细胞培养知识

细胞培养知识VERO细胞培养、纯化灭活的狂犬病毒vero细胞Vero细胞被成功的用来培养狂犬病疫苗、乙脑疫苗等多种疫苗，在非典期间又为研究冠状病毒做出贡献，在医药研究种广泛应用。来源：非洲绿猴肾细胞形态：上皮细胞生长特性：贴壁注释：该细胞是日本千叶大学的Y.Yasumura和Y.Kawakita于1962年3月27日从一只正常的成年非洲绿猴肾组织培养出来的。培养液：MEM（含2mML-谷氨酰胺和Earle'sBSS，1.5g/LNaHCO3,0.1mM非必需氨基酸,1.0mM丙酮酸钠），10%胎牛血清传代：吸去培养液。用0.25%(w/v)Trypsin-0.53mMEDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以1:3至1:6为宜，传代期间培养液每周更换2-3次）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。CHO-K1细胞CHO-K1细胞是实验中非常常用的一个细胞株，在生物制药中使用也非常广泛。该细胞株培养条件简单，贴壁强度适中，比较容易转染，很适合用它来研究一般哺乳动物基因的功能。来源：Cricetulusgriseus(中国仓鼠)卵巢形态：表皮细胞生长特性：贴壁注释：CHO-K1由CHO衍生而来，CHO是T.T.Puck在1957年从一只成年中国仓鼠卵巢获得的（1）。培养液：Ham'sF12K（含2mML-谷氨酰胺，1.5g/LNaHCO3），10%胎牛血清。传代：吸去培养液。用0.25%(w/v)Trypsin-0.53mMEDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以1：4到1：8为宜，传代期间培养液更换1-2次）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。1.PuckTT,etal.GeneticsofsomaticmammaliancellsIII.Long-termcultivationofeuploidcellsfromhumanandanimalsubjects.J.Exp.Med.108:945-956,1958.PubMed:13598821293细胞293细胞比较容易转染，是一个很常用的表达研究外源基因的细胞株。293细胞的一个衍生株：293T/17的转染效率更高，成为广大研究者研究基因功能的一个强大工具。293细胞的缺陷是生长过程中贴壁强度比较小。所以在实验过程中容易流失，从而影响实验结果。如果一个实验室新得到的293细胞是邮寄得到的并且细胞在培养瓶中，就需要让细胞沉降几天时间，因为大量细胞会漂浮在培养液里。来源：人体肾脏形态：上皮细胞生长特性：贴壁注释：该细胞含腺病毒5DNA。培养液：MEM（含2mML-谷氨酰胺和Earle'sBSS，1.5g/LNaHCO3,0.1mM非必需氨基酸,1.0mM丙酮酸钠），10%马血清（热灭活）。传代：吸去培养液。用0.25%(w/v)Trypsin-0.53mMEDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以1：2到1：4为宜，传代期间培养液2-3天更换1次）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。NIH-3T3细胞NIH-3T3细胞在实验室常用来做转染及基因表达的研究。易感病毒有鼠肉瘤病毒和鼠白血病毒。来源：Musmusculus（小家鼠）胚胎形态：成纤维细胞样生长特性：贴壁注释：为得到适合转染得细胞株，NIH-3T3细胞至少连续克隆过5次。NIH-3T3细胞容易转染DNA，鼠痘病毒阴性。培养液：DMEM（含4mML-谷氨酰胺、4.5g/L葡萄糖、1.5g/L碳酸氢钠），10%小牛血清传代：吸去培养液。（不要让细胞长满培养器皿，长满80%为宜）用0.25%(w/v)Trypsin-0.53mMEDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以3-5x103/cm2为宜，传代期间培养液每周更换2次）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。PC-12细胞PC-12细胞是一个常用的神经细胞株。来源：Rattusnorvegicus(褐家鼠)肾上腺嗜铬细胞瘤（一种交感神经系统的肿瘤）形态：多角型细胞生长特性：贴壁较松，容易成团注释：PC-12细胞株来源于一种可移植的鼠嗜铬细胞瘤，该细胞对神经生长因子（NGF）有可逆的神经元显形反应，该细胞不合成肾上腺素。培养液：Ham'sF12K（含2mML-谷氨酰胺，1.5g/LNaHCO3）+15%马血清+2.5%胎牛血清。传代：吸去培养液。加入新的培养液，用吸管吹下细胞或用手拍打培养瓶或刮下细胞到培养液中，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以1：4为宜，传代期间2-3天更换培养液）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。Hela细胞Hela细胞是在所有细胞株中最著名的。它来源于美国的HelenLane，她1951年死于子宫颈癌。但源自她的肿瘤的细胞却在世界各地的实验室中得到广泛的使用。来源：人宫颈癌形态：上皮细胞生长特性：贴壁注释：Hela细胞显角蛋白免疫沉淀染色阳性，包含HPV-18序列，有正常水平的pRB和p53的低水平表达。培养液：MEM（含2mML-谷氨酰胺和Earle'sBSS，1.5g/LNaHCO3,0.1mM非必需氨基酸,1.0mM丙酮酸钠），10%胎牛血清传代：吸去培养液。用0.25%（w/v）Trypsin-0.53mMEDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶活性）。加2-3毫升Trypein-EDTA，放37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以1：2到1：6为宜，每周传代2-3次）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。Sf9细胞Sf9细胞常在Baculovirus（杆状病毒）表达系统中用作宿主细胞，来表达外源蛋白。来源：Spodopterafrugiperda（草地夜蛾）卵巢细胞形态：上皮细胞生长特性：贴壁注释：Sf-9细胞是由G.E.Smith和C.L.Cherry在1983年从细胞株IPLB-SF21AE得来的一个克隆。IPLB-SF21AE是1977年由Vaughn等从草地夜蛾蛹的卵巢组织得到的。培养液：TNM-FH培养液：照厂家的说明配好Grace'sAntheraea培养液，每升培养液加3.3g酵母粉和3.3g乳白蛋白水解物，用1MKOH调pH到6.2-6.4过滤除菌，4℃保存。完整培养液在使用前加入10%热灭活的胎牛血清。传代：用吸液管吹洗细胞使其悬浮，或用手从侧面拍打细胞培养瓶(当用大细胞培养瓶时)重悬细胞。（当用来接种的细胞重悬前就有很多细胞漂浮，要吸掉漂浮细胞及旧培养液，加入新培养液重悬细胞。按合适比例传代细胞到新培养器皿中。（以1：5或更多为宜，每2-3天传代一次）28℃培养（不用CO2培养箱）。冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。BHK21细胞来源：叙利亚仓鼠肾细胞形态：纤维原细胞生长特性：贴壁注释：这个细胞来自于一只出生一天的新生仓鼠，随后被改造成一个易于作表达的宿主细胞株。培养液：MEM（含2mML-谷氨酰胺和Earle'sBSS，1.5g/LNaHCO3,0.1mM非必需氨基酸,1.0mM丙酮酸钠）+10%胎牛血清传代：吸去培养液。用0.25%（w/v）Trypsin-0.03mMEDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶活性）。加2-3毫升Trypein-EDTA，放37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以1：2到1：10为宜，每周传代1-2次）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。HepG2细胞HepG2细胞来源于一个15岁白人的肝癌组织。该细胞分泌多种血浆蛋白：清蛋白、α2-巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原、铁传递蛋白等。该细胞能大容量培养，乙肝表面抗原阴性，对G418有抗性，对人生长激素有刺激反应。来源：人肝癌细胞形态：上皮细胞生长特性：贴壁注释：该细胞表达3-羟基-3-甲基戊二酸辅酶A还原酶和肝甘油三酸脂脂肪酶。该细胞在有百草枯(英文名：gramoxone)的环境下过氧化氢酶mRNA表达增加，ApoA-ImRNA表达减少。培养液：MEM（含2mML-谷氨酰胺和Earle'sBSS，1.5g/LNaHCO3,0.1mM非必需氨基酸,1.0mM丙酮酸钠）+10%胎牛血清。传代：吸去培养液。用0.25%(w/v)Trypsin-0.53mMEDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以1:4至1:6为宜，传代期间培养液每周更换2次）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。细胞培养液简介虽然细胞培养的实验早在19世纪末就开始了，但用于培养细胞的培养液主要是动物的血清或淋巴液。被人称为细胞培养之父的RossHarrison就是利用青蛙的淋巴液来培养神经细胞的。这样的培养液不但性质不稳定，而且只能进行非常小规模的细胞培养。第一个人工配制的培养液是由Lewis&Lewis在1911年由海水、血清、胚胎提取物和盐和蛋白胨为原料配制成的。但是人们对于培养液中的化学成分并不清楚。直到1948年，Fisher才研制成了第一个化学成分清楚的细胞培养液CMRL1006。实验室常用的细胞培养液的主要成分是氨基酸、葡萄糖、无机盐、维生素和微量元素等。为了维持稳定的pH，培养液中一般有一个pH缓冲系统，同时常加入少量的酚红作为pH指示剂。另外培养液中一般需要加入一定量的血清。产品目录一次性细胞培养器皿技术资料..细胞培养皿细胞培养板玻底培养皿/培养板细胞生物学试剂鼠尾胶原蛋白酶标板培养液中的氨基酸除了13种细胞生长所必须的氨基酸外，往往加入一些非必需的氨基酸以促进细胞的生长。在必需的氨基酸中，L-谷氨酰胺在溶液中不稳定（在4℃培养溶液中半衰期为3个星期，37℃中为1个星期），需要在使用时加入。葡萄糖在培养液中的含量一般为1g/L（低糖）或4.5g/L（高糖）。它是细胞代谢重要的能量来源。细胞培养液中都有一个平衡盐系统，用于维持细胞的渗透压、维持pH和细胞正常的代谢等。最常用的平衡盐系统有Dulbecco'sphosphatebufferedsaline(D-PBS);Earle'sbalancedsalts(EBSS)和Hanks'balancedsalts(HBSS)。它们都含有细胞所必需的5种离子：钠离子、钾离子、钙离子、镁离子和磷酸根。培养液中的pH缓冲系统一般是碳酸氢钠和HEPES等。培养液中的维生素包括叶酸、维生素B、烟酰胺和吡哆醇等。培养液中的微量元素元素包括Cu2+，Zn2+，和Mn2+等。血清中含有生长因子、促进细胞帖壁的因子、矿物质、激素、脂类等，另外血清可以抑制胰酶的活性。一般培养液都含酚红作为pH指示剂，它是细胞培养液状态的一个很好的标志。过长时间的培养或者微生物的污染都会使培养液的pH发生改变。需要注意的是，酚红可以模拟类固醇激素（尤其是雌性激素）的作用，所以如果培养的细胞对雌性激素敏感（比如实验本身就是研究雌性激素对细胞的作用），就应当使用没有酚红的培养液。技术资料..中结合力酶标板高结合力酶标板试用样品索取单DNA荧光染色法检测细胞培养中的支原体污染没有