1.1DNA重组技术的基本工具公开课-

第1节DNA重组技术的基本工具第一章基因工程（人工、体外操作、分子水平、定向改造生物性状）苏云金杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。苏云金杆菌毒蛋白（Bt基因）（供体细胞）（受体细胞）（Bt基因）1.1基本工具一、“分子手术刀”——限制酶主要来源：原核生物Ⅰ基因工程切割外源DNA，自身防御寻根问底p4左限制酶的种类与命名：现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制酶。EcoRⅠSmaⅠ粘质沙雷氏杆菌（Serratiamarcesens）大肠杆菌（EscherichiacoliR）练习：流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae)的d菌株中先后分离到3种限制酶，则分别命名为:HindⅠ、HindⅡ、HindⅢAAATGCTATTCGADNA（脱氧核糖核酸）DNA双链（脱氧核苷酸链）DNA双链（脱氧核苷酸链）AAATGCTATTCGADNA（脱氧核糖核酸）碱基脱氧核糖磷酸脱氧核苷酸1.1基本工具一、“分子手术刀”——限制酶主要来源：原核生物作用特点：作用位点：AAATGCTATTCGAⅠ识别双链DNA分子特定的（脱氧）核苷酸序列并切割磷酸二酯键基因工程DNA双链（脱氧核苷酸链）EcoRⅠ（在G与A之间切割）黏性末端中轴线AAATGCTATTCGAEcoRⅠ（在G与A之间切割）SmaⅠ（在G与C之间切割）黏性末端平末端中轴线中轴线回文序列图1-3切割DNA分子时产生的两种不同末端（箭头表示酶的切割位置）作用结果1.1基本工具二、“分子缝合针”——DNA连接酶类型E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源功能大肠杆菌T4噬菌体恢复磷酸二酯键只能连接黏性末端能连接黏性末端和平末端(效率较低)相同点差别Ⅰ基因工程EcoRⅠ切此位点EcoRⅠ切此位点双链断开不同来源的DNA片段结合图1-4DNA分子的切割和连接E·coliDNA连接酶限制酶DNA连接酶DNA聚合酶解旋酶作用底物作用部位作用结果DNA分子磷酸二酯键形成黏性末端或平末端磷酸二酯键形成重组DNA分子DNA分子片段基因工程DNA复制《导》p2EcoRⅠ切此位点EcoRⅠ切此位点双链断开不同来源的DNA片段结合图1-4DNA分子的切割和连接E·coliDNA连接酶限制酶DNA连接酶DNA聚合酶解旋酶作用底物作用部位作用结果DNA分子磷酸二酯键形成黏性末端或平末端脱氧核苷酸磷酸二酯键形成重组DNA分子DNA分子片段磷酸二酯键形成新的DNA分子DNA分子氢键形成单链DNA分子基因工程DNA复制《导》p21.1基本工具三、“分子运输车”——运载体种类：条件：Ⅰ质粒λ噬菌体的衍生物动植物病毒能在受体细胞中复制并稳定保存有一个至多个限制酶切割位点有标记基因（抗性基因）基因工程