6.-定量PCR仪日常维护(SOP+7500V2.0+QuantStudio-7)-QST

1TheworldleaderinservingscienceModule7定量PCR仪日常维护2•电脑及软件的维护•定量PCR仪主机的维护3•专机专用•工程师现场安装时，会确认计算机是否合乎要求•请勿自行更换电脑•请勿自行安装其它第三方软件•预防电脑病毒•不使用与实验无关的移动存储器•使用U盘时，必须先把U盘在自己的电脑上格式化•最好使用专用的U盘电脑及软件的维护4•数据线的插拔•避免经常拔插连接计算机与定量PCR仪的数据线•必须在关闭电脑及主机的情况下才可以拔插数据线•删除多余的USB设备•执行硬盘碎片整理程序•当运行实时定量PCR仪及使用软件分析实验结果时，计算机会删除并创建若干文件，计算机硬盘的空闲空间会被分割成越来越多的小块当硬盘驱动器上文件以分解的碎片存储时，程序需要更长的时间才能存取文件•碎片整理实用程序将一个文件分解开的多个碎片合并在一起，并存储到硬盘的同一个位置，从而优化系统性能。•建议每月执行一次或当碎片比例达到20%以上时。电脑及软件的维护5•如何整理硬盘碎片？在Windows桌面上，选择StartProgrammfilesAccessoriesSystemtoolsDefragment。•单击Defragmentnow执行硬盘碎片整理程序6•如何整理硬盘碎片？在Windows桌面上，选择StartProgrammfilesAccessoriesSystemtoolsDefragment。•单击Defragmentnow执行硬盘碎片整理程序7•操作系统更新•除非美国应用生物系统公司代表通知您更新操作系统，否则请不要更新连接定量PCR仪的计算机的操作系统。•新版本的MicrosoftWindows操作系统可能与SDS软件存在冲突，并导致仪器不能正常运行。•实验数据备份•备份*.sds或*.eds文件：刻录光盘或转移数据到其它电脑电脑及软件的维护8•电脑及软件的维护•定量PCR仪主机的维护9•电源开关•如果主机和计算机连续开机使用，每周应该进行一次关闭主机电源开关，关闭计算机，然后重新打开计算机和仪器电源开关的操作•注意正确的计算机和主机电源开关顺序•主机表面清洁•使用不脱毛的布块擦拭仪器表面•切勿使用有机溶剂清洁定量PCR仪定量PCR仪主机的维护10StepOne系列定量PCR仪主机的维护11操作步骤1.将空间校准板放入仪器中，在软件界面，依次选择Instrument→InstrumentMaintenanceManager2.在弹出的新窗口，点击Spatial，再选择StartCalibration3.勾选TheCalibrationplateisloadedintotheinstrument，选择STARTRUN，仪器开始进行空间校准4.数据分析，Passed代表通过校准，Failed代表失败。点击“Finish”完成校准，并进行保存空间(Spatial)校准12空间校准13•建议每一年半执行一次空间校准•执行空间校准请使用空间校准板空间校准14操作步骤1.将背景反应板放入仪器中，在软件界面，依次选择Instrument→InstrumentMaintenanceManager2.在弹出的新窗口，点击Background，再选择StartCalibration3.勾选Thebackgroundplateisloadedintotheinstrument，选择STARTRUN，仪器开始进行背景校准4.数据分析，Passed代表通过校准，Failed代表失败。点击“Finish”完成校准。如果Failed，需要清除污染。背景(Background)校准15操作步骤背景校准-清除污染清除污染后再次运行背景校准，确认污染已除去。16•建议每月执行一次背景校准•如果发现信号异常，建议立即进行背景校准•执行背景校准使用背景校准板背景校准17纯荧光（Dye）校准操作步骤1.将反应板1放入仪器中，在软件界面，依次选择Instrument→InstrumentMaintenanceManager2.在弹出的新窗口，点击Dye，再选择SystemDyeCalibration3.点击StartCalibration，在Setup界面，勾选Plate1(FAMdye,ROXdye,andInstrumenNormalization)isloadedintheinstrument4.单击Next，在Run界面，单击StartRun开始纯荧光校准5.根据提示，再将反应板2放入仪器，在DyeCalibrationSetup向导中，选取DyePlate2(VICdye,JOEdye,andSYBRGreendye)isloadedintheinstrument，单击ContinueCalibration6.数据分析，确认染料光谱是否正常18纯荧光校准19纯荧光校准20纯荧光校准21•建议每一年半执行一次纯荧光校准•如果使用自定义的荧光，必须进行纯荧光校准自定义荧光校准的流程请见仪器说明书•执行纯荧光校准请使用纯荧光校准板纯荧光校准22时间间隔工作每周检查计算机磁盘空间；归档或备份您的实验文件关闭控制StepOne™扩增仪的计算机，30秒后再次打开计算机电源用不脱毛布块清洁StepOne™扩增仪的表面整理计算机硬盘驱动器碎片每月执行背景校准1.5年执行空间校准执行纯荧光校准StepOne系列定量PCR系统日常维护事项237500/7500Fast定量PCR仪主机的维护-V2.024•软件自动检测校准数据，如未校准或校准过期，会弹出提示对话框，点击OpenInstrumentMaintenanceManager，打开校准界面。25在InstrumentMaintenanceManager界面，依次完成如下校准：−ROI−Background−Optical−Dye−RNaseP（可选）26•ROI(RegionsofInterest)校准用于生成目标区数据。•校准期间生成的数据，允许SDS软件映射样本块（Block)上反应孔的位置，从而在仪器操作期间，使软件可判断出反应板上特定反应孔中荧光强度的增量。•由于定量PCR仪使用一组滤光片分离检测运行期间生成的荧光能量，所以必须为每个滤光片生成校准图像，以修正光学系统中的微小差异。ROI校准277500ROI校准反应板准备ROI校准28ROI校准点击StartCalibration29ROI校准：按照软件向导进行操作30ROI校准：按照软件向导进行操作31完成ROI校准−校准成功，则Status显示为Current。−校准失败，则Status显示为Failed。ROI校准结果32手动ROI校准如出现过饱和的情况，将曝光时间减少一半，再重新点击Snapshot33手动ROI校准依次完成所有5个滤光片的ROI校准最终5个滤光片的状态都显示为OK34•建议每半年执行一次ROI校准•如果怀疑仪器光路受到影响如搬动仪器，建议进行ROI校准•执行ROI校准请使用ROI校准板ROI校准35•背景校准程序测量定量PCR仪的背景荧光强度•在运行校准程序期间，定量PCR仪在10分钟内连续地读取背景校准反应板的荧光强度，运行温度为60℃•随后，SDS软件计算运行期间所收集到的荧光强度的平均值，提取出结果并保存到校准文件中•软件在今后的分析中将自动调用此校准文件，从实验数据中扣除背景信号背景(Background)校准36准备背景反应板：−光谱校准试剂盒（Spectralcalibrationkit)中的背景板(Backgroundplate)运行背景校准37•Background背景校准：−选择背景校准界面−点击StartCalibration−根据提示放入背景反应板−点击StartRun−察看背景校准结果•分析背景校准数据−校准成功，则Status显示为Current。−校准失败，则Status显示为Failed。运行背景校准38•执行背景校准，当背景荧光信号异常（强度超过72000或7500的滤光片E超过90000）时•实验中，连续出现不正常的偏高信号，并表明可能存在荧光物质污染时加热槽荧光污染的判断39清除热槽中的污染注意关闭电源！40•清洁样本块中污染的反应孔：−a.用移液器吸取少量水或乙醇并滴入每个污染的反应孔中。−b.吹打数次。−c.将废液吸入废液杯中。•如未能有效清除污染物，重复以上步骤：−乙醇三次，去离子水三次•确认反应孔中的残留液体完全干燥清除热槽中的污染41•运行背景校准板•确认污染已除去•如未除去，重新清洁•使用最新的背景校准确认已除去热槽中的荧光污染物42•建议每月执行一次背景校准•如果发现信号异常，建议立即进行背景校准•执行背景校准使用背景校准板背景(Background)校准43•Optical光路校准：−选择Optical校准界面−点击StartCalibration−根据提示放入ROI反应板−点击StartRun−察看Optical校准结果•分析Optical校准数据−校准成功，则Status显示为Current。−校准失败，则Status显示为Failed。光路(Optical)校准44•建议每半年执行一次光路校准•执行光路校准使用ROI校准板光路校准45•纯荧光校准根据一系列荧光标准品收集荧光数据•软件将不同纯荧光标准品的荧光信息分析并存储到程序中•每次实验运行中，SDS软件接收原始光谱信号。软件将原始光谱与纯荧光文件中包含的纯荧光标准进行比较，以确定样本中使用的每一种荧光的光谱表现纯荧光(Dye)校准46•在每次执行纯荧光反应板之前，必须执行ROI校准和背景校准•使用纯荧光校准板纯荧光校准47|LifeTechnologiesProprietary&Confidential|3/25/2020纯荧光校准：−选择Dye校准界面−点击StartRun，根据向导进行校准−完成后软件判读结果是否能够通过纯荧光校准48•建议每半年执行一次纯荧光校准•如果使用自定义的荧光，必须进行纯荧光校准–自定义荧光校准的流程请见仪器说明书•执行纯荧光校准使用纯荧光校准板纯荧光校准49•根据需要更换卤素灯•当您拿取卤素灯时，请戴上无粉手套•关闭电源开关，并拔下电源插头，冷却15分钟。更换卤素灯50更换卤素灯517500定量PCR系统日常维护事项52QuantStudio7定量PCR仪主机的维护53校准主界面54ROI校准55操作步骤1.准备ROI校准反应板。2.单击Maintenance中的ROI选项，在ROICalibration屏幕中，单击StartCalibration。3.按照指示执行校正，当仪器侧门打开时，装载ROI校准反应板。4.在Setup选项卡，选择ChecktheboxwhentheROIcalibrationplatehasbeenloaded，然后单击Next。5.在Run屏幕中，单击STARTRUN。6.运行完成后，在Analysis界面中查看校准数据。7.如数据正常，单击Finish以完成校正，当提示保存结果时，单击Yes。ROI校准56查看ROI校准数据•从FilterSet下拉列表中选择一个滤光片，然后检查确认相应的ROI图像中所有的反应孔是否都被绿色的圆圈围绕。•依次检查其余滤光片的ROI图像。•如出现不正常的校准结果，可能是由于block或热盖没有在正确的位置，需要重新装载block或热盖。合格的图像所有反应孔都被绿色的圆圈围绕不合格的图像一些孔被红色圆圈围绕，或没有被圆圈围绕57•建议每半年执行一次ROI校准•如果怀疑仪器光路受到影响如搬动仪器，建议进行ROI校准•执行ROI校准请使用ROI校准板ROI校准58背景(Background)校准59操作步骤1.准备背景校准反应板。2.单击Maintenance中的击Background选项，在BackgroundCalibration屏幕中，单击StartCalibration。3.按照指示执行校正，当仪器侧门打开时，装载背景校准反应板。4.在Setup选项卡，选择Checktheboxw