轮虫的培养

轮虫的培养必需小型：作为鱼类的开口饵料；形状简单，容易被破碎；富有营养，容易消化；不使水质恶化；容易制备（培养）；能适应养殖幼体的摄食生态条件。一、动物性生物饵料必须具备的条件轮虫的培养第一节生物饵料的应用概述常见种类牡蛎担轮幼虫：受精卵担轮幼虫:大约饵用13-14小时；藤壶无节幼虫Ⅰ、Ⅱ期：大约饵用3-4小时；轮虫：S、L、M型，有鳍鱼类开口饵料；卤虫：幼体和成体，商品化；枝角类：大部分淡水种；桡足类：海水种；糠虾、颤蚓、黄粉虫、沙蚕。个体大小：颤蚓、沙蚕、糠虾＞黄粉虫＞卤虫成体＞桡足类＞枝角类＞卤虫幼体＞轮虫＞牡蛎担轮幼虫和藤壶无节幼虫Ⅰ、Ⅱ期。四、轮虫的概况（一）轮虫特点生命力强，繁殖快，营养丰富，大小适宜，易培养。（二）简史1960年日本伊藤发现褶皱臂尾轮虫作为仔鱼饵料的价值，并进行大量培养技术的探索；1964年日本开始大量培养褶皱臂尾轮虫；1965年HirataandMori发现面包酵母是轮虫的合适饵料；70年代广泛使用面包酵母；随后发现酵母轮虫缺乏鱼类必需的高度不饱和脂肪酸，造成仔鱼大量死亡。因此研究轮虫的营养强化技术；我国60年代初，傅素宝等（1962）研究壶状臂尾轮虫；70-80年代，解承林、郑严、王育、何进金、何连金、张道南、陈世杰等研究褶皱臂尾轮虫；90年代，研究轮虫品系的选育，如大轮虫品系、小轮虫品系（中国科学院海洋研究所）和低温轮虫品系（15℃，张学武）；至今，褶皱臂尾轮虫已经成为一种极为重要的生物饵料，在世界范围内广泛培养和应用。（三）应用情况在60种海洋有鳍鱼类和18种甲壳动物幼体的培育中应用。（四）存在问题探明轮虫两性繁殖的机制；开发轮虫高密度培养系统；选育、引进优良的轮虫品系；如：100um小轮虫和500-1000um大轮虫；探讨室外土池稳定生产轮虫的技术措施；进一步探讨轮虫培养过程中增殖率突然下降的原因和机制。第二节轮虫生物学一、分类欧美国家：袋形动物门，轮虫纲、真轮毛虫亚纲、单生殖巢上目、臂尾轮虫目、臂尾轮虫科，臂尾轮虫属。我国分为：轮虫门，单生殖巢纲，游泳目，臂尾轮虫科，臂尾轮虫属。培养种类：褶皱臂尾轮虫（Brachionusplicatilis)—L型圆型臂尾轮虫（Brachionusrotundiformis）-S型壶状臂尾轮虫（B.bennini）萼花臂尾轮虫（B.calyciflorus）钩状狭甲轮虫（Colurellauncinata）：小型。二、形态特点轮虫的三大特征轮盘：摄食、运动；咀嚼器：磨碎食物；原肾管：肾的雏形，内有焰细胞。雌雄异体、异形雌性：常见，大小196-250×150-202um，结构完整；雄性：少见，个体小：80-130um，结构简单，只有轮盘、精巢和阴茎，不摄食；只在不良环境下看见出现，游泳快，只为了交配。1、外部结构被甲：透明、前缘有片状棘（背面6个、腹面4个）；轮盘部：由棒状突、纤毛环（打动水流）和触毛（感觉作用）组成；足部：足趾、足腺；与头部均能缩进。2、内部结构消化系统：口（漏斗状）口腔咀嚼器食道（短）胃（大，消化腺1对）肠泄殖腔肛门排泄系统：原肾管（焰细胞）膀胱泄殖腔呼吸：靠纤毛打动的水流通过体壁进行气体交换。神经：脑（咽上N节）和咽下N节各器官。另外：眼点（红色）、背触手和侧触手（刺毛为应激反应）。生殖系统：雌体：卵巢（卵黄腺）输卵管泄殖腔肛门。雄体：发达的精巢和阴茎，遇到雌性就交配。三种臂尾轮虫的区别被甲前端被甲后端被甲后被甲形状被甲长（µ）棘刺（对）棘刺（对）端开口萼花臂21园钝形椭圆形300-350尾轮虫壶状臂30园钝形宽钝形190-240尾轮虫褶皱臂30腹面三角形椭圆形S：80-180尾轮虫背面正方形L：196-250褶皱臂尾轮虫Brachionusplicatilis萼花臂尾轮虫B.calyciflorus壶状臂尾轮虫Brachionusurceus龟甲轮虫Keratella矩形龟甲轮虫螺形龟甲轮虫水轮虫Epiphanes疣毛轮虫Synchaeta旋轮虫Philodina晶囊轮虫Asplanchna三、轮虫的变异水温变化、饵料质量和培养密度等是引起轮虫形态和大小变化的主要原因。S型轮虫（B.rotundiformis）：100-190um，适合较高水温下培养；有两个亚种，SS型（高盐）、SM型（低盐）。L型轮虫（B.plicatilis）：140-290um，适合较低水温下培养的，广盐性种类。四、生殖习性单性生殖即孤雌生殖，某些水生动物在适宜的环境条件下，雌性个体产生的卵无需受精直接发育成雌性小个体，如轮虫、枝角类，卤虫等。在良好环境下：冬卵（非混交）雌性→夏卵（无需受精，挂在足基部）→雌性小个体。褶皱臂尾轮虫大约4h产卵1次，21个卵/雌，持续时间6.7d。有性生殖即混交生殖，不混交雌体产生混交雌体，混交雌体经过减数分裂产生单倍体混交卵（需精卵）。若混交雌体在年轻时不与雄体交配，不论以后有无交配混交卵均不受精，发育为单倍体的雄体；若混交雌体交配了，混交卵受精，精和卵结合为双倍体的受精卵，再形成壳厚的休眠卵。在不良环境下，如饥饿、缺氧、密度过高、种群本身产生化学物质累积和生态环境（水温、盐度、PH等)突变等，非需精卵→混交雌体→混交卵→休眠卵（冬卵）。夏卵非需精卵，壳薄而光滑，卵形，个体小；长56-130µ，宽48-96µ，挂在母体上，2-14个。冬卵（休眠卵）需精卵受精冬卵。壳厚，个体大，弓形，卵一端有较大空隙，卵黄呈橘红色长约130µ，宽88µ，不挂卵。生活史（夏卵）诱发两性生殖的因子（1）外源性因素①生育酚：维生素E直接作用于胚胎发育后期而诱发混交雌体的形成；②种群密度：种群密度的控制；③食物：食物的组成、丰度和成分对混交雌体的形成具有诱发作用；④温度：温度高（＞30℃）或低（＜25℃）混交雌体的比例增大；⑤盐度：在褶皱臂尾轮虫培养中，盐度＞35，无产生混交生殖，盐度为2和30，有低水平的混交生殖，盐度4-20，有高的混交生殖；⑥pH：较高的pH（＞8.5）产生的混交生殖越多。（2）外源性因素①遗传因子：与不同的品系有关；②母体的年龄：年龄与混交雌体的比例成负相关；③孤雌生殖的累积时代数：时代数的积累对混交雌体的产生具有诱导作用。影响休眠卵形成效率的因素遗传因素、温度、食物种类和浓度、培养液的盐度、pH值等。五、培养环境温度：适宜25~35℃，低于5℃不能存活，高于40℃死亡，繁殖临界点10℃和40℃。S型：高温下（30℃）繁殖快，个体小；L型：低温下（20-25℃）繁殖快，个体大。盐度：广盐性，2~50，适宜10~30，最适15-25（海水稀释培养）；S型：在盐度15-25下，含n-3HUFA最高；L型：在盐度30下，含n-3HUFA最高。轮虫对盐度突变适应能力差。低盐培养的轮虫投喂时要进行24小时驯化（2040）光照：间接影响。对藻类和光合细菌有利，且抑制原生动物生长。研究认为：适宜4400~10000lx。pH：6-9范围内无不良影响，适宜7.5~8.1。溶解氧：保持1.5mg/l以上，耐低氧能力强。L型轮虫缺氧状态下，经6h有半数存活。0.9mg/L时，生殖率开始下降。直接影响：轮虫增殖、活力。间接影响：共存微生物的生物相；投喂酵母时，溶氧保2mg/l时，细菌生长良好，产生足够VB12供轮虫增殖用；高溶氧则影响细菌生长。非离子氨（游离氨）：不超过1mg/L，（一般鱼类的安全值为0.025mg/L）可容纳6-10mg/L[NH3+NH4+]。氨氮NH3+H2ONH4++OH-蛋白质分解←尸体、残铒、粪便种群密度：（1）密度大：怀卵量少，繁殖慢；（2）密度小：怀卵量多，繁殖快。间疏采收：轮虫达到一定密度时（≥200个/ml），繁殖力下降，必需稀疏密度，才能正常生长。悬浊物：主要由细菌、粪便、残饵构成；量多时影响收获作业，并可能把病源性细菌带入饲育池；可用过滤网垂放于培养槽去除悬浊物。细菌细菌相：弧菌属（Vibrio）、不动杆菌属（Acinetobacter）、假单胞菌属（Pseudomonas）占优势时，增殖快。色素生产菌，如黄杆菌属（Flavobacterium）和解藻朊酸弧菌（Vibrioalginolyticus）占优势时，增殖受阻碍。可添加有益菌保持轮虫培养的稳定性。维生素V12生产菌：对轮虫增殖有明显的促进作用。原生动物及其他大型生物原生动物鞭毛虫（滴虫Monas和波豆虫Bodo）纤毛虫（游仆虫Euplotes和尾丝虫Uronema）原生动物的增加，一方面消耗有益轮虫增殖的细菌，另方面又与轮虫竞争生存空间，对轮虫的增殖非常不利。太阳虫（Oxnerellamaritima）：分泌毒物刺杀轮虫。其他大型生物桡足类、卤虫：捕食轮虫，粪便堵塞收获网目并带入培育池粘附在仔鱼身上。轮虫培养槽中食物链关系图六、轮虫培养的饵料食性：滤食性，靠轮盘部的纤毛打动水流。饵料大小：5-25m，15m以下较适合。上限由食道直径决定，下限由咀嚼器大小决定。饵料种类：细菌、酵母、微藻、小型原生动物、有机碎屑、微生物团絮、微颗粒饲料等。七、生长与繁殖生长重1-3ug/只。夏卵（挂在雌性足基部）———小轮虫————成虫（生物学最小型）——产卵期————死亡。个体发育（席贻龙、黄祥飞）胚胎发育期：卵产出---幼体孵出。生殖前期：幼体孵出---产出第一个卵。生殖期：产卵期间（第一个---最后一个）。生殖后期：最后一个卵产出---死亡。0.5~2d3d4-5d生殖量几-10多个/次，一般为2-4个/次，周期4-5天，雌性一生平均产卵21个。寿命7-10天。①与水温成反比；②环境好时，寿命长。第三节轮虫的分离和培养一、种源分离：水温＞15℃时出现，用250-300目的浮游生物网捞取，用眼或在解剖镜下吸出。休眠卵孵化产品：600美元/克；原培养轮虫池排掉旧水（留10-20cm），纳入新水和微藻，池底休眠卵即可孵化。索取或购买科研、教学、生产单位的轮虫种。二、培养方式一次性培养（batchculture）：水体在10m3以内，先培养藻类→接种→投喂→达到一定密度一次性收集，需4-7天。S型轮虫（高水温、高密度、高给饵率）半连续培养（semi-continuousculture）间收培养，水体10-40m3，藻类培养→接种→投喂→间疏采收（虹吸法）→注入藻液。每天采收，15-30天移池。L型轮虫（低水温、低密度、低给饵率）连续培养（continuousculture）：室内封闭性高密度培养系统；主要进行残饵、粪便、尸体等有机物的处理。连续培养装置的特点持续注水、持续收获、持续给饵。注水量=收获量防止有害生物的侵入，防止水质恶化。生产量（日本）S型轮虫：30-40亿/m3/日。轮虫一级培养轮虫二级培养轮虫三级培养三、大量培养1、培养容器一次性培养：≤10m3，玻璃钢槽、小型水泥池等。半连续培养：40-50m3，大型水泥池。2、培养用水砂滤加300目网过滤水，刚接种用水一定要消毒（漂白粉浓度要低：20-30ppm，曝气时间要长：2天）。3、接种一次性培养：先培养微藻，接种密度为0.1-0.5个/ml；7-10天采收；如投喂酵母，接种密度为14-70个/ml；半连续培养：接种密度为30-50个/ml。如种不足，接种水位可低些，要保证接种密度。接种密度过低（数个/ml），残饵过多，易引起原生动物大量增殖，轮虫培养失败。4、投饵微藻类：①优点：营养好，水质好；以绿藻为最优，金藻次之；②缺点：需要培养池，培养密度低（40-60个/ml）。培养设施不足时，国外采用补充浓缩小球藻（自浓缩或商品）。投喂量：小球藻100-500万细胞/ml；扁藻2.5-5细胞/ml酵母类：主要是面包酵母①优点：供应稳定，投喂简便，生长快，培养密度可达400-600个/ml；②缺点：水质易污染，单独投喂，刚接种时培养较难；酵母轮虫缺少高度不饱和脂肪酸。投喂量：5-8次/日为好A、水温在20℃以下，投喂量是5