仪分实验-荧光法测定维生素B2药物中核黄素含量

2020/3/23实验报告格式1、实验目的（简单）2、实验原理（详细）3、试剂仪器（简单）4、实验步骤（简单）5、数据处理（详细，表格，图）6、结果讨论（重点）①、回答思考题的问题②、讨论引入误差的原因③、实验操作中的注意事项及减小误差的方法荧光法测定维生素B2药物中核黄素含量实验二维生素B22020/3/23维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。稀释后有强烈荧光，维生素B2溶液在430～440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，其峰值波长为525nm。一、实验原理2020/3/23（1）定量依据：维生素B2在水中是强的荧光物质，并且在低浓度时，荧光强度与维生素B2浓度呈正比：If=kc（2）定量方法（标准曲线法）：测定一系列已如浓度的维生素B2的荧光强度，然后以荧光强度对维生素B2浓度作标准曲线，再测定未知浓度维生素B2的荧光强度，把它代入标准曲线方程求出其浓度。If=kc荧光强度vs.浓度标准曲线荧光强度核黄素浓度样本二、实验仪器2020/3/23测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。三、实验步骤及注意事项吸量管的使用，溶液转移，定容同样条件下测定读取荧光数据荧光仪的操作，发射光谱和激发光谱绘制If对浓度C拟合标准曲线4.数据处理移液管的使用•常见移液管：标有温度和容量(注意是否标有吹)•用途：准确移取一定体积的液体•操作：洗涤(蒸馏水)、润洗(3次)、移液、洗涤干净注意事项：1、整个操作过程中，保持移液管的垂直；2、读数时视线与凹液面平齐溶液下端1-2cm1.打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初始化仪器。2.仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适当的仪器参数：确定激发波长和发射波长。3.样品测定。4.退出主程序，关闭计算机，先关主机，最后关氙灯。基本操作四、数据处理2020/3/23浓度（10-1μg.mL-1）012345X荧光强度扣除空白1.原始数据2.标准曲线的绘制和未知样品的浓度计算五、实验注意事项1.实验过程中，注意使用石英比色池时必须保持四面干净，拿稳棱角注意不要摔落;2.实验完毕，注意检查仪器是否运行正常，关闭程序是否正确。3.试剂取后，得放回原处，保持试验台整洁。2020/3/231.为什么荧光光度法较吸收光度法灵敏度高？2.维生素B2在pH=6~7时荧光最强，本实验为何在酸性溶液中测定？3.如何绘制激发光谱和荧光发射光谱？4.哪些因素可能影响维生素B2的荧光强度？2020/3/23六、实验思考题