动物组织各种固定液及优缺点

动物组织各种固定液及优缺点编号类别名字配方优缺点或备注甲醛：从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:1.组织收缩较少,损伤少,保存固有物质好.2.固定均匀,穿透力强.3.能使组织硬化,增进组织弹性,有利于切片.4.能保存脂肪及脂类物质.5.成本较低.缺点:1.杂质含量较多,如甲醇,可钝化酶类,影响反应.2.含有微量甲酸,导致固定液酸变,影响染色.3.可产生福尔马林色素,影响观察.4.不能固定尿酸和糖类物质.5.容易挥发,污染环境,可导致标本干涸.6.可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验,组织用甲醛固定后在流水中冲洗5小时后,仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合,临床活检不用.因此要特别指出的是,在其后的各种技术操作中,要特别注意到甲醛的存在,必须要想办法除去它,否则将会给各种染色造成影响,甚至导致失败。110%缓冲福尔马林固定液甲醛100ml蒸馏水900mlNaH2PO44gNa2HPO46.5g该固定液是当今流行的固定液,因它对组织固定较好,损伤较少,因对其后的各方面研究都较好,尤其是对免疫组化的染色.210%福尔马林固定液甲醛100ml自来水900ml这是一种最简单的固定液，适合于边远地区携带的固定液，但由于它的单一性，因此，只要有条件的单位都不要求使用这种固定液。310%福尔马林盐固定液甲醛100ml自来水900mlNacl9克先将Nacl溶于水，再加入甲醛。这也是一种较为简单的固定液，但由于加入Nacl，它是一种重金属盐物质，加入了它可促进和改善染色，增加染色的强度4Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液75ml甲醛2ml冰醋酸5ml该固定液中的冰醋酸，对胶原纤维等组织有膨胀作用。而甲醛对组织有收缩作用。两种试剂的混合使用，用以抵消彼此间的副作用。使组织固定达到优良的固定水平5醛糖钙固定液甲醛100ml蔗糖300ml乙酸钙20g蒸镏水90ml先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镏水，后加入甲醛。该固定液对于做酶的组织化学的研究效果较好，组织固定后，做冰冻切片，再给予显示。酒精：优点：1、可保存尿酸结晶和糖原等物质。2、能在任何比例的情况下与水混合，如组织的脱水，切片染色前后都离不开酒精，通常都用95%的工业酒精来配成60%、70%、80%、90%等不同的浓度来使用。3、可溶解苯类物质为染色步骤中的桥梁试剂。常规活检等切片上的石蜡必须除去，才能进行染色，能除去石蜡的物质有苯及汽油等，因此称它为桥梁试剂。4、能除去切片上的水份，使切片无水化。切片经染色后，到无水酒精中已完全无水，这样处理对于切片的保存是有好处的，否则，切片将会褪色。5，可与其它试剂配成多种的混合固定液，加快固定，它的缺点是：1、可溶解脂类物质，凡要证明组织是否含有脂类和类脂物时，切不能用含有酒精的固定液去固定组织，也不能用石蜡切片。2、对组织收缩较大，不宜作单纯固定液。3、渗透力不强。当用酒精固定组织时，组织表面很快就被固定，并形成了一层蛋白膜，这层膜可阻挡固定液向里渗透，造成了中间组织固定不佳的现象。4、可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡经酒精固定的组织，核的染色都不好。5、可脱去切片上已着染的各种颜色，切片经染色后，一是必须洗去多余的染液，二是必须脱去切片上的水。在用酒精洗切片时，必须仔细地掌握显微镜下观察，还要掌握酒精的浓度，低浓底的酒精脱色力强，稍不注意，便可脱去切片上大部分的颜色。切片脱水时，要较快地通过低浓度的酒精，以免使已着染的颜色被脱去。6Carnoy氏固定液氯仿300ml冰醋酸100ml95%酒精600ml该固定液固定组织快速，在固定的同时兼有脱水的作用。溶液中的氯仿和酒精，对组织的收缩较厉害，但应用了冰醋酸，这种现象便被中和去7AF固定液甲醛100ml冰醋酸50ml95%酒精850ml这种固定液的作用与上液有相似之处，但要注意的是，凡使用含有醋酸的固定液，其脱水用具不能使用铜制的脱水盒，因冰醋酸跟铜离子起反应，生成醋酸铜，这种物质可沉淀于组织间，可破坏组织中的抗原，造成免疫组化检测的失败。应用时应多加注意冰醋酸:优点有：1、能迅速固定染色质，助于染色，用醋酸配成的固定液，其作用快，固定效果均匀，对于染色质的固定快，因此，用其作固定的切片染色好，在配其它染色液如明矾苏木素和伊红时，常常需加入一定量的醋酸，以促进染色。2、能使组织尤其是富含纤维的组织膨胀。各种固定液对组织都有收缩的作用，尤其是对富含纤维的组织。而它不但不会使组织收缩，而且还会令许多组织发生膨胀的作用。不足之处：1、不能作为单一的固定剂。2、不能凝固蛋白质，不能保存白细胞颗粒，红细胞及含血铁黄素等。8Zenker氏固定液：重铬酸钾25G升汞50G蒸馏水1000ml冰醋酸50ml先将重铬酸钾和升汞溶于水中，尢其是重铬酸钾，应用热水或加温的方法将其溶解，然后过滤贮存于带盖的玻璃瓶中以防失效。临用时，取贮存液950ml，加入50ml的冰醋酸，即可使用。应用该固定液固定的组织，一般不要超过24h，取出组织，流水冲冼12小时以上，然后保存于75%-80%的酒精中，在切片染色前，必须用碘除去汞盐的沉着。应用该固定液的组织，细胞核及细胞浆染色十分清晰，特别是要显示骨骼肌的横纹时，应用本液可获得满意的结果，但由于其含有醋酸，故不能用于保存细胞颗粒，红细胞及含铁血黄素。9Flemming氏液2%酸水溶液200ml1%铬酸水溶液700ml冰醋酸100ml该液中的奥酸对脂肪组织既有固定作用，又有染色作用，对有髓神经纤维也有固定兼染髓鞘的作用。如果做HE的染色，该液不适合。应用该液固定的组织，切片不能太大过厚，一般1-2毫米厚固定时间1-3天，后经水洗，保存于80%酒精中，除上述两液体外，还有Bouin氏液和Carnoy氏液等重铬酸钾:它的优点是：1、能固定脂肪及类脂物。2、为髓鞘及嗜铬细胞优良的媒染剂。3、可配成多种的混合固定液足之处有：1、不能沉淀蛋白质，它必须和醋酸配成混合固定液，方能发挥作用，产生铬酸，沉淀蛋白质。2、具有毒性及产生高温。在配制液体时，如清洗剂，当加入硫酸时，可产生很高的温度，并挥发出刺鼻的气体，应特别注意。3、它不能长期固定组织，经它固定的组织应充分水洗后保存于80%酒精中。10Helly氏液重铬酸钾25g升汞50g蒸馏水1000ml甲醛50ml临用时加入甲醛，因其加入后于24小时后可发生沉淀而失效，因用时应特别注意。该液是白细胞颗粒的优良固定剂，因此凡为白细胞或造血器官如骨髓，脾脏及患先天性梅毒之肝脏等，可用此液固定。此液原配方要求加入硫酸钠，但据我们经验认为，硫酸钠在液中对组织无任何作用，故省去11Orth氏液重铬酸钾20g蒸馏水1000ml甲醛100ml该液固定组织较缓慢，不适合于作临床的活检固定液，4毫米厚的组织固定时间需36-72小时，该液对于染色质的固定好，显示清晰，但可溶解部分红细胞和含铁血黄素。重铬酸钾的不足之处有：1、不能沉淀蛋白质，它必须和醋酸配成混合固定液，方能发挥作用，产生铬酸，沉淀蛋白质。2、具有毒性及产生高温。在配制液体时，如清洗剂，当加入硫酸时，可产生很高的温度，并挥发出刺鼻的气体，应特别注意。3、它不能长期固定组织，经它固定的组织应充分水洗后保存于80%酒精中