通便功能评价方法(征求意见稿)及修订说明

1通便功能评价方法附件10：通便功能评价方法（征求意见稿）保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定Items,PrinciplesandResultAssessment1试验项目1.1动物实验1.1.1体重1.1.2小肠运动实验1.1.3排便时间1.1.4粪便重量1.1.5粪便粒数1.1.6粪便性状1.2人体试食试验1.2.1症状体征1.2.2粪便性状1.2.3排便次数1.2.4排便状况2试验原则2.1动物实验和人体试食试验所列指标均为必做项目。2.2实验中复方地芬诺酯或洛哌丁胺的造模剂量应通过预实验确定。2.3除对便秘模型动物各项必测指标进行观察外，还应对正常动物进行观察，不得引起动物明显腹泻。2.4排便实验中模型成立的条件为排首粒黑便时间、5或6小时内排粪便重量和粪便粒数与阴性对照组差异均有显著性。22.5排便次数的观察时间试验前后应保持一致。2.6在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。3结果判定3.1动物实验：5或6小时内排粪便重量和粪便粒数任一项结果阳性，同时小肠运动实验和排便时间任一项结果阳性，可判定该受试样品通便功能动物实验结果阳性。3.2人体试食试验：排便次数明显增加，同时粪便性状和排便状况任一项结果明显改善，可判定该受试样品具有通便功能的作用。3通便功能检验方法MethodfortheAssessmentofFacitatingFecesExcretionFunction1动物实验1.1小肠运动实验1.1.1原理经口灌胃给予造模药物复方地芬诺酯或洛哌丁胺，建立小鼠小肠蠕动抑制模型，计算一定时间内小肠的墨汁推进率，来判断模型小鼠胃肠蠕动功能。1.1.2仪器和材料1.1.2.1仪器和试剂手术剪、眼科镊、直尺、注射器、天平、活性碳粉、阿拉伯树胶、复方地芬诺酯或洛哌丁胺。1.2.2.2试剂配制1.1.2.2.1墨汁的配制：精确称取阿拉伯树胶100g，加水800ml，煮沸至溶液透明，称取活性碳粉100g加至上述溶液中煮沸三次，待溶液凉后定容到1000ml，于冰箱中4℃保存，用前摇匀。1.1.2.2.2复方地芬诺酯或洛哌丁胺混悬液的配制：复方地芬诺酯剂量为5-6mg/kgBW,洛哌丁胺剂量为5-6mg/kgBW。依据复方地芬诺酯或洛哌丁胺的实用剂量取用，用研钵研碎呈粉末后按实验所需浓度配制，注意要待溶质完全溶解、充分摇匀后使用。1.1.3实验方法1.1.3.1实验动物选用成年健康雄性小鼠，体重在18-22g，每组10-15只。1.1.3.2剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组，一个阴性对照组，一个模型对照组。以人体推荐量的10倍为其中一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。阴性对照组和模型对照组同样途径给溶剂。受试样品连续给予时间7天，必要时可延长至15天。41.1.3.3实验步骤1.1.3.3.1模型的建立给受试样品7天后，各组小鼠禁食不禁水20小时。模型对照组和三个剂量组灌胃给予复方地芬诺酯5-6mg/kgBW,或洛哌丁胺5-6mg/kgBW，阴性对照组给蒸馏水。1.1.3.3.2指标测定的方法给复方地芬诺酯或洛哌丁胺0.5小时后，剂量组灌胃给予含相应浓度受试样品的墨汁（含10%活性碳粉、10%阿拉伯树胶），阴性和模型对照组给墨汁灌胃。25分钟后立即脱颈椎处死动物，打开肠腔分离肠系膜，剪取上端自幽门、下端至回盲部的肠管，置于托盘上，轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。按下式计算墨汁推进率：墨汁推进率（%）=墨汁推进长度（cm）/小肠总长度（cm）×100%。1.1.4数据处理及结果判定墨汁推进率需进行数据转换，X=Sin-1√p(p为墨汁推进率，需用小数表示)。进行方差分析时，需按方差齐性的程序进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。在模型成立的前提下，受试样品剂量组小鼠的墨汁推进率显著高于模型对照组的墨汁推进率时，可判定该项实验为阳性。1.2排便时间、粪便粒数和粪便重量的测定1.2.1原理经口灌胃给予造模药物复方地芬诺酯或洛哌丁胺，建立小鼠便秘模型，测定小鼠首粒排黑便排便时间、5或6小时内排便粒数和排便重量（干重，下同），来反映模型小鼠的排便情况。1.2.2仪器和材料1.2.2.1仪器和试剂眼科镊、注射器、分析天平、活性碳粉、阿拉伯树胶、复方地芬诺酯或洛5哌丁胺。1.2.2.2试剂配制1.2.2.2.1墨汁的配制：同小肠推进实验。1.2.2.2.2复方地芬诺酯或洛哌丁胺混悬液的配制：复方地芬诺酯剂量为10-12mg/kgBW,洛哌丁胺剂量为10-12mg/kgBW。依据复方地芬诺酯或洛哌丁胺的实用剂量取用，用研钵研碎呈粉末后按实验所需浓度配制，注意要待溶质完全溶解、充分摇匀后使用。1.2.3实验方法1.2.3.1实验动物选用成年健康雄性小鼠，体重在18-22g，每组10-15只。1.2.3.2剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组，一个阴性对照组和一个模型对照组。以人体推荐量的10倍为其中一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。空白对照组和模型对照组同样途径给溶剂。受试样品连续给予时间7天，必要时可延长至15天。1.2.3.3实验步骤1.2.3.3.1模型的建立给受试样品7天后，各组小鼠禁食不禁水20小时。阴性对照组给蒸馏水，模型对照组和三个剂量组灌胃给予复方地芬诺酯10-12mg/kgBW,或洛哌丁胺10-12mg/kgBW。1.2.3.3.2指标测定的方法给复方地芬诺酯或洛哌丁胺0.5小时后，阴性对照组和模型对照组小鼠用墨汁灌胃，剂量组灌胃给予含相应浓度受试样品的墨汁，动物均单笼饲养，正常饮水进食。从灌墨汁开始，记录每只动物首粒排黑便时间、5或6小时内排便粒数及重量。1.2.4数据处理及结果判定资料可用方差分析，需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不6齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。在小肠便秘模型成立的前提下，受试样品组小鼠的首粒排黑便时间明显短于模型对照组，可判定该项指标为阳性。5或6小时内排便粒数明显高于模型对照组，可判定该项指标为阳性。5或6小时内排便重量明显高于模型对照组，可判定该项指标为阳性。1.3.结果判定：5或6小时内排黑便重量和排便粒数任一项结果阳性，同时小肠推进实验和排便时间任一项结果阳性，可判定受试物具有润肠通便作用。1.4.注意事项1.4.1实验中应将复方地芬诺酯或洛哌丁胺悬液不断振荡，以保持其浓度均一。1.4.2墨汁配制时待阿拉伯胶加热透明后再加入碳末。1.4.3应除去小鼠排出第一粒黑便前的粪便。1.4.4实验中复方地芬诺酯或洛哌丁胺的造模剂量应通过预实验确定。1.4.5排便实验中模型成立的条件为排首粒黑便时间、5或6小时内排粪便重量和粪便粒数与阴性对照组差异均有显著性。2人体试食试验2.1.纳入受试者标准：2.1.1排便次数减少和粪便硬度增加者。2.1.2大便一周少于3次者。2.1.3无器质性便秘者。2.1.4习惯性便秘者。2.2.受试者排除标准2.2.1不能经口进食者或不能按规定服用受试样品者。2.2.2主诉不清者。2.2.3体质虚弱无法进行试验者。2.2.430天内进行过外科手术引起便秘症状发生者。72.2.5因严重器质病变引起的近期排便困难者（结肠癌，严重的肠炎、肠梗阻，炎症性肠病等）2.2.6便秘困难并拌有疼痛者。2.2.730天内发生过急性胃肠道疾病者。2.2.8孕期及经期妇女。2.2.9合并有心血管、肝、肾和造血系统等严重全身疾病患者。2.2.10有其它伴随疾病正在治疗者。2.2.11短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者。2.3试验设计及分组要求采用自身和组间对照两种试验设计。按受试者的便秘症状（排便次数、粪便性状、症状持续时间等）随机分为试食组和对照组，尽可能考虑到影响结果的主要因素如年龄、性别、日常饮食、便秘原因等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。每组受试者不少于50例。2.4受试样品的剂量和使用方法试食组按推荐服用方法、服用量服用受试产品，对照组可服用安慰剂或采用空白对照，也可服用具有同样作用的阳性物。按双盲法进行试食试验。受试样品给予时间7天，必要时可以延长至15天。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。2.5观察指标：2.5.1安全性指标：2.5.1.1一般状况包括精神、睡眠、饮食、大小便、血压等2.5.1.2血、尿、便常规检查2.5.1.3肝、肾功能检查2.5.1.4胸透、心电图、腹部B超（在试验开始前检查一次）。2.5.2功效性指标：每日对受试者进行询问并记录，同时记录受试者服用受试样品前6天及试验结束前3天的情况。2.5.2.1每日排便次数8记录受试者试食前后排便次数的变化，以实际排便次数为参数进行统计。2.5.2.2排便状况根据排便困难程度（腹痛或肛门烧灼感、下坠感、不适感，有否便频但排便困难而量少等症状）分为I－IV级，统计积分值。I级（0分）：排便正常II级（1分）：仅有下坠感、不适感III级（2分）：下坠感、不适感明显，或有便频但排便困难而量少，较少出现腹痛或肛门烧灼感IV级（3分）：经常出现腹痛或肛门烧灼感，影响排便2.5.2.3粪便性状根据布里斯托（Bristol）粪便性状分类法将粪便性状分为I－III级。I级（0分）：像香肠或蛇，平滑而且软；像香肠，但在它的表面有裂痕；软的团块，有明显的边缘（容易排出）II级（1分）：香肠形状，但有团块；松散的块状，边缘粗糙，像泥浆状的粪便III级（2分）：分离的硬团，像果核（不易排出）2.5.2.4日常饮食情况：纤维素类食物的比例。2.5.2.5记录有无不良反应（恶心、胀气、腹泻、腹痛及粪便异常等）。2.6数据处理和结果判定试验数据为计量资料，可用t检验进行分析。凡自身对照资料可以采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用t’检验或秩和检验；但变异系数太大（如CV50％）的资料应用秩和检验。试食前后试食组自身比较排便次数明显增加，排便状况和粪便性状二项指标中一项指标积分明显下降，差异有显著性，试食后试食组与对照组比较，排便次数、排便状况和粪便性状任一项明显改善，差异有显著性，可判定该受试样品具有通便功能作用。9通便功能评价方法修订说明一、承担单位本功能修订方案是受国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司委托，由江苏省疾病预防控制中心作为主要负责单位起草，由上海市疾病预防控制中心和浙江省疾病预防控制中心共同参与验证完成。几家单位均是中华人民共和国卫生部颁布的“保健食品功能评价程序和检验方法1996”和“保健食品检验与评价技术规范2003年版”的起草单位之一，因此在保健食品功能评价检验方法技术规范的制定中有很好的基础和经验。二、主要工作过程为了做好技术规范的制定工作，国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司（简称保化司）于2009年4月召开了“保健食品功能评方法及有关程序修订”课题协作组工作会议，参会的有中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、广东省疾病预防控制中心、上海市疾病预防与控制中心、北京市疾病预防控制中心、四川大学华西公共卫生学院、中国中医研究院东直门医院和国家食品药品监督管理局保健食品审评中心的专家近15人，会上对“保健食品功能评方法及有关程序修订”修订的原则