SDS-loading-buffer

5×SDS-PAGELoadingBuffer配制方法组份浓度：250mMTris-HCl（pH6.8）10％（W/V）SDS0.5％（W/V）BPB(溴酚蓝)50％（V/V）甘油5％（W/V）β-巯基乙醇配制量：5mL配制方法：1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。1MTris-HCl1.25mLSDS0.5gBPB25mg甘油2.5mL2.加入去离子水溶解后定容至5mL。3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。5.加入2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右loadingbuffer的中文名字叫上样缓冲液,6*的缓冲液中可以显示两条带，前面的蓝色的条带是溴酚蓝，代表的片段大小是300bp，后面的有点绿色的条带是二甲苯青，代表的片段大小在4000bp左右。loadingbuffer的功能主要有两个。第一，里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；第二，里边的成分甘油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE，从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。细胞裂解后的裂解液，加loading100℃加热，也是为了中止酶促反应，防止提取的蛋白质降解。6×loadingbuffer一般配置：6×Loadingbuffer:30mMEDTA36%(v/v)Glycerol0.05%(w/v)XyleneCyanolFF0.05%(w/v)BromophenolBlue主要用于DNA电泳10×Loadingbuffer:30mMEDTA50%(v/v)Glycerol0.25%(w/v)XyleneCyanolFF0.25%(w/v)BromophenolBlue主要用于RNA电泳10Xloadingbuffer中仅有色素溴酚蓝（BromophenolBlue)一种染料（浓度0.05%）；6Xloadingbuffer中含色素溴酚蓝（BromophenolBlue)、二甲苯腈蓝FF（XyleneCyanolFF)两种染料（浓度都是0.05%）在琼脂糖凝胶（0.5%~1.4%）中溴酚蓝约BromophenolBlue与300bp的双链线状DNA的迁移速度相同，二甲苯腈蓝FF则与4kbp的双链线状DNA的迁移速度相等。6Xloadingbuffer是用来上样的；10Xloadingbuffer是stopbuffer，是停止酶促反应的，如果一定要用10Xloadingbuffer的上样当然也可以，唯一要注意的是：10Xloadingbuffer中多了一样SDS，它会使酶类如taq酶变性，以PCR产物为例，在电泳泳道上会产生一片弥散，如果电泳跑的距离短，和多出来一条带没有什么区别（大概1000bp左右）。5×SDS-PAGELoadingBuffer配制方法组份浓度：250mMTris-HCl（pH6.8）10%（W/V）SDS0.5%（W/V）BPB50%（V/V）甘油5%（W/V）β-巯基乙醇配制量：5mL配制方法：1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。1MTris-HCl1.25mLSDS0.5gBPB25mg甘油2.5mL2.加入去离子水溶解后定容至5mL。3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。5.加入2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右