蛋白纯化策略和工艺

蛋白纯化策略和工艺吕虎2017.8.18五大层析原理内容:·简介·蛋白纯化策略·如何建立纯化方案·纯化工具·总结简介早期的蛋白纯化1789-1940s层析纯化1950s-1980s今天的蛋白纯化决定因素层析技术蛋白纯化策略蛋白纯化策略CIPPKEEPSIMPLE关键因子分辨率速度载量回收率Phase1：CapturePhase2：IntermediatePurificationPhase3：Polishing层析技术的推荐交替运用互补技术，合理衔接减少样品处理，尽量简单化综合考虑起始和结束条件的衔接设计合理的纯化路线互相衔接，减少中间处理建立纯化方案明确纯化目的了解纯化产物的特性CIPP纯化策略建立有效分析方法确立最终的纯化方案明确纯化目的MassspectrometryAntigenforimmunizationFunctionalstudiesStructuralstudiesTherapeuticproteinHomogeneityActivityPurityAmountpgngugmggkgOftennotnecessaryrigidrequirementsModerate＞80%High＞95%-99%Veryhigh＞99%Oftennotnecessaryrigidrequirements了解目的产物的特性目的产物的特性:·分子量·等电点·可溶性·稳定性·…起始条件:·样品量·pH·离子强度·成分·关键杂质·…CIPP纯化策略筛选层析技术筛选填料优化条件筛选层析技术：标签蛋白筛选层析技术:非标签蛋白筛选填料筛选填料筛选填料不同HIC填料分离同种蛋白质的分离结果优化条件不同pH条件下，目的蛋白与DEAE柱的结合情况优化条件不同洗脱方式对蛋白纯化结果的影响有效的分析方法纯化追踪表PurificationstepProteinConc.（mg/ml）Volume（ml）AmounttotalProtein（mg）Totalactivity（U）Specificactivity（U/mg）recovery（%）Purificationfactor回收率&纯化因子纯化工具手动纯化:·重力纯化·磁珠纯化·离心纯化优点:·简单易掌握·经济自动纯化:·预装柱配合层析设备优点:·自动化——解放人力更高效·洗脱手段多样化——结果更优·高重复性，结果可追溯总结·纯化目的&目的产物特性·CIPP纯化策略√Capture、IntermediatePurificationandPolishing√综合运用多种层析技术√互相衔接√保持简单·纯化工具思考：如果要得到一个去GST标签的蛋白，该如何设计纯化实验？如何选择层析柱？如何搭配层析设备？中试放大？Thankyouforyourlistening!