常见的微生物育种方法

常见的微生物育种方法2主要内容一、微生物育种简介二、紫外线诱变选育（1）诱变机理（2）DNA损伤修复（3）紫外线诱变育种程序（4）实例：酸性α-淀粉酶高产菌株选育（重点介绍测定方法及结果）Thankyou!4一、微生物育种简介◆为什么要发展微生物育种技术微生物育种：是以提高微生物菌株生产性能为目标，人为改造微生物菌株的遗传性能的过程。◆主要微生物育种技术诱变育种基因重组育种基因工程育种代谢调控育种返回5（1）诱变机理紫外线诱变的主要生物学效应是由于DNA变化而造成的，DNA对紫外线有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的嘧啶，它比嘌呤更为敏感。它能引起DNA双链之间或同一条链上两个相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，从而导致基因突变，从而引起微生物突变或死亡。经紫外线损伤的DNA，能被可见光复活。6返回7返回8（2）DNA损伤修复返回9（3）紫外线诱变育种程序返回10接种枯草芽孢杆菌37℃24h活化菌株100mL无菌水取2环加无菌玻璃珠置摇床上振荡20min106-108个/mL菌悬液各取5mL菌悬液置于处磁力搅拌器上紫外灯照射1min先打开皿盖开启磁力搅拌器照射0s、50s、60s、70s、80s、90s、100s、110s、120s暗光条件下分别取经紫外线诱变的菌悬液0.1mL进行涂布固体鉴别培养基倒置于37℃恒温培养箱中避光培养36h计算致死率喷洒碘液挑选单菌落变色圈直径与菌落直径比值H/C的菌株18棵摇瓶发酵实验，测定其产酶能力选取酶活最高的菌株进行复筛111返回12酶活测定5ml2%可溶性淀粉5ml0.02mol/LpH6.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液60℃恒温水浴中预热4～5min酶液1ml立即记录时间充分摇匀用滴管取反应液约0.5ml预先充满比色稀碘液(约1.5ml）当与标准终点色相同时（穴内颜色反应由紫色逐渐变为红棕色），即为反应终点，并记录时间t(min)2ml标准终点色溶液，作为比较颜色的标准发酵液经5000rpm离心10min，取上清作为供试酶液213计算酶活酶活用1ml酶液于60℃，pH6.0的条件下，1h液化可溶性淀粉的克数来表示[g可溶性淀粉/ml·h]酶活力单位=60/t×5×2%314实验结果分析致死率与诱变剂剂量存在正相关1、紫外诱变规律：4152、筛选结果经过紫外线诱变的菌株大部分酶活力有所提高516二次紫外线诱变结果经二次紫外诱变后酶活提高不显著，菌株UV－12对紫外线表现出一定的耐受性返回