干扰和回收实验

张传宝卫生部临床检验中心[e-mail]干扰实验回收实验试验：为了察看某事的结果或某物的性能而从事某种活动。如：试验新机器。实验：为了检验某种科学理论或假设而进行某种操作或从事某种活动。如：做科学实验。《现代汉语词典》ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute(CLSI).InterferenceTestinginClinicalChemistry;ApprovedGuideline—SecondEdition.CLSIdocumentEP7-A2;《临床检验方法确认与性能验证》P240；中华人民共和国卫生行业标准《干扰实验准则》；干扰实验的目的是评估被分析样本中由其他物质引起的系统误差，这些误差是恒定系统误差特定浓度的干扰物质一般引起恒定数量的误差，而与被分析物的浓度无关。误差大小主要受样本中干扰物质浓度影响。干扰：在临床化学中，被测物浓度因样品特性或其它成分的影响而出现的临床显著性偏差。这种影响可见于检测系统的非特异性、指示反应响应不佳、被测物活性抑制等情况。干扰物：不是被测量，但对测量结果有影响的量。干扰标准：被测物浓度与真值间可产生的最大允许干扰偏差，此偏差可能影响医生的医疗决定。总分析误差：测定值与参考值间的差异。关于“确认”(Validation)方法学研究或方法产品性能研究由方法建立者或产品生产者完成给出主要方法性能：―准确度(accuracy)―精密度(precision)―特异性(specificity)―检测限和定量限(LODandLOQ,灵敏度)―线性(linearity)―耐变性(robustness)......---陈文祥关于验证(Verification)对主要方法性能的证实在引入新方法时进行对配套系统，一般验证下列指标：―准确度(accuracy)―精密度(precision)―可报范围(reportablerange)―参考区间(referenceinterval)对非配套系统，验证更为广泛，除上述指标外：―分析特异性―分析灵敏度―任何其他必要指标[TheU.S.CLIA]---陈文祥回收实验干扰实验方法学对比1病理条件下产生的代谢物如：糖尿病、多发性骨髓瘤，等2由治疗过程引入的化合物如：药物、非肠道营养物、血浆扩充剂，抗凝剂，等。3病人本身原因引入的物质如：饮酒、滥用药物、补品、不同饮食习惯，等4标本处理过程中的添加物如：抗凝剂、添加剂、稳定剂，等。5操作过程对样本的污染如：护手霜、手套粉、血清分离器、采血管盖，等6样本本身的基质效应如：化学和物理性质不同于理想的新鲜样本。临床实验室测量过程中，干扰物质可以是测量误差的重要来源；实验室测量的精密度可以通过室内质控进行监测，准确度则可以通过回收实验、或与参考物质或方法进行比较进行验证，在实验室中对干扰物质引起的误差的判定却非易事。任可一个测量程序都可能存在干扰物质。不准确度（inaccuracy）又称分析总误差（totalanalyticalerror）主要受三个因素影响：不精密度、方法学系统误差和样本误差。实验室可以通过对测量程序的评估，对不精密度和方法学系统误差进行分析，但通常把样本误差（干扰）看成是个别样本的问题，而不是测量程序的问题。干扰物对检测结果的影响可通过一些方法进行补偿或修正，使干扰效果在特定病人群体中减小。对于常见的内源性干扰物（如胆红素、血红蛋白、脂类等），可通过样品前处理、样品空白、血清基质校准或数学修正等方法减少干扰效果。从评价的角度看，干扰既可造成系统误差，也可造成随机误差。对于一个特定的病人群体，样本中干扰物的平均浓度可以造成系统偏差，而对个体病人，干扰物带来的误差取决于它在标本中的浓度。通过与检测试剂竞争或抑制指示反应；干扰物具有与被测物相似的性质，（如荧光、颜色、光散射、电极反应等；）干扰物可以改变样本基质的物理性状，（如粘度、表面张力、浊度、离子强度，等）干扰物可通过屏蔽金属离子（激活剂）、结合活性位点、氧化巯基等改变酶（被测物或试剂）的活性，也可在竞争酶反应过程中的关键底物。干扰物发生与被测物相似的反应。在免疫化学反应过程中，干扰物结构与抗原类似，而与相应抗体发生交叉反应。异常标本：如溶血、黄疸、脂血，等处方及非处方药；异常生化代谢：糖尿病、多发性骨髓瘤、肾病样本添加剂，如抗凝剂（肝素、EDTA、柠檬酸盐、草酸盐，等），防腐剂（氟化钠、碘乙酸、盐酸，等）instrumentshavebeencalibratedandmaintainedaccordingtothemanufacturer’sinstructions;theanalyticalsystemisincontrolandperformingasexpected;alloperatorshavebeentrainedanddemonstrateacceptableproficiency;andlaboratorysafetyproceduresarebeingfollowed。建立被评价方法的干扰标准确定被测量的实验浓度列出可能干扰物清单确定干扰物的实验浓度仪器、试剂、人员的准备干扰物筛查实验干扰物剂量效应评价实验患者样本(serum,plasma,wholeblood,cerebrospinalfluid,urine,andmostotherbody)混合患者样本；标准溶液或者其它制备物；需确认测试样本同临床样本具有相似的反应性。计算样本量：测量程序所需样本量、实验所需样本数量、重复测定次数。调整分析物浓度。ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute(CLSI).InterferenceTestinginClinicalChemistry;ApprovedGuideline—SecondEdition.CLSIdocumentEP7-A2;获取纯的干扰物质；物质能够实现准确定量，如称重、使用标准物质或标准液；选择能获得足够溶解度的溶剂；且溶剂本身不能是干扰物质。为避免稀释样本基质，储备液的浓度至少应该是干扰浓度的20倍，即加入体积不能超过总样本的5%（10%）。根据被评价方法的检测原理和预期用途列出可能引起干扰效果的物质清单。常见的可能产生干扰作用的物质：样本中的异常物质：溶血、黄疸、脂血。药物：常见处方与非处方药，接受某项目检测的特定病人群体中常用的药物。代谢物：在特定病人群体中可能出现的异常生化代谢物与药物代谢物。样品添加剂及在样品采集与处理过程中可与之接触的物质：抗凝剂（肝素、EDTA、柠檬酸盐、草酸盐等）与防腐剂（NaF、HCl、碘醋酸盐等），血清分离胶，样品采集容器及胶塞、导管、导管冲冼液、皮肤消毒剂、手部清洁剂、玻璃清洗液、手套粉未等。文献中提及的对与被评价方法类似的其他方法有干扰作用的物质。饮食：咖啡因、β-胡萝卜素、罂粟籽等。可能干扰物样品类型干扰物实验浓度药物与代谢物血清、血浆与全血至少三倍于治疗药物浓度或最高预期浓度尿液至少三倍于24小时尿清除率内源性干扰物血清、血浆与全血目标病人群体中预期最高浓度抗凝剂与防腐剂血清、血浆与全血五倍于添加浓度尿液五倍于24小时尿清除率样品采集与处理设备血清、血浆、全血、尿液样品与设备接触24小时，样品体积应与实际使用相同，需注意防止样品蒸发与不稳定分析物的丢失，同时应准备一份与实验样本相同的对比样本，此样本除了不与实验设备接触外其余处理过程均与实验样本相同。干扰物的实验浓度确定原则胆红素：标准溶液；溶血：血红蛋白溶液；脂血：VitC：样本管添加剂干扰：实验样本：基础样本+干扰物储备液（体积不超过5%）；一般加入的浓度接近病人样本中可能出现的最大浓度水平；对照样本：基础样本+与实验样本加入量相等的溶剂；以保证样本基质的一致性。所有样本应该进行双份测定。临床可接受标准基于生物学变异的标准；基于分析变异的标准；基于临床实验的标准；统计学标准基于生物学变异的质量规范CLIA’88中的质量规范分析项目允许CV%允许的偏倚（%）允许总误差（Tea，%）允许变异允许的偏倚允许总误差期望最低ALT12.2232.148.16.67%10.0%20%AST65.415.222.86.67%10.0%20%AMY4.87.815.723.510.0%15.0%30%LDH4.34.39.514.26.67%10.0%20%CK11.411.530.345.510.0%15.0%30%GGT6.910.822.233.3ALP3.26.411.717.510.0%15.0%30%TP1.41.23.45.23.33%5.0%10%ALB1.61.33.95.83.33%5.0%10%T-BIL12.81031.146.6D-BIL18.414.244.566.8UA4.34.811.917.95.67%8.5%17%UREA6.25.515.723.50.33mg/dl或4.5%1mg/dl或4.5%2mg/dl或9%CREA2.23.46.910.40.1mg/dl或5%0.15mg/dl或7.5%0.3mg/dl或15%GLU3.32.37.911.82mg/dl或3.3%3mg/dl或5%6mg/dl或10%T-C34.1913.63.33%5.0%10%TG10.510.728428.33%12.5%25%LDL-C4.26.813.620.4HDL-C3.65.211.116.610.0%15.0%30%ApoA13.33.79.113.6ApoB3.5611.617.5K2.41.85.88.70.17mol/L0.2mmol/L0.5mmol/LNa0.40.30.91.30.13mmol/L2mmol/L4mmol/LCl0.60.51.52.21.67%2.5%5%Ca10.82.43.60.33mg/dl0.5mmol/L1.0mg/dlMg1.81.84.87.28.33%12.5%25%P4.33.210.215.3评价潜在干扰物加入样本引起的干扰作用同时用（较高特异性）的(常规)比对方法同时进行实验。−结果差异：−结果无差异：准备基础样本；准备实验样本和对照样本；测量两种样本中分析物浓度；计算偏差。备6个不同的患者样本(1～6号)。每个患者样本制成两个测试样本(对照，添加)。每个测试样本分析4次。对照样本使用0.1mL生理盐水稀释+0.9ml患者样本制成。干扰样本用0.9ml患者样本+0.1ml100mg/dL胆红素标准混合而成。序号对照样本0.9ml样本+0.1ml生理盐水干扰样本0.9ml样本+0.1ml胆红素标准结果1结果2结果3结果4结果1结果2结果3结果4120621322321522122223022922202282232102332412282373299287297297306304302296416917116717818618418118352502482572522422652712626227221224230236229237242序号对照样本均值干扰样本均值干扰1214.25225.511.252220.25234.7514.5329530274171.25183.512.255251.752608.256225.523610.5均值229.7240.310.625(4.62%)用于评估实验方法正确测定在常规样本中加入的被测物量的（质量、浓度、活性）能力；比对方法的替代实验，用以揭示误差的性质；通过测定比例系统误差，对实验方法的准确度进行评价。回收实验可用于验证仪器所有标准溶液的浓度。准备配对实验样本；计算分析物加入量；测定两种样本中分析物浓度；计算百分比回收率。样本和加入量使用常规样本基质，如血清或血浆；避免稀释造成基础样本基质的改变，基础样本