肺泡上皮细胞培养

三、肺泡上皮细胞的培养肺泡上皮细胞的获取1.大鼠肺泡上皮细胞2.人肺泡上皮上皮细胞无锡菩禾生物医药技术有限公司上海拜力生物科技有限公司上海酶研生物科技有限公司肺泡壁是由单层扁平上皮构成，有三种细胞：肺泡：肺泡壁是由单层扁平上皮构成，有三种细胞：A.扁平上皮细胞（I型细胞），其基膜紧贴毛细血管。B.分泌上皮（II型细胞），该细胞突向管腔或夹在扁平上皮细胞之间，可分泌表面活性物质。C.隔细胞：位于肺泡间隔中，当进入肺泡腔内就叫尘细胞。在尘细胞的细胞质内有大量尘埃颗粒，属于吞噬细胞。D.肺泡隔：是相邻肺泡壁之间的结构，由结缔组织和丰富的毛细血管组成。培养条件培养条件：DMEM培养基(GIBCO，添加NaHCO31.5g/L，丙酮酸钠0.11g/L)；优质胎牛血清10%，细胞生长因子。气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度。培养方法1、取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态；2、待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养；3、细胞传代1）吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次；2）添加0.125%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；3）用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5ml，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；4）待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。需注意问题及措施需要注意的问题防止ATII细胞向ATI细胞分化防止ATII细胞向成纤维细胞分化措施添加有利于细胞分裂、繁殖、表型维持的细胞因子，如重组人表皮生长因子、转铁蛋白、肾上腺素等，再配以1%FBS。谢谢大家！祝大家元旦快乐！