2.2动物细胞工程复习课

动物细胞工程专题复习侯集中学高二生物组马靖高考考点1.动物的细胞培养与体细胞克隆（A）2.细胞融合与单克隆抗体（A）动物细胞工程动物细胞培养细胞融合与单克隆抗体核移植与体细胞克隆①②③动物细胞培养含义原理过程条件应用细胞的结构及物质组成细胞增殖植物组织培养细胞物质的跨膜运输细胞癌变酶的特性原理过程培养基的性质和成分结果用途基因工程考点一：动物细胞培养①、无菌、无毒的环境.如何控制？②、必备营养成分，应注意什么问题？③、温度和PH？④、气体成分有哪些？分别有什么作用？1.原理2.材料选择及原因3.一般过程4.培养条件5.主要应用剪碎组织胰蛋白酶处理单个细胞细胞培养幼龄动物取动物器官和组织动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。细胞增殖动物细胞培养的条件:1）无菌无毒的环境：适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为36.5±0.5℃。适宜的酸碱度：PH：7.2-7.4液体合成培养基：（糖、氨基酸）、促生长因子、（水、无机盐、微量元素）等；通常还需加入血浆、血清等天然成分。4）气体环境：2）营养：3）温度和pH：“95％O2+5％CO2”的混合气体培养箱。氧气是细胞代谢必须的；CO2维持培养液的PH。①对培养液和所有培养用具无菌处理；②培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；③定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。使用时需要注意的问题？为何动物细胞培养必须加入血清？拓展探究：问题1、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？问题2：①为什么用胰蛋白酶处理？②为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？③用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？问题3：如何区分原代培养与传代培养；细胞株与细胞系？问题4：动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？问题5：动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？问题6：目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在10代以内，为什么？扩大细胞与培养液的接触面积，利于细胞吸收营养。分装前的初次培养为原代培养，分装后的培养为传代培养。遗传物质未发生改变的为细胞株，遗传物质发生改变的为细胞系。主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基2、成分中有动物血清等10代以内的细胞遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。①动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体②动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适宜PH为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜PH为2，胃蛋白酶在PH为7.2-7.4的动物细胞培养中无活性。③长时间处理当然会损伤细胞，控制好时间。动物细胞与组织培养含义原理过程条件应用细胞的结构及物质组成细胞增殖植物组织培养细胞物质跨膜运输的方式细胞癌变酶的特性原理过程培养基的性质和成分结果用途基因工程例一．某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：（1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其他培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量______。（2）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是___。细胞培养应在含5％CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是________。（3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长____药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更______。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用______处理。（4）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的_____。动物细胞能力提升:多停止多胰蛋白酶抗生素血清可以补充合成培养基中缺乏的物质(如促细胞生长因子等)维持培养液的pH考点二：动物体细胞核移植与克隆动物1.本节的基础知识考点有哪些？2.可以与其他哪些章节联系进行整合？基础考点知识有：核移植的概念、种类、原理、过程、应用和存在问题◆取供体细胞传代培养10代以内的细胞.为什么？◆用的是去核的减数第二次分裂中期细胞（MⅡ中期）为什么？◆激活方法：◆激活目的：◆促融方法：电刺激◆胚胎移植至代孕受体内妊娠、分娩体细胞核移植流程图供体：优质高产奶牛受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养）1.体积大，易操作。2.含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。遗传性状与供体牛完全相同吗？动物体细胞核移植与克隆动物胚胎工程卵细胞的形成与体外受精早期胚胎的培养胚胎移植与试管动物的比较基因工程动物细胞培养动物体细胞核移植与克隆动物知识体系概念存在问题种类原理过程应用注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体1.梳理本考点知识的考点内容有哪些？2.就此单克隆制备的过程图,你认为哪些地方可以作为考点进行设问考查?3.你认为本节内容常与哪些章节的内容联系进行综合考查?考点三：动物细胞融合与单克隆抗体的制备例二．上图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。(l)技术是单克隆抗体技术的基础。(2)根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于培养基，目的是。在培养的过程中需要添加无机盐，但要注意营养物的，以保证生命活动的正常进行。(3)单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是。(4)动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用。(5)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的特点，又具备淋巴细胞的特点。(6)淋巴细胞是由动物体中的细胞分化、发育而来。(7)杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是。（8）若用15N标记的氨基酸培养能产生单克隆抗体的细胞，放射性物质在细胞结构中出现的先后顺序是。动物细胞培养选择性筛选出杂交瘤细胞种类和数量特异性强，灵敏度高灭活的病毒分泌特异性抗体在体外大量增殖骨髓造血干主动运输核糖体内质网高尔基体细胞膜动物细胞工程动物细胞融合动物细胞培养（基础）生产单克隆抗体概念过程应用细胞核移植概念过程应用原理过程条件应用细胞植物组织培养酶的特性基因工程胚胎工程基因工程植物体细胞杂交免疫学知识基因工程3．右图为细胞融合的简略过程，请据图回答：（1）若A、B是植物细胞，在细胞融合前可用除去细胞壁得到；D杂种细胞能培育成杂种植株，说明植物细胞具有。A、B到C的过程中常用的物理方法是，融合完成的标志。（2）若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用技术把D培养成植株。（3）若A、B是动物细胞，一般取自_____，然后用使其分散开来；由A、B到C的过程中，常用的不同于植物细胞融合的手段是_________，所形成的D称为__________，A、B融合为C的过程说明了细胞膜具有。（4）若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠效应B细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已经被注射了。注射后小鼠身体发生了相应的免疫反应，生成了_______，图中B为____________。（5）若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的C有种，用来培养的D细胞应该是_____________。从中选择出它的方法是___________培养，获得D后，常用的培养方法是培养液中培养和______________________。纤维素酶和果胶酶原生质体全能性电刺激产生新的细胞壁植物组织培养幼龄动物的组织、器官或胚胎胰蛋白酶灭活的病毒诱导杂种细胞流动性抗原效应B细胞、记忆细胞、抗体3杂交瘤细胞用特定选择培养基小鼠腹腔内增殖骨髓瘤细胞综合训练：