兽医寄生虫病学实验教学大纲

1《兽医寄生虫病学》实验教学大纲课程名称：兽医寄生虫病学课程编号：0311031课程性质：非独立设课课程属性：专业课学时学分：总学时50总学分2.5实验学时20应开实验学期：三年级，年级：五～六学期适用专业：动物医学、动物检疫、植物检疫、食品安全、旅游管理先修课程：普通动物学、动物解剖学、动物组织胚胎学、动物生理学、兽医病理学、兽医临床诊断学、兽医药理学、兽医免疫学大纲主撰人：张龙现宁长申菅复春大纲审核人：张玉龙张书松一、实验课程简介兽医寄生虫学实验室为动物医学专业开设的实验课程主要是配合课堂讲授内容，课堂讲授以面向21世纪教材课程教材《兽医寄生虫学》为蓝本的基础上，不断增补新的内容和新的研究进展。双语教学内容以《VeterinaryParasitology》（GMUrquhart主编，第二版，1993）和《FoundationofParasitlology》(LSRoberts主编，第七版，2004)辅助教材。双语讲授内容力求与《兽医寄生虫学》讲授主线一致。实验内容以国内经济意义较大的虫种，部分考虑河南省及周边地区流行的虫种。通过实验教学让学生掌握一些常用的兽医临床寄生虫病诊断技术、虫种鉴别要点，同时开设综合性实验“家畜寄生虫学完全剖检法”和设计性实验“鸡球虫人工感染试验”。二、教学目的与基本要求通过对本课程的学习，要求学生能识别主要家畜寄生虫病原，并作出鉴定；掌握进行寄生虫病调查的方法；学生能应用所学知识和技能独立从事寄生虫病的诊断和防治。三、实验内容与学时分配序号项目名称学时要求类型每组人数0311031＋01蠕虫学粪便检查法2必做创新性50311031＋02寄生性原虫形态学观察I2必做基础性50311031＋03寄生性原虫形态学观察II2必做基础性50311031＋04弓形虫的免疫学诊断技术2选修综设性50311031＋05畜禽主要吸虫病病原形态学观察2必做基础性50311031＋06绦虫蚴及其成虫的形态学观察2必做基础性50311031＋07畜禽绦虫病病原形态学观察2必做基础性50311031＋08线虫病病原形态学观察I2必做基础性50311031＋09毛首目、旋尾目、丝虫目和2必做基础性52棘头虫形态学观察0311031＋10蜱螨昆虫的形态学观察2必做基础性50311031＋11盲肠球虫人工感染试验4～6选修创新性50311031＋12寄生虫病学剖检技术及玻片标本制作4～6选修综设性5合计28～32注：本大纲适合于动物医学专业，动植物检疫、检验专业，食品安全专业；其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12适合于动物医学专业；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12适合于动植物检疫检验专业和食品安全专业。四、实验方式与基本要求每次实验时，由指导教师先讲解各种虫卵及寄生虫的形态特征，对于较为复杂的实验，由老师先做示范，再由学生具体操作；学生实验时，不懂之处，可随时询问。要求每个学生都能参与实验操作，对于观察性内容，要求每个学生都要自己观察，自己绘图，写实验报告。达到学生掌握虫体结构特征并知道主要器官名称。五、考核方式及成绩评定实验课成绩占总成绩的20％，由两部分组成，一是每次上实验课作业成绩，二是课程结束后20个浸渍标本或玻片标本的识别，学生现场识别，根据识别结果打分。六、教学参考书目汪明主编.兽医寄生虫学（第三版）.北京：中国农业出版社，2003秦建华李国清主编.动物寄生虫病学实验教程.北京：中国农业大学出版社，2005河南农业大学编写.家畜寄生虫病学实验指导.2002七、实验内容安排实验一、蠕虫学粪便检查法一、实验学时：2学时二、实验目的：掌握用于虫卵检查的粪便材料的采集、保存方法及要领；掌握粪便中虫卵或球虫卵囊检查、计数及幼虫分离法的操作技术；学会在显微镜下识别寄生虫虫卵、球虫卵囊的基本方法。三、实验内容：指导教师讲解粪便采集、保存的方法及要领；各种检查方法的原理、适用范围、操作方法和要点及注意事项；镜下识别虫卵的方法及注意事项；用显微图像分析处理系统演示粪中的虫卵、球虫卵囊、幼虫。然后由学生自己操作、练习。1、每人操作1份饱和盐水漂浮法─静置滤液30分钟─取表膜液制片镜检；2、每人操作1份直接涂片法；3、每2人操作1份离心沉淀法；4、每小组操作1份幼虫分离法─静置1小时─取底部液制片镜检；35、每2人操作1份虫卵计数法。四、实验要求：掌握饱和盐水漂浮法、直接涂片法、离心沉淀法，了解幼虫分离法和虫卵计数法的基本要领五、材料与工具：挂图：待检动物体内的寄生虫卵图，畜禽粪便内常见物体图。实验用品：漏斗架2个/组；漏筛6个/组；小烧杯（50mL）12个/组；500mL烧杯2个/组；100mL烧杯1个/组；青霉素瓶6个/组；离心管6个/组；滴管1个/人；饱和盐水1瓶/组；甘油水1瓶/组；100mL量筒1个/组；小方瓷盘1个/组；擦镜纸1平皿/组；小棉块1份/组；载玻片、盖玻片1份/组；离心机、小天平各1台；镊子2个/组；显微镜1台/人；止水夹1个/组；试管架1个/组；动物粪便1份/班；50mL烧杯两个用于配平。粪中虫卵、卵囊、幼虫示范片。实验二、寄生性原虫形态学观察Ⅰ一、实验学时：2学时二、实验目的：掌握锥虫、巴贝斯虫、泰勒虫和住白细胞虫形态结构特征，认识和了解其致病性和传播媒介。三、实验内容：1．高倍镜或油镜下观察伊氏锥虫血片，注意虫体与红细胞的关系，虫体的形态、大小，动基体的大小及位置、波动膜与鞭毛的发育程度等。2．油镜下观察牛环形泰勒虫及其石榴体、牛双芽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、马驽巴贝斯虫、牛边虫（无浆体）和鸡住白细胞虫血片，注意虫体所寄生的细胞及虫体和宿主细胞的形态、大小、位置、排列方式、数量、虫体染色质团数等，并注意彼此间的区别。3．肉眼观察牛双芽巴贝斯虫病肝和牛环形泰勒虫病四胃、小肠、心、肝、脾、肾、淋巴结、大网膜、食道，以及传病蜱——尾突方头蜱、残缘璃眼蜱。四、实验要求：掌握伊氏锥虫，牛、马巴贝斯虫，环形泰勒虫，边虫的形态特点和鉴别要领五、材料与工具实验用挂图：各种原虫形态图，牛双芽巴贝斯虫与其他巴贝斯虫形态区别表，双芽巴贝斯虫在红细胞内的繁殖方式图。实验用品：香柏油、二甲苯、显微镜、放大镜、擦镜纸等。实验三、寄生性原虫形态学观察Ⅱ一、实验学时：2学时二、实验目的：掌握球虫、弓形虫、住肉孢子虫和纤毛虫的形态结构特征，认识和4了解致病性。三、实验内容：1．肉眼观察鸡盲肠球虫病盲肠、火鸡组织滴虫病盲肠和肝脏、兔球虫病肝、水牛住肉孢子虫病食道和腿部肌肉等；2．高倍镜下观察猪结肠小袋纤毛虫滋养体、住肉孢子虫病肌肉压片和切片（包囊、梅休尔氏囊）；3．油镜下观察弓形虫滋养体、假囊及速殖子，水牛住肉孢子虫滋养体、鸡盲肠球虫病盲肠切片中的裂殖体、配子体及裂殖体和裂殖子涂片。4．涂片观察鸡、兔球虫孢子化和未孢子化卵囊。四、实验要求：掌握球虫、弓形虫、住肉孢子虫和结肠小袋纤毛虫的鉴别要点和结构特征五、材料与工具挂图：鸡、兔球虫卵囊及发育史图，弓形虫形态及发育史图，纤毛虫形态及发育史图。实验用品：香柏油、二甲苯、显微镜、小瓷盘、放大镜、擦镜纸、脱脂棉、载玻片、盖玻片、50％甘油水、小块纱布等。实验四、弓形虫病血清学诊断技术一、实验学时：4～6学时二、实验目的：掌握弓形虫病血清学诊断技术，通过对弓形虫的检测和鉴定，为治疗和预防弓形虫病提供科学依据三、实验内容：弓形虫抗原的制备：取小鼠，以碘酒和70％酒精消毒小鼠腹部皮肤，腹腔接种弓形虫速殖子，4d后乙醚麻醉或颈椎脱臼处死小鼠，以碘酒和70％酒精消毒腹部皮肤，向腹腔内注入无菌生理盐水3～4毫升，轻揉腹壁，再抽取腹腔液，2500r/min离心15min，顷去上清夜，在沉淀中加10倍pH值7.2PBS，振荡混匀，4℃过夜，10000r/min4℃离心1h，取上清液加等量1.7％生理盐水。﹣20℃以下保存备用。绵羊红细胞的鞣化：采集全血2～3mL,快速注入含有0.2～0.3mL5%柠檬酸钠的试管内，轻轻摇匀。2000r/min离心10min，加入0.15mol/pH值7.2PBS适量进行洗涤，2000r/min离心10min，再洗涤。如此反复洗涤3次，用PBS配成2.5％的红细胞悬液。加入含1％鞣酸的PBS使鞣酸的终浓度为1/10000或1/20000，370℃水浴15min，用PBS洗涤3次，再加PBS配成2.5％鞣化红细胞。抗原致敏鞣化的绵羊红细胞：将2.5％鞣化红细胞1份，抗原液1份，pH值6.4的PBS液4份混合，摇匀后室温下放置15min，加入1％正常兔血清后，2000r/min离心洗涤2次，再用PBS配成2.5％的红细胞悬液。4℃过夜。5待检血清的采集与处理：取待检血清0.5mL置于试管中，加入1％正常兔血清1.5mL,56℃灭活30min，加入未致敏的绵羊红细胞2mL，4℃过夜。间接红细胞凝集试验的操作步骤：取处理后的待检血清作倍比稀释，于96孔“V”型反应板中每孔加入上述倍比稀释的待检血清50微升，然后加入致敏的绵羊红细胞悬液50微升，37℃作用2h以上，观察结果。以1∶64的稀释度出现50％凝集者判为阳性，同时设立阳性对照和阴性对照。四、实验要求：掌握检测弓形虫血清抗体滴度的间接血凝技术，了解抗原制备和红细胞制备的过程。五、实验材料和工具：弓形虫虫株，小白鼠，恒温箱，离心机，血清，G3砂蕊漏斗，纤维素滤膜，试管，载玻片，盖玻片，显微镜，微量血凝试验V型反应板，微量加样器，冰箱，等药品：生理盐水，胰酶，PBS，弓形虫诊断试剂（IHA抗原），碘酒，70％酒精，无菌生理盐水，5％柠檬酸钠，等实验五、畜禽主要吸虫病病原形态学观察一、实验学时：2学时二、实验目的：通过用肉眼、放大镜、显微镜观察，掌握吸虫的形态结构特征及重要吸虫病病原体鉴别要点和致病特点；认识和了解中间宿主，为正确诊断吸虫病奠定基础。三、实验内容：1、用肉眼或放大镜观察肝片吸虫、姜片吸虫、阔盘吸虫、矛形双腔吸虫、华枝睾吸虫、前殖吸虫、日本分体吸虫和前后盘吸虫浸渍标本；肝片吸虫、前后盘吸虫、华枝睾吸虫、前殖吸虫患病器官；肝片吸虫、姜片吸虫、华枝睾吸虫、前殖吸虫中间宿主。2、显微镜下观察（1）玻片标本：肝片吸虫、姜片吸虫、阔盘吸虫、华枝睾吸虫、前后盘吸虫；（2）制片观察华枝睾吸虫虫卵、肝片形吸虫虫卵、前后盘吸虫虫卵。四、实验要求掌握肝片吸虫、前后盘吸虫、华枝睾吸虫、前殖吸虫患病器官；肝片吸虫、姜片吸虫、华枝睾吸虫、前殖吸虫的结构特征和鉴别要领五、材料与工具实验用挂图：肝片吸虫、肝片吸虫消化器官、姜片吸虫、阔盘吸虫、矛形双腔吸虫、华枝睾吸虫、日本分体吸虫、鹿前后盘吸虫；实验用品：50％甘油水6瓶，瓷盘6个，平皿6套，载玻片、盖玻片、擦镜纸、脱脂棉各适量，放大镜、显微镜及示范用显微镜。6实验六、绦虫蚴及其成虫的形态学观察一、实验学时：2学时二、实验目的：通过用肉眼、放大镜、显微镜观察，掌握各种绦虫蚴及其成虫的形态结构特征和鉴别要点；认识和了解其致病特点，为正确诊断绦虫病奠定基础。三、实验内容：（一）肉眼观察：1．猪囊尾蚴及有钩绦虫浸渍标本、患病器官；2．细颈囊尾蚴及泡状带绦虫、患病器官；3．豆状囊尾蚴及患病器官；4．链尾蚴及带状泡尾绦虫；5．多头蚴及多头绦虫、患病器官；6．棘球蚴及其寄生的肺脏和细粒棘球绦虫；7．裂头蚴及裂头绦虫；（二）显微镜下观察玻片标本：猪囊尾蚴，有钩绦虫成节、孕节，棘球蚴砂，泡状带绦虫孕节；制片观察带科绦虫卵。四、实验要求掌握猪囊尾蚴、细颈囊尾蚴、棘球蚴、脑多头蚴、链尾蚴、豆状囊尾蚴、裂头蚴等及其成虫的形态和结构特征及其鉴别要领。五、材料与工具挂图：各种绦虫蚴图，有钩绦虫与无钩绦虫头节、成节、孕节图，猪囊尾蚴图，细颈囊尾蚴图，裂头绦虫图。实验用品：50％甘油水6瓶，瓷盘6个，平皿6套，载玻片、盖玻片、擦镜纸、脱脂棉各适量，放大镜、显微镜及示范用显微镜。实验七、畜禽绦虫病病原形态学观察一、实验学时：2学时二、实验目的：通过用肉眼、放大镜、显微镜观察，掌握畜禽常见绦虫的形态结构特征和鉴别要点；认识和了解其中间宿主。三、实验内容：1．莫尼茨绦虫浸渍标本、虫卵；扩展莫尼茨绦虫