薄层层析TLC通用显色剂

薄层层析通用显色剂1通用试剂(1)重络酸钾-硫酸:检查一般有机物.喷洒剂:5克重络酸钾溶于100毫升40%硫酸中.薄层检查:喷洒后加热到150℃至班点出现(2)荧光素-溴:检查不饱和化合物喷洒剂:0.1克荧光素溶于100毫升乙醇中溴试剂:5%的溴的四氯化碳溶液喷洒后处理:喷洒荧光素溶液后,放置存有溴溶液的缸内,可于紫外线分析灯下检查荧光,荧光素与溴化和成曙红(Eosin)(无萤光),而不饱和化合物则成溴加成物,保留了原有荧光;若点样较多,则呈黄色斑点,底板呈红色.(3)碘:检查一般有机物.方法:a层析谱放密闭缸内或瓷盘内，缸内预先放有碘结晶少许，大部分有机化合物呈棕色斑点。b层析谱放碘蒸气中5分钟（或喷5％碘的氯仿溶液）取出置空气中待过量的碘蒸气全部挥发后，喷1％淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。(4)硫酸：通用喷洒剂：5％的浓硫酸乙醇溶液，或15％浓硫酸正丁醇溶液，或浓硫酸－醋酸（1：1）喷洒后处理：空气中干燥15分钟，再热至110℃直至出现颜色或荧光。(5)硝酸银－氢氧化铵（Tollen-Zaffaroni）试剂：检查还原性物质。溶液I:0.1%N硝酸银;溶液II:5N氢氧化铵喷洒剂:I和II以1:5混合(临用前混合)喷洒后处理:105℃加热5~10分钟,至深黑色斑点出现.(6)磷钼酸或磷钨酸,硅钨酸:检查还原性物质,类脂体,生物碱,甾体喷洒剂:5~10%磷钼酸或磷钨酸或硅钨酸乙醇溶液喷洒后处理:120℃加热至斑点出现.沉淀试剂:1克硅钨酸溶于20毫升水中,加10%盐酸至强碱性.2生物碱(7)硫酸:检查生物碱及含碘化合物喷洒剂:0.1克硫酸?混悬于4毫升水中,加入1克三氯醋酸,加热至沸,逐滴加入浓硫酸至澄清.喷洒后处理:110℃加热数分钟至斑点出现.(8)碘化铋钾(Dragendorff)试剂:检查生物碱及其他含氟化合物.溶液I:0.85克次硝酸铋溶于10毫升冰醋酸40毫升水中溶剂II:8克碘化钾溶于20毫升水中.制备液I+II,等体积混合.可用于棕色瓶中保存较长时间,一般制备液可作沉淀试剂用.喷洒液:制备液1毫升与2毫升醋酸,10毫升水混合即得(9).碘化汞钾(Mayer)试剂:检查生物碱.制备液:13.55克氯化汞和49.8克碘化钾各溶于20毫升水中,等体积混合并用水稀释至1000毫升.喷洒液:制备液加1/10体积的17%盐酸.喷洒后处理:观察斑点,并于紫外线荧光分析灯下检出.(10)?酸纳-浓硫酸(Mandelin)试剂:检查生物碱.1%酸纳的浓硫酸溶液.与多种生物碱呈不同颜色.(11)碘－碘化钾(Wagner)试剂:检查生物碱.1克碘及10克碘化钾,溶于50毫升水中,加热,加2毫升醋酸,再用水稀释至100毫升.可作纸层板显色剂,液可作沉淀试剂.3酚类,鞣质(12)三氯化铁:检查酚类及??酸.喷洒剂:1~5%三氯化铁的水溶液或乙醇溶液.并加盐酸少许.??酸呈红色斑点,酚类称蓝色或绿色斑点.(13)铁氰化钾-三氯化钾:检查酚类,芳香胺类及还原性物质.喷洒剂:1%铁氰化钾水溶液,2%三氯化铁水溶液.临用前等体积混合.喷洒后处理:喷洒后酚性物质呈蓝色斑点.再喷2N盐酸,能使颜色加深,纸谱可用稀盐酸洗去喷洒液.(14)4-胺基安替比林-铁氰化钾(Emerson反应):检查酚类.喷洒剂:I.2%4-氨基安替比林乙醇溶液;II.8%铁氰化钾水溶液.或用0.9%4-氨基安替比林和5.4%铁氰化钾水溶液方法:先喷洒I,再喷洒II,即显色,或再放入密闭缸中,缸内放25%氢氧化铵,即产生橙色至深红色.(15)对氨基苯磺酸,重氮盐(Pauly试剂):检查酚类,芳香胺类及能偶合的杂环化合物.喷洒剂:4.5克对氨基苯磺酸,加热溶于45毫升12N盐酸中,用水稀释至500毫升,取10毫升稀释液用冰冷却,加10毫升冷4.5%亚硝酸钠水溶液,0℃放15分钟(此试剂于0℃可保存3天),用前加等体积1%碳酸钠水溶液.一般重氮化试剂,也可用联苯胺,对硝基苯胺等.(16)对甲苯磺酸:检查甾体,黄酮,鞣质.喷洒剂:20%对甲苯磺酸氯仿溶液.喷洒后处理:100℃加热数分钟,紫外线分析灯下检查荧光斑点.4含氧杂环及蒽醌类*(17)三氯化铝:检查黄酮体.喷洒1%三氯化铝乙醇液于紫外线荧光分析灯下检示,呈黄色荧光(18)碱式醋酸铅:检查黄酮体.喷洒剂:饱和碱式醋酸铅(或饱和醋酸铅)水溶液.于紫外线荧光分析灯下检查荧光斑点.(19)醋酸镁:检查蒽醌甙,甙元及黄酮体喷洒剂:0.5%醋酸镁甲醇溶液方法:90℃加热5分钟,呈红色至紫色斑点.(20)氢氧化钾:检查香豆素,蒽醌甙及甙元喷洒剂:5~10%氢氧化钾的甲醇溶液.于日光及紫外线荧光分析灯下检示斑点.5萜类,甾体(21)三氯化锑(Carr-Price试剂):检查甾体,萜类,皂类.喷洒剂:25克三氯化锑溶于75克氯仿中(亦可以用氯仿或四氯化碳的饱和溶液).喷洒后处理:100℃加热5分钟,于紫外线荧光分析灯下检示荧光.(22)五氯化锑:检查甾体,萜类,皂甙.喷洒剂:五氯化锑-氯仿或四氯化碳(1:4),用前新鲜配制.喷洒后处理:120℃加热至斑点出现,并于紫外线荧光分析灯下检示.(23)香兰醛-硫酸:检查高级醇类,酚类,甾体,萜类,芳香油.喷洒剂:1克香兰素溶于100毫升浓硫酸,或0.5克香兰醛溶于100毫升硫酸-乙醇(4:1)中.喷洒后处理:室温或120℃加热观察显色斑点.(24)4-二甲氨基苯甲醛,醋酸,磷酸(E.P.试剂):检查?Azulene及?前体Proazulene.喷洒剂:0.25克4-二甲氨基苯甲醛,溶于50毫升醋酸5克85％磷酸和20毫升水的混合液中(棕色瓶中保存数月)?:烃室温即成蓝紫色斑点,前体于80℃加热10分钟出现蓝紫色斑点.(25)氯胺T－三氯醋酸:检查强心甙.喷洒剂:I.3%氯仿T水溶液新鲜制备.II.25%三氯醋酸乙醇溶液(能保存数天).10毫升I加40毫升II,用前混合.喷洒后处理:110℃加热7分钟,紫外线荧光分析灯下检示呈蓝色或黄色荧光.(26)亚硝酸基铁氰化钠-氢氧化钠(Legal试剂):检查不饱和内酯;甲基酮或活性次甲基,常用于强心甙喷洒剂:1克亚硝基铁氰化钠溶于100毫升2N氢氧化钠-乙醇(1:1)的水溶液.显红色或紫色斑点.(27)3,5-二硝基苯甲酸(Legal试剂):检查强心甙,α,β-不饱和内酯.喷洒剂:1克3,5-二硝基苯甲酸溶于50毫升甲醇,加入1N氢氧化钾50毫升.强心甙呈紫红色斑点.6糖类(28)邻苯二甲基苯胺:检查还原糖.喷洒剂:0.93克苯氨,1.66克邻苯二甲酸溶于100毫升水饱和的正丁醇中.喷洒后处理:105℃加热10分钟.(29)2,3,5-Triphenyl-tetrazoliumchloride(T.T.C.)：检查还原糖及其他还原物质。溶液I：4％（T.T.C.）甲醇溶液；溶液II：1N氢氧化钠。喷洒液：I，II，临用前等体积混合。喷洒后处理：100℃加热5～10分钟，得红色斑点。(30)Keller-Kiliani试剂：检查α－去氧糖，常用于强心甙。试液：100毫升冰醋酸加三氯化铁试液0.5毫升混合均匀.试样1毫克加试液2毫克溶解后,沿试官管壁滴入浓硫酸2毫升,接触面即显棕色,渐变浅绿,蓝色.最后冰醋酸层全部呈蓝色.(31)1,3-二羟基萘-磷酸:检查糖类.喷洒液:0.2%1,3-二羟基萘(Naphthoresorcinol)乙醇溶液100毫升,与10毫升85%磷酸混合.(32)费林溶液(Fehling):检查还原糖.溶液I:69.3克结晶硫酸铜溶于1000毫升水中.上述二溶液如不清可滤过.临用前等体积混合.7氨基酸(33)茚三酮:检查氨基酸及氨基糖.喷洒剂:0.3克茚三酮溶于100毫升正丁醇,加入3毫升醋酸;或0.2克茚三酮溶于100毫升乙醇(或丙酮中).喷洒后处理:110℃加热至斑点出现.(34)吲哚醌:检查氨基酸和一些肽.喷洒剂:0.2%吲哚醌(Isatin)丙酮溶液,含4%醋酸;或用100毫升1%吲哚醌丙酮溶液加10毫升醋酸.喷洒后处理:100~110℃加热10分钟.(35)1,2-萘醌-4-硫磺酸(Folin试剂):检查氨基酸.喷洒剂:新鲜制备0.02克1,2-萘醌-4-磺酸钠,溶于100毫升5%碳酸钠中.喷洒后处理:室温放于,不同氨基酸出现不同颜色.8有机酸(36)酸碱指示剂:检查有机酸.喷洒剂:0.05%溴酚蓝(或溴甲酚绿,或溴麝香草酚蓝)的乙醇溶液.(37)氧化还原显色剂:检查有机酸.喷洒剂:I.0.075%溴甲酚绿及0.025%溴酚蓝的无水乙醇液.II.0.5%高锰酸钾及1%碳酸钠.10H2O的蒸馏水液.临用前,取I和II按1:1混合后喷酒.喷酒后处理:稳定时间为5~10分钟.对不同的有机酸在纸谱上呈现不同颜色.(38)???(Acridine):检查酸.喷洒剂:0.005%的??乙醇溶剂.紫外线分析灯下呈黄色荧光.(39)芳香胺-还原糖:检查酸.喷洒剂:芳香胺(如苯氨5克)和还原糖(如木质糖5克)溶于50%含水乙醇中.喷洒后处理:125~130℃加热出现棕色斑点.氧化苦参碱的提取和鉴定中药苦参是豆科植物苦参(SophorsFlavescensAit)的干燥根,味苦,性寒,有清热燥湿,杀虫等作用.临床上用于治疗痢病,黄胆和皮肤瘙痒症.近年还发现具有抗肿瘤,升白,抗病毒性肝炎等药理作用,苦参中主要含生物碱,此外还有黄铜类成分.一,苦参中主要已知生物碱的结构和性质1.氧化苦参碱（oxymarrine）C12H24N2O2，白色棱晶，易溶于水，甲醇，乙醇，氯仿，不溶于乙醚，苯。溶点：207～208℃（不含结晶水）162～163℃（含一个结晶水）77～78℃（含多个结晶水）结晶水可在145～150℃／0。002mmHg下除去，可于许多金属离子如Fe2＋Cu2+Cr3+等生成沉淀，［α］？？＋47.7℃(乙醇).2.苦参碱(matrine)C15H24N2O在轻石油醚中结晶时，由于温度等条件不同，可以得到αβδ三种结晶（溶点分别为76℃87℃84℃）和一种流体即γ型。通常室温下结晶得到的是α型，易溶于水，甲醇，乙醇，氯仿，溶于苯，在乙醚中溶解度小。［α］？？＋39.11[乙醇]3.脱氢苦参碱(槐果碱)（sophocarpine）C15H24N2O白色棱晶。溶点80～81℃，易溶于甲醇乙醇氯仿，略溶于苯和乙醚，在水中溶解度小。［α］？-29.44(乙醇)4.槐定(sophoridine)C15H24N2O白色棱晶，溶点106～108℃，为苦参碱的一种空间异构体。二．实验目的与要求（1）通过苦参生物碱的提取掌握用渗滤法和离子交换法提取生物碱的方法。（2）掌握沙氏提取器的使用方法。（3）掌握氧化铝吸附薄层层离法和柱层层离法鉴定和分离生物碱的方法。三．原理氧化苦参碱为喹诺里西汀类生物碱，叔胺氮氧化合物与酸成盐溶于水与非生物碱分开，提取的生物碱盐的阳离子部分与H+型树脂发生交换生物碱吸附在柱上，吸附有生物碱的树脂，碱化呈游离生物碱，可被氯仿等有机溶剂提取。R-SO3-Na+＋H+CL-——R-SO3-H++NaCLSO3Na+H2O生物碱四.实验方法.1酸水提取和离子交换（1）渗漉法取苦参碱400克,加入适量0.5%(g/v)的盐酸湿润后放置一小时，装入渗滤液的PH值及生物碱反应，使渗滤液通过离子交换脂柱，待经过树脂柱的滤液生物碱反应或微弱的反应时，停止交换，将树脂倒入烧杯中，酮蒸馏水洗涤几次，滤干，树脂放入搪瓷盘中自然晾干。（2）浸提法300克？？0.5HCL(g/v)6倍量浸泡48小时，浸出浸液，。。在处理1～2次，2次浸液全体合并。2总生物碱的洗脱将晾干的树脂放入烧杯中，加14％氨水，搅匀，使温度适宜（树脂充分膨胀，但又无过剩的水）约用氨水30～60毫升，静置20分钟后，装入沙氏提取器中，用400毫升95％的乙醇回流洗脱4～5小时（或用氯仿回流提取5～8小时）回收溶剂至干，所得浸膏用70～80毫升氯仿溶解，并转入分液漏斗，充分静置后，弃掉上层油状物，过滤氯酚溶液后用无水硫酸钠干燥，回收氯仿至干，残留物用2～3倍量丙酮处理，即析出固