸盐还原DNA酶脑膜炎奈瑟菌＋＋＋＋－－－淋病奈瑟菌＋＋＋－－－－卡他布兰汉菌＋＋－－－＋＋（四）抗原结构脑膜炎奈瑟菌抗原结构模式图淋病奈瑟菌抗原结构模式图（五）抵抗力奈瑟菌的抵抗力非常弱，对冷热、干燥、化学消毒剂均非常敏感。卡他布兰汉菌的抵抗力较强二、临床意义（一）淋病奈瑟菌1.致病物质：菌毛、外膜蛋白、内毒素等。2.所致疾病人类是淋病奈瑟菌的唯一宿主。性传播疾病——淋病淋球菌性结膜炎淋菌性关节炎、败血症、脑膜炎（偶见）（二）脑膜炎奈瑟菌1.致病物质：荚膜、菌毛、内毒素2.所致疾病流行性脑脊髓膜炎皮下出血（出血性紫癜）败血症休克和DIC（三）卡他布兰汉菌1.致病物质：内毒素2.所致疾病人类和其他动物上呼吸道的正常寄生菌之一，当机体抵抗力下降时，引起下呼吸道感染和结膜炎、中耳炎、鼻窦炎、支气管炎，偶尔引起菌血症、心内膜炎、脓胸、脑膜炎、尿道炎等。（一）检验程序四、微生物检验（二）标本采集标本采集后立即送检，最好床边接种。1.脑膜炎奈瑟菌咽拭子、血液、脑脊液、皮肤出血淤斑渗出物2.淋病奈瑟菌女性：尿道或阴道分泌物；男性：尿道分泌物3.卡他布兰汉菌痰液或支气管灌洗液1.显微镜检查除血液标本外，其他标本均可直接涂片作革兰染色检查。脑脊液标本直接涂片男性淋病患者的尿道分泌物涂片急性淋病慢性淋病女性淋病患者阴道分泌物涂片（三）检验方法2.分离培养脑膜炎奈瑟菌血液标本增菌培养分离培养（血平板＋巧克力平板）5%～10%CO237℃24～48h一般标本分离培养（血平板＋巧克力平板）淋病奈瑟菌巧克力平板、选择培养基（MTM、ML、NYC等)卡他布兰汉菌血平板3.鉴定氧化酶＋淋病奈瑟菌仅分解葡萄糖脑膜炎奈瑟菌分解葡萄糖和麦芽糖卡他布兰汉菌不分解糖