重组人p53腺病毒治疗恶性肿瘤的临床研究Studyof

重组人p53腺病毒治疗恶性肿瘤的临床研究张沁宏王东彭娜谢家印杨志祥肖世全王阁第三军医大学大坪医院肿瘤中心重庆400042摘要目的探讨重组人p53腺病毒（rAd-p53）治疗恶性肿瘤的疗效。方法对21例晚期无法行手术切除的恶性肿瘤患者，或术后肿瘤转移，无法再度手术的患者，采用瘤内注射、静脉滴注、静脉推注rAd-p53，行至少1个疗程以上的基因治疗，通过临床观察，KPS评分，CT或MRI检查及短期随访评价疗效。结果治疗后与治疗前相比，瘤体明显缩小（t＝2.04，P＜0.05），KPS评分明显提高（t＝2.66，P＜0.05）；其中，38.10%患者病灶明显缩小或病灶数量减少，47.62%患者病情稳定，症状好转。不良反应主要为自限性发热，另有个别胃肠道反应及肌肉酸痛，无明显毒副反应。结论应用rAd-p53治疗恶性肿瘤具有一定疗效，临床应用安全。关键词恶性肿瘤；基因治疗；重组人p53腺病毒StudyofTreantmentofMalignantTumourinPatientsWithrAd-p53ZhangQinhong,Wangdong,Pengna,XieJiayin,YangZhixiang,XiaoShiquan,WanggeCenterofCancer,DapingHospitalandResearchInstituteofSurgery,ThirdMilitaryMedicalUniversityChongqing,ChinaAbstractObjectiveToevaluatetheefficacyandtoxicityoftreatmentofmalignanttumourwithrecombinantadenovirus-p53(rAd-p53).MethodsAtotalof21patientswithadvancedmalignanttumourhadbeeninjectedwithrAd-p53.Fourinjectionswereperformedweeklyforonecourse.AllpatientsPDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建(t＝2.04,P＜0.05),andKaruafskyscoreofpatientsobviouslyincreased(t＝2.66，P＜0.05).38.10%patientsreducedvolumeoftumorordecreasednumberoffocus.47.62%patientsshowedadiseasestabilization,symptomandgeneralstatetoinprove.Therewasnopoisonresponseforpatientsexceptself-limitedfever.ConclusionPatientswithmalignanttumourinjectionwithrAd-p53weresafeandeffective.Keywordsmalignanttumour；genetherapy；recombinantadenovirus-p53恶性肿瘤已经成为威胁人类健康的主要疾病，全球每年病死人数达700万。随着分子生物学、免疫学理论和基因转移技术的发展及对肿瘤发病机制的深入认识，基因治疗的出现为肿瘤的临床治疗开拓了一片崭新的发展领域，成为肿瘤治疗的一种新的治疗或辅助治疗手段。肿瘤基因治疗的实验研究已取得重要进展，其中针对p53基因的治疗已从实验室研究逐步向临床应用过渡，有望成为肿瘤综合治疗的重要组成部分。2004年4月至2005年7月，我科采用重组人p53腺病毒注射液（recombinantadenovirus-p53，rAd-p53）对多类恶性肿瘤病例进行了临床试验研究，探索其疗效，现将研究资料总结如下。1材料和方法1.1临床资料自2004年4月至2005年7月，我科应用重组人p53腺病毒注射液治疗晚期恶性肿瘤病人21例，其中男性16例，女性5例，平均年龄51.2岁（27-72岁）。原发性肝癌4例，鼻咽癌6例，肺非小细胞癌5例，肝转移性结肠癌2例，肝转移性胰腺癌1例，骨转移性肺鳞癌1例，网膜转移性结肠癌1例，腹壁转移性粘液腺癌1例（来源不明）。入选病例均完成1个疗程以上。病例入选标准，所有病人均经病理组织学证实为恶性肿瘤，临床无法手术切除或切除后发现转移，无法二次手术的晚期恶性肿瘤病例，年龄18岁以上，性别不限，生命指征平稳，具有正常或接近正常的血象（白细胞≥3.0×109/L、血红蛋白≥80g/L、血小板≥100×109/L），凝血功能基本正常，肝功能（ALT及AST基本正常或轻度异常）、肾功能（BUN，血肌肝基本正常或轻度异常），Karnafsky评分≥30分，重要脏器功能无明显异常，末次化疗、放疗间歇期≥1个月。病人及家属签署知情同意书。PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建腺病毒（rAd-p53）由深圳市赛百诺基因技术有限公司研制生产，水针剂型，规格：1.0×1012VP/ml/支。药品置于－20℃保存，使用时于室温静置融化。采用静脉推注、静脉滴注、瘤内注射等方法，每次剂量1.0×1012VP，每周1次，4次为1个疗程。所有入选病例于治疗前后行CT或MRI检查，观察肿瘤大小变化、临床症状改善情况、Karnafsky评分变化及所出现的不良反应。疗效按WHO《肿瘤客观评定标准》分为：完全缓解（CR），所见肿瘤病变完全消失并至少维持4周以上；部分缓解（PR），肿瘤病灶的最大径及其最大垂直径（两径）的乘积减少50%以上并维持4周以上，无新的病灶出现；无变化（NC），肿瘤病灶的两径乘积缩小50%以下或增大25%以下，无新的病灶出现；恶化（PD），肿瘤病灶的两径乘积增大25%以上或出现新的病灶。1.3统计学处理采用SPSS11.0进行统计学处理，实验结果以均值±标准差（x±s）表示，治疗前后的肿瘤大小变化及Karnafsky评分变化行t检验分析。2结果2.1治疗后大部分病人病情稳定，一般状况改善，Karnafsky评分较治疗前明显提高（t＝2.66，P＜0.05）；治疗后第4周复查的CT或MRI结果与治疗前对比显示，治疗后瘤体明显缩小，并具有显著差异（t＝2.04，P＜0.05＝。（表1）全部病例中，8例患者病灶明显缩小或病灶数量减少，缓解率占38.10%；10例（47.62%）患者病情长期稳定达6个月以上；3例（14.29%）患者病情进展，其中2例于治疗后2月内死亡。（表2）表1rAd-p53治疗前后KPS评分及肿瘤大小变化例数肿瘤大小KPS评分治疗前2117.21±8.7743.33±11.97治疗后2111.72±8.6657.14±20.53t值2.042.66P值P＜0.05P＜0.05表2rAd-p53治疗恶性肿瘤疗效治疗疗效诊断例数CRPRNCPD缓解率（CR+PR）鼻咽癌6051083.33%肺小细胞癌5014020%PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建合计210810338.10%2.2不良反应rAd-p53在临床治疗恶性肿瘤过程中最主要的不良反应为一过性自限性发热，在全部84例次治疗中，寒战发热占16.67%（14/84），通常为中至高度发热，多于治疗后3-5小时开始，持续4-10小时。另外胃肠道反应出现4例次（4.76%），1肌肉酸痛出现1例次（1.19%）。以上症状患者基本耐受，短期内可自行缓解，或经对症治疗后缓解，因此rAd-p53应用于临床治疗恶性肿瘤是安全的。表3rAd-p53治疗恶性肿瘤临床症状观察副作用寒战发热胃肠反应肌肉关节痛例次14（16.67%）4（4.76%）1（1.19%）2.3治疗前、中、后复查患者的血、尿、便常规、血生化及肿瘤蛋白芯片检测未见明显变化。3讨论野生型基因p53在维持细胞生长，抑制恶性繁殖中起重要作用；一旦细胞基因组DNA遭受损害，p53蛋白将启动DNA的修复程序；如果修复失败，p53又能启动细胞细胞程序性死亡过程，诱导细胞自杀，阻止具有癌变倾向的基因突变的细胞产生而导致细胞癌变[1]。突变的p53蛋白由于空间构象的改变，不仅失去了对肿瘤的抑制作用，而且本身又具有癌变基因的功能[2]。研究表明：p53是与肿瘤发生、发展关系最密切的抑癌基因，50%以上的人类肿瘤存在p53抑癌基因的突变或缺失[3]。实验已证实，将野生型p53基因导入肿瘤细胞，可以控制细胞周期和诱导细胞凋亡[4]、增加肿瘤对化疗和放疗敏感性[5]、诱发肿瘤细胞的旁观者效应[6]。腺病毒因其宿主范围广、理化性质稳定、感染效率高、遗传毒性低等特点，在肿瘤基因治疗中成为最常用的载体之一[7]。rAd-p53在删除第一代5型腺病毒DJM17的E1A和E1B区后，通过基因重组构建成的重组腺病毒（rAd-p53）。其含有由单启动子直接控制的完整p53基因表达盒，上游是Rous肉瘤病毒（RSV）LTR启动子，中间是p53基因表达系列，长度为1182bp，下游是牛生长激素（BGH）的聚腺苷酸化信号。在肿瘤基因治疗临床试验中，rAd-p53对各类实体瘤的基因治疗研究进展最快。自1995年美国批准rAd-p53项目进入临床试验以来，至今世界各国已批准开展的rAd-p53基因治疗方案达52个，而在PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建个Ⅱ／Ⅲ期或Ⅲ期基因治疗临床试验方案中，rAd-p53项目占40％[8]。D’Orazi[9]等研究表明：使用rAd-p53制品，在能够杀死乳腺癌细胞的剂量下，对骨髓干细胞及外周血细胞没有影响。对多种肿瘤的临床研究结果以及采用瘤内、腹腔、静脉、气管、膀胱内不同给药途径、不同剂量和疗程、联合手术和放化疗多种肿瘤的临床试验显示：患者耐受性良好，没有出现严重毒副作用。国外已完成的针对多种肿瘤的各期临床试验结果表明[10-11]，rAd-p53具有广谱抗肿瘤特点，局部和全身多种途径给药，单独应用或联合放、化疗治疗多种肿瘤均安全并且疗效显著。而对患者肿瘤组织p53基因进行的分析表明，rAd-p53的疗效与癌细胞p53基因状态没有明确的联系，这些均显示了rAd-p53良好的临床应用前景。在本研究中，针对多种类型的晚期恶性肿瘤我们应用重组人p53腺病毒进行了1个疗程以上的治疗，结果提示rAd-p53对多种肿瘤均有一定的治疗疗效，印证了其广谱抗肿瘤的特点；大部分病例短期内可见良好疗效，病人生存质量明显提高。在治疗过程中，一过性自限性发热是rAd-p53的主要副作用，另有少数病例在治疗过程中曾出现恶心、腹泻、肌肉酸痛等不良反应，上述症状短期内可自行缓解，或经对症治疗而好转，临床应用基本安全。本研究受限于时间不长、病例较少等因素，主要以影像学方法、KPS评分及短期随访为研究的评估指标，缺乏药代动力学、血药浓度、病毒在血液中的复制状态监测、长期随访等更准确、特异的评估项目，在未来的工作中我们将改进与完善。但初步研究结果已基本印证了rAd-p53具有一定疗效、广谱特点与安全性，为国内晚期恶性肿瘤的基因治疗研究提供了的初步依据。PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建