第七篇芳香胺类药物分析

本章药物的基本结构是芳环、氨基、烃胺基。概述RNH2胺NH2芳胺芳伯氨基本章主要涉及三类药物（2）酰胺类：代表药物有对乙酰氨基酚（扑热息痛）、贝诺酯、盐酸利多卡因等。（1）对氨基苯甲酸酯类：代表药物有盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸丁卡因等。（3）苯乙胺类：代表药物有肾上腺素、盐酸去氧肾上腺素、盐酸多巴胺等。一、对氨基苯甲酸酯类药物1、基本结构：均具有对氨基苯甲酸酯的母核。COOR2NR1H第一节芳胺类药物的分析H2NCOOCH2CH2N(C2H5)2HCl盐酸普鲁卡因COOC2H5H2N苯佐卡因COOCH2CH2N(C2H5)2CH3(CH2)3NHHCl盐酸丁卡因CONHCH2CH2N(C2H5)2H2NHCl盐酸普鲁卡因胺（1）芳伯氨基特性：具有芳伯氨基，显重氮化-偶合反应；可与芳醛发生缩合反应；易氧化变色等。盐酸丁卡因无此特性。（2）水解特性：具有酯键（或酰胺键），易水解，尤其受碱或光、热的影响能促使水解。2、主要化学性质（3）弱碱性：除苯佐卡因外，因其脂烃胺侧链有叔胺氮原子，故游离碱多为碱性，能与生物碱沉淀剂发生反应。（4）其它特性：游离碱多为碱性油状液体或低熔点固体，难溶于水，可溶于有机溶剂，其盐可溶于水，难溶于有机溶剂。二、酰胺类药物1、基本结构：为苯胺的酰基衍生物，均具有芳酰氨基。NHCR2OR1R3R4HONHCOCH3NHCOCH3C2H5O非那西丁（对乙酰氨基苯乙醚）对乙酰氨基酚（扑热息痛）SOONHCOCH3CH3CONH醋氨苯砜OCOCH3COONHCOCH3贝诺酯（扑炎痛）NHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3HCl盐酸利多卡因NHCONC4H9CH3CH3HCl盐酸布比卡因（1）水解后显芳伯氨基特性：本类药物均具有芳酰氨基结构，在酸性溶液中可水解为具芳伯氨基的化合物，并显芳伯氨基特性反应。水解反应的速度与分子结构有关：对乙酰氨基酚（对位取代）＞贝诺酯（对位取代）＞利多卡因、布多卡因（邻位2个取代基）2、主要化学性质（2）水解产物易酯化：如对乙酰氨基酚，其水解产物为醋酸，可与乙醇生成醋酸乙酯。（3）酚羟基的特性：具有酚羟基或水解后能产生酚羟基，与三氯化铁作用呈色，如对乙酰氨基酚，可与利多卡因和醋氨苯砜区别。（4）弱碱性：如利多卡因和布比卡因具有脂烃胺侧链，显碱性，能与生物碱沉淀剂反应，可与对乙酰氨基酚和醋氨苯砜区别。(5)与重金属离子发生沉淀反应，盐酸利多卡因可与铜离子或钴离子络合，生成有色的配位化合物沉淀。三、鉴别试验（一）重氮化—偶合反应ArNH2HClNaNO2重氮盐橙黄～猩红色萘酚OH-1、直接：盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺盐酸普鲁卡因ChP（2000）[鉴别]（1）本品显芳香第一胺类的鉴别反应取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。2、间接：（酰胺类）对乙酰氨基酚、非那西丁、醋氨苯砜、贝诺酯对乙酰氨基酚ChP（2000）[鉴别]（2）取本品约0.1g，加稀盐酸5m1，置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5m1，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性β-萘酚试液2m1，振摇，即显红色。对氨基酚对乙酰氨基酚、HClCOOCH2CH2N(C2H5)2CH3(CH2)3NHHCl3、盐酸丁卡因：无重氮化反应，分子中有芳香第二胺结构可与亚硝酸钠作用，生成N-亚硝基化合物。（乳白色）盐酸丁卡因H2NaNO（二）三氯化铁反应对乙酰氨基酚的结构中具有酚羟基，与三氯化铁试液作用，即显蓝紫色。紫堇色铁配位化合物FeClOHAr3（三）与重金属离子反应1、与铜和钴离子反应（1）盐酸利多卡因在碳酸钠试液中，与硫酸铜反应生成蓝紫色配位化合物，溶于氯仿显黄色，水层显紫色。黄色蓝紫色硫酸铜盐酸利多卡因氯仿碳酸钠（2）盐酸利多卡因在酸性溶液中，与氯化钴反应生成亮绿色细小沉淀。亮绿色钴盐沉淀氯化钴盐酸利多卡因H+2、羟肟酸铁盐反应盐酸普鲁卡因胺具芳酰胺结构，其水溶液加三氯化铁试液与30％过氧化氢溶液，加热先被氧化成羟肟酸，再与三氯化铁反应生成羟肟酸铁而显紫红色，随即变为暗棕色至棕黑色。3、与汞离子反应：盐酸利多卡因与对氨基苯甲酸酯类药物相区别。黄色硝酸汞盐酸利多卡因H+Δ对氨基苯甲酸酯类红或橙黄色1、盐酸普鲁卡因的鉴别试验）对氨基苯甲酸（白色对氨基苯甲酸钠纸变兰色）（使湿润的红色石蕊试二乙氨基乙醇对氨基苯甲酸钠油状物普鲁卡因盐酸普鲁卡因HClNaOH（四）水解产物的反应盐酸普鲁卡因ChP（2000）[鉴别]（2）取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10％氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，产生的蒸气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。苯佐卡因ChP（2000）[鉴别]（2）取本品约0.1g，加氢氧化钠试液5m1，煮沸，即有乙醇生成；加碘试液，加热，即生成黄色沉淀，并发生碘仿的臭气。2、苯佐卡因的鉴别试验）（碘仿臭气，黄色乙醇乙醇苯佐卡因32CHINaOHINaOH（五）制备衍生物测熔点1、测三硝基苯酚衍生物的熔点盐酸布比卡因与三硝基苯酚反应生成的衍生物，熔点约为194℃。2、测硫氰酸盐衍生物的熔点盐酸丁卡因溶于醋酸钠溶液后，加硫氰酸铵溶液，即析出结晶性白色沉淀。盐酸布比卡因ChP（2000）[鉴别]（2）取本品，精密称定，按干燥品计算，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含0.40mg的溶液，照分光光度法（附录ⅣA）测定，在263nm与271nm的波长处有最大吸收；其吸收度分别为0.53～0.58与0.43～0.48。（六）UV（七）IR盐酸布比卡因ChP（2000）[鉴别]（3）本品的红外光吸收图谱与对照的图谱（光谱集324图）一致。四、特殊杂质检查（一）对乙酰氨基酚的杂质检查本品是以对硝基氯苯或酚为原料，得对氨基酚后，再乙酰化得对乙酰氨基酚。Chp规定除一般杂质（酸度、氯化物、硫酸盐等）外，还需检查：1、乙醇溶液的澄清度与颜色本品外观应为白色结晶或结晶性粉末，易溶于乙醇。杂质来源中间体、副产物及分解产物对氯乙酰苯胺杂质对照品法检查方法TLC其他杂质参比杂质对照品法2、有关物质对氯乙酰苯胺的TLC法检查，采用硅胶GF254/氯仿-丙酮-甲苯（13：5：2）系统分离进行限度检查。3、对氨基酚杂质来源中间体、水解产物反应原理检查方法对照法蓝色亚硝基铁氰化钠对氨基酚OH取本品1.0g，加甲醇溶液（1→2）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1m1，摇匀，放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50g用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.005％）。计算如下：（P29）%005.0%1000.11050%1006=´×´=´=供试品量允许杂质存在的最大量L×´×´（二）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查检查方法TLC杂质对照品法杂质来源─水解产生，影响因素如灭菌温度、时间、溶液pH值、贮藏时间及光线、金属离子均可加速水解。计算如下：（课本P29）%2.1%1005.21030%1003=´´´×´=´=供试品量允许杂质存在的最大量L´´×´×´五、含量测定（一）亚硝酸钠滴定法1、原理：具芳伯氨基的药物。具游离芳伯氨基的药物可用本法直接测定。Cl-+22+2+++ArNH2NaNO2HClArNNNaClH2O具潜在芳伯氨基的药物，如具酰胺基药物（对乙酰氨基酚等）经水解，芳香族硝基化合物（如无味氯霉素）经还原，也可用本法测定。NHCOR+H2ONH2+RCOOHH+△NO2+6[H]NH2+2H2O2、测定方法盐酸普鲁卡因ChP（2000）取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法（附录ⅦA），在15～25℃，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.28mg的C13H20N2O2·HCl。NH2COOCH2CH2N(C2H5)2NCOOCH2CH2N(C2H5)2NCl+NaNO2+2HCl+NaCl+2H2O（1）加入适量KBr加快反应速度KBr为催化剂NaNO2+HCl→HNO2+NaClHNO2+HCl→NOCl+H2O在盐酸存在下，重氮化反应的机理为：3、主要测定条件NN+Cl-快NNOH快NNOH慢NO+Cl-NH2（1）K1（2）K2∵K1≈300K2加入KBr，可增大被测溶液中NO+的浓度，所以能加快重氮化反应速度。OHNOBrHBrHNO22OHNOClHClHNO22（2）溶液的酸度在不同酸中重氮化反应的速度为：HBr＞HCl＞H2SO4＞HNO3芳胺：盐酸（用量）1:2.5～6加入盐酸的作用：Ⅰ重氮化反应速度加快；Ⅱ重氮盐在酸性溶液中稳定；Ⅲ防止生成偶氮氨基化合物，影响测定结果NN+Cl-+H2NNNNH+HCl（4）滴定速度：先快后慢滴定管尖端插入液面下2/3处，在搅拌下快速加入滴定液，近终点时方改为慢速滴定。（3）室温条件下滴定：10～30℃4、指示终点的方法（1）永停滴定法─ChP（2000）、BP（1998）原理：用两个相同的铂电极，在两个电极间加一低电压（约50mv），并串联一个微电流计，电极浸在被滴定液中，终点前，线路上无电流或仅有很小的电流流过微电流计，指针为零；到达终点，线路中有电流通过，电流计指针突然偏转。（2）外指示剂法KI—淀粉糊剂或试纸终点变蓝2NaNO2+2KI+4HCl→2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O（二）非水溶液滴定法盐酸利多卡因结构中酰氨基邻位有二个甲基，受空间位阻影响，水解较慢，不适宜用重氮化法测定；但其结构中有脂肪胺基[-N（C2H5）2]，具有弱碱性，可采用非水溶液滴定法。(三）分光光度法对乙酰氨基酚在稀碱性（0.4％氢氧化钠）溶液中，在257±1nm波长处有最大吸收，可用于定量。按下式计算：1、原料药标示量％=AE1％1cm×1100×稀释倍数（D）W样×标示量（g/片）×100％×W片2、制剂％=AE1％1cm×1100×稀释倍数（D）W样×100％（四）比色法采用重氮化－偶合反应进行测定（略）（五）盐酸普鲁卡因胺的快速荧光测定（略）（六）高效液相色谱法用高效液相色谱法，以苯甲酸为内标，可以同时测定盐酸普鲁卡因注射中的普鲁卡因及其降解产物对氨基苯甲酸（PABA），不需分离提取，方法准确简便。（七）体内药物分析应用示例对乙酰氨基酚急性中毒的血药浓度检测分析（略）一、结构和性质（一）基本结构：苯乙胺或儿茶酚胺类R1CHCHNHR2OHR3*第二节苯乙胺类药物的分析HOHOCOHHCH2NHCH3肾上腺素HOHOCOHHCH2NH2重酒石酸去甲肾上腺素CCCOOHCOOHOHHHHOHOCHOHCH2NHCH(CH3)2HClHO盐酸异丙肾上腺素ClH2NClCHOHCH2NHC(CH3)3HCl盐酸克仑特罗（1）弱碱性：具有脂烃胺侧链，其氮为仲胺氮。（2）酚羟基特性：具有邻苯二酚或苯酚结构，酚易氧化，多元酚更易氧化显色。（3）光学活性：本类药物大多具手性碳原子，具有旋光性。（4）芳伯氨基特性：如盐酸克仑特罗的芳伯氨基。（二）化学性质本章三类药物结构与分析方法关系比较：酰胺类对氨基苯甲酸酯类苯乙胺类芳伯氨基特性（+）间接反应，需水解（+）直接反应，除盐酸丁卡因外（+）直接反应，盐酸克仑特罗酚羟基特性（+）对乙酰氨基酚（－），无酚羟基（+）具有邻苯二酚或苯酚结构，盐酸克仑特罗弱碱性（+）脂烃胺侧链，利多卡因和布比卡因（+）脂烃胺侧链，除苯佐卡因外（+）脂烃胺侧链水解特性（+）芳酰氨基（+）有酯键或酰胺键（－）光学活性（－）（－）（+）大多有手性碳原子（一）三氯化铁反应苯乙胺类药物的结构中具有酚羟基，与三氯化铁试液作用，即显蓝紫色。紫堇色铁配位化合物FeClOHAr3