2007-2012年生物高考题按知识点分类汇编：6PCR技术的基本操作和应用

“汉水丑生的生物同行”超级群整理校对“汉水丑生的生物同行”超级群整理校对PCR技术的基本操作和应用本卷整理：【粤】蓝色冰点（庞淇尹广东省吴川市第一中学）2012江苏22.下列事实能体现细胞全能性的是（）“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）A.棉花根尖细胞经诱导形成幼苗B.单细胞的DNA在体外大量扩增C.动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体D.小鼠体细胞经诱导培育成小鼠“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）【答案】AD【解析】在多细胞生物中每个体细胞的细胞核具有个体发育的全部基因，只要条件许可，都可发育成完整的个体。要能产生完整的个体，才能体现全能性。【试题点评】本题考查细胞全能性这一知识点，要求学生能根据细胞全能性的原理，对一些现象进行分析。属于理解层次。2011江苏33．（8分）请回答基因工程方面的有关问题：(1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为。②在第轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）“汉水丑生的生物同行”超级群整理校对“汉水丑生的生物同行”超级群整理校对(2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）①第1组：；②第2组：。(3)PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）(4)用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1kb即1000个碱基对)，请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、Mbol的切割位点。33．（8分）(1)①15/16②三“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）(2)①引物I和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效②引物I’自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效(3)DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上(4)见右图2011北京31.（16分）“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）T-DNA可随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥，待植株形成花“汉水丑生的生物同行”超级群整理校对“汉水丑生的生物同行”超级群整理校对蕾时，将地上部分浸入农杆菌（其中的T-DNA上带有抗除草剂基因）悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养，收获种子（称为代）。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）（1）为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾，需要去除，因为后者产生的会抑制侧芽的生长。（2）为筛选出已转化的个体，需将T1代播种在含的培养基上生长，成熟后自交，收获种子（称为T2代）。（3）为筛选出具有抗盐性状的突变体，需将T2代播种在含的培养基上，获得所需个体。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）（4）经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起，需将该突变体与植株进行杂交，再自交代后统计性状分离比。（5）若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失，从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性。（6）根据T-DNA的已知序列，利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。其过程是：提取植株的DNA，用限制酶处理后，再用将获得的DNA片段连接成环（如右图）以此为模板，从图中A、B、C、D四种单链DNA片断中选取作为引物进行扩增，得到的片段将用于获取该基因的全序列信息。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）2011安徽31.（21分）Ⅱ.（9分）家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。（3）采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、_____________和_________________。答案：（3）TaqDNA聚合酶对干扰素基因特异性的DNA引物对解析：考查的知识点为动物细胞培养和基因工程.“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）“汉水丑生的生物同行”超级群整理校对“汉水丑生的生物同行”超级群整理校对(3)PCR反应体系的主要成分应扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶、两种引物。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）2010山东34.【生物—生物技术实践】生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）。用于生产生物柴油的植物油不易发挥，宜选用_____、_____方法从油料作物中提取。（2）筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中的添加的植物油为微生物生长提供____，培养基灭菌采用的最适方法是____法。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）（3）测定培养液中微生物数量，可选用_____法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测______，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产技术，可利用______技术使脂肪酶能够重复使用。（4）若需克隆脂肪酶基因，可利用耐热DNA聚合酶催化的_____技术。【答案】（1）压榨；萃取（注：两空顺序无先后）（2）碳源高压蒸汽灭菌“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）（3）显微镜直接计数酶活性（或酶活力）固定化酶（或固定化细胞）（4）PCR（或多聚链式反应，聚合酶链式反应）【命题立意】本题综合考查多种生物技术【解题思路】（1）因为植物油不挥发，所以不适合采用蒸馏法提取，应用压榨法或萃取法提取。（2）植物油中不含矿物质元素，只为微生物提供碳源。培养基适合用高压蒸汽灭菌发进行灭菌。（3）测定微生物的数量，可以用显微镜直接计数。分离出的脂肪酶要对其活性进行“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。“汉水丑生的生物同行”超级群整理校对“汉水丑生的生物同行”超级群整理校对检测，以确定其实用价值。可以利用酶固定技术重复使用脂肪酶。（4）利用PCR技术可以扩增基因。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）2010广东22.新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。下列技术（或仪器）与应用匹配正确的是(BD)A.PCR技术——扩增蛋白质B.杂交瘤技术——制备单克隆抗体“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）C.光学显微镜——观察叶绿体的基粒D.花粉离体培养——培育单倍体植物2008江苏32．（8分）将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。请根据以上图表回答下列问题。（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据“汉水丑生的生物同行”超级群整理校对“汉水丑生的生物同行”超级群整理校对模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？__________。（3）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）（4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为。（5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。答案：（1）耐高温2）引物对B（3）否（4）农杆菌（5）①2②12007广东40．（《生物技术实践》，15分）为了实现燃料供应来源多样化，发展长期替代化石燃料的产品如燃料酒精、生物柴油、沼气等已经列入我国未来10年的发展计划。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）广东省是我国甘蔗主产区之一。甘蔗是一种高光效的C3植物，单位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗榨汁（蔗糖）酵母发酵蒸馏成品（燃料酒精）。请根据上述材料，回答下列问题：（6）突变菌往往带有一些特殊的基因。在获得这些基因的过程中，PCR技术相当重要。PCR扩增反应中加入引物和DNA聚合酶的作用分别是什么?【答案】（15分）（6）引物的作用是结合在模板DNA上，提供DNA延伸起始位点；DNA聚合酶的作用是从引物的3'端开始催化DNA链的延伸。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记）立意：综合考查考生对生物技术实践模块中的植物组织培养、特殊微生物的筛选及应用、酶的应用以及PCR技术的基本操作和应用等内容的掌握；理论联系实际，针对生物学问题进行初步研究，设计实验路线，对实验结果和现象进行正确的分析与判断，综合运用所学知识解决实际问题的能力。