第二节质量检验的基本程序与方法

第二节质量检验的基本程序与方法朱逢佳01药2301190102鉴别试验杂质检查安全性检查含量（效价）测定一、鉴别试验鉴别：利用化学法、物理法及生物学方法来确证生化药物和基因工程药物的真伪。通常需要用标准品或对照品在同一条件下进行对照试验加以确证。理化鉴别法生化鉴别法生物鉴别法（一）理化鉴别法1、化学鉴别法呈色法e.g.溶菌酶分子中的四个肽键上的氮原子能与Cu2+络合，生成有颜色的配位化合物，肽键越多，颜色越深。沉淀法e.g.胃蛋白酶受酸、碱、重金属或有机溶剂的作用，蛋白质肽链的空间结构被破坏，引起变性而产生不溶性沉淀。鞣酸、没食子酸或多种重金属盐溶液（Ch.P2000)2、紫外分光光度法利用药物中的共轭系统在紫外区有特征吸收用于鉴别。3、高效液相色谱法利用对照品溶液和供试品溶液色谱图的保留时间和肽图谱的一致性进行鉴别。（二）、生化鉴别法1.酶法e.g.尿激酶能激活牛纤维蛋白溶酶原，而具有相同作用的链激酶不能激活牛纤维蛋白溶酶原而加以区别，并用直接观察溶解纤维蛋白作用的气泡上升法作为判断指标。2.电泳法电泳：在电解质溶液中，带电粒子或离子在电场的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反方向迁移的现象。e.g.肝素——糖凝胶电泳法3.样品脱盐后用等电点聚焦法测定对于同一个产品来说不管有几个等电点，但批与批之间必须一致，可表明其工艺稳定（三）、生物鉴别法利用生物体进行试验来鉴别药物。e.g.胰岛素——家兔惊厥试验二、杂质检查（一）一般杂质检查包括氯化物、硫酸盐、磷酸盐、铵盐、铁盐、重金属、酸度、溶液的澄清度或溶液的颜色、水分及干燥失重、炽灼残渣等。（二）特殊杂质检查特殊杂质主要是指从生产工艺中引入或原料中带入的杂质。许多生化药物是从生物组织中提取或用微生物发酵法制得，药物中易残存一些杂质或其他成分。1.原料药的纯度分析2.生产过程中杂质的检查基因工程药物的质量控制要比用传统工艺生产的生物药物有更高的要求。三、安全性检查（一）热原检查法和细菌内毒素检查法（二）异常毒性试验（三）过敏试验（四）降压物质试验（五）无菌试验（六）基因工程药物中可能杂质与污染物检查（七）致突变试验（八）生殖毒性试验热原检查法（家兔法）本法是将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，以其体温升高的程度，判定该供试品中所含热原是否符合规定，是一种限度试验法。细菌内毒素检查法——利用鲎试剂和细菌内毒素的凝聚反应。异常毒性试验是用一定剂量的药物按指定的操作方法和给药途径给予规定体重的某种试验动物，观察其急性毒性反应。反应的判断以试验动物死亡与否为终点。中国药典（1995年版）中规定了50多种药物需做异常毒性检查。动物：小鼠给药途径：尾静脉注射法，皮下注射法，腹腔注射法，口服给药结果判断：除另有规定外，全部5只小鼠在给药后48小时内不得有死亡；如有死亡时，应另取体重18~19g的小鼠10复试，全部小鼠在48小时内不得有死亡。（ChP2000附录ⅪC）过敏试验是检查异性蛋白的试验。药物中若夹杂有异性蛋白，在临床使用时易引起病人多种过敏反应，轻者皮肤出现红斑或丘疹，严重者可出现窒息、发结、血管神经性水肿、血压下降，甚至休克和死亡。因此，有可能存在异性蛋白的药物、应作过敏试验。动物：豚鼠降压物质：指某些药物中含有的能导致血压降低的杂质，包括组胺、类组胺或其他导致血压降低的物质。危害：面部潮红，脉搏加速，血压下降来源：在用动物脏器或组织为原料制备生化药物的过程中，正常组织内存在的组胺及部分氨基酸脱羧形成的组胺、酪胺等胺类物质。方法：比较对照品和供试品引起麻醉猫（或狗）血压下降的程度，以判断供试品中所含降压物质的限度是否符合规定。ChP2000无菌检查法是检查药品及敷料是否染有活菌的一种方法，是药典中较重要的检查项目之一。由于许多生化药物是在无菌条件下制备的，且不能高温灭菌。因此，无菌检查就更有必要。中国药典中几乎所有的注射用药均做无菌检查。参照《中国生物制品规程》基因工程药物中可能的杂质：残留DNA、宿主细胞蛋白质、内毒素、蛋白质突变体和蛋白质裂解物等。主要检查项目：外源性DNA、宿主细胞蛋白质、其他有关杂质和细菌内毒素。致突变试验包括：微生物回复突变试验——检测基因突变哺乳动物培养细胞染色体畸变试验——检测是否影响DNA结构或改变信息啮齿动物微核试验——染色体畸变试验的补充微生物电极法的致突变试验鼠伤寒沙门菌营养缺陷型回复突变试验中国仓鼠肺细胞（CHL)NIH小鼠生殖毒性试验包括：一般生殖毒性试验——反映对生殖过程第一阶段的影响（妊娠前和妊娠初期）致畸敏感期毒性试验——生殖过程第二阶段的影响围生期毒性试验——生殖过程第三阶段（分娩前后和泌乳期）四、含量（效价）测定含量表示方法百分含量结构明确的小分子药物或经水解后变成小分子的药物生物效价或酶活力单位酶类和蛋白质等药物22含量测定1.HPLC法应用适当的分析柱测定产品的总体纯度。达95％以上。2.十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE法）产品若存在聚合体，在非还原情况下用扫描计算聚合体的含量，一般控制在10％以下，单体加聚合体应不少于95％。效价测定效价测定均采用国际或国家参考品，或经过国家检定机构认可的参考品，以体内或体外法（细胞法）测定其生物学活性，并标明其活性单位。