支气管肺泡灌洗液相关实验室操作

王庆丰LOGOCOMPANYLOGO延迟符23目录CONTENTS123BALF标本保存运送形态学检查病原学检查4支气管肺泡灌洗液（BALF）BALF是通过支气管镜向支气管肺泡内注入生理盐水并进行抽吸，收集肺泡表面液体，通过检查细胞成分、可溶性物质和感染性病原体，诊断肺部相关疾病、评价疗效和预后。标本包括：BALF和保护性毛刷（PSB）5适应症肺部感染，特别是免疫受损患者肺部机会性感染的病原体诊断。肺部不明原因阴影、疑似肺部感染或需与其他疾病鉴别。6BALF采集BALF收集：由专科医生采集。用于病原学分析的标本需用无菌容器收集；细胞学分析需选择塑料容器或硅化的玻璃容器以减少细胞的黏附。送检量至少5毫升（10-20毫升最佳）。2020年4月8日7检测目的转运条件保存条件检测方法细菌无菌容器，室温，≤2h4℃，≤24h革兰染色定量培养奴卡菌革兰染色弱抗酸染色培养军团菌培养（BCYE营养培养基、GVPC及MWY筛选培养基）核酸检测抗原检测（DFA）真菌无菌容器，室温，≤2h4℃，≤24hKOH压片、荧光白染色真菌培养曲霉KOH压片或荧光白染色真菌培养半乳甘露聚糖抗原试验（GM）肺孢子菌六胺银染色核酸检测抗原检测隐球菌墨汁染色真菌培养隐球菌荚膜多糖抗原分枝杆菌无菌容器，室温，≤2h4℃，≤24h涂片抗酸染色(萋-尼染色、荧光染色)分枝杆菌培养核酸检测（XpertMTB/RIF）病毒病毒转运培养基，室温，≤2h4℃，≤5d；-70℃，˃5d核酸检测病毒抗原检测（DFA、胶体金法）分离培养寄生虫无菌容器，室温，≤2h4℃，≤24h直接镜检核酸检测抗原检测（ELISA、ICT）8BALF标本运送与保存室温条件下2h内送至实验室。若延迟送检，可将标本放置于2～8℃保存，但不可超过24h。9BALF临床应用BALF病原学免疫学形态学肿瘤10BALF诊断的疾病弥漫性间质性肺病1职业性肺部疾病延迟符肺部感染肺部肿瘤儿科肺部疾病延迟符形态学检查（细胞分类）1213141516淋巴、中性粒细胞高倍1718纤毛上皮细胞油镜19细胞学分类的临床意义中性粒细胞比例增高为主时，见于各种细菌或真菌等感染；淋巴细胞比例增高为主时，见于病毒性肺炎、结节病或过敏性肺炎。嗜酸粒细胞比例增高为主时，见于嗜酸粒细胞浸润症、支气管哮喘等。20延迟符病原学检查22BALF标本病原体实验室检测显微镜检查革兰染色及BALF质量评价：建议使用细胞离心机制片，取适量BALF标本600～1000r/min离心10～20min,进行革兰染色。低倍镜下若鳞状上皮细胞占全部细胞比例1%，提示标本被上呼吸道分泌物污染；柱状上皮细胞5%时,提示BALF并非来自于远端气腔。观察革兰染色结果及白细胞情况，如果见到噬菌现象，须报告吞噬细菌的中性粒细胞占或全部中性粒细胞的比例，通常数值为5%时可作为肺炎诊断的阈值。23BALF标本病原体实验室检测抗酸染色：用于检测分枝杆菌，弱抗酸染色可用于检测奴卡菌。氢氧化钾(KOH)压片：用于真菌，特别是丝状真菌的形态学观察。墨汁染色：用于隐球菌的检测。六胺银染色：常用于肺孢子菌的检测。免疫荧光显微镜：可用于军团菌、肺孢子菌及病毒的检测。24BALF标本病原体实验室检测一般细菌培养（定量培养）：（1）涡旋震荡BALF标本30～60s。（2）定量接种：用经校准的加样器（或定量接种环）取10μl的BALF标本，分别点种于血平板和巧克力平板上且密集划线，有条件时最好采用灭菌L型玻棒涂布平板。还可取100μlBALF接种于麦康凯或中国蓝培养基。（3）孵育：将接种的平板放在二氧化碳培养箱（5%～10%CO2）中，35℃培养48h。25BALF标本病原体实验室检测一般细菌培养（定量培养）：（4）结果判定：分别对不同形态的菌落进行计数，乘上稀释倍数即为此细菌的菌落数。菌落计数BALF≥104CFU/ml或无菌防污染BALF≥103CFU/ml时认为是可能的病原菌，但不能机械使用该阈值，还要结合患者的实际情况及有无使用抗菌药物等因素综合判断。26BALF标本病原体实验室检测真菌培养：BALF标本1500～1800×g，离心15～20min，沉淀物混匀后接种于沙保平板上，30℃和35℃孵育7d，怀疑双相真菌时应使用带螺帽的培养基，孵育6周。特殊病原菌培养：BALF离心后的沉淀物还可用于分枝杆菌、军团菌及病毒等的培养。27BALF标本病原体实验室检测核酸检测：用于病毒、军团菌、肺孢子菌或分枝杆菌等的检测。真菌抗原：半乳甘露聚糖试验（GM试验）主要用于曲霉的检测；目前有关BALF检测隐球菌荚膜抗原的研究证据较少，可考虑作为诊断的补充手段。28BALF标本病原体实验室检测涡旋震荡30～60s沉淀物混匀后特殊病原菌培养：分枝杆菌真菌军团菌病毒等真菌抗原：半乳甘露聚糖隐球菌荚膜多糖抗原BALF接种10μlBALF上清液显微镜检查：不染色镜检革兰染色抗酸染色弱抗酸染色六胺银染色墨汁染色KOH压片免疫荧光染色核酸检测：病毒军团菌肺孢子菌分枝杆菌等定量培养适量BALF标本600~1000r/min离心10~20min剩余的BALF标本1500～1800×g离心15～20min革兰染色标本质量评估29临床意义微生物学涂片检查：BALF中的沉淀物进行革兰染色、抗酸染色及真菌的特殊染色，对细菌、分枝杆菌、真菌及寄生虫的检出有较大意义。微生物学培养：在严格无菌操作下采集的BALF进行直接接种培养或取其沉淀物进行培养，对检测细菌及真菌具有较大的临床意义，BALF细菌培养计数≥104CFU/ml或无菌防污染BALF≥103CFU/ml时具有临床诊断意义。灌洗液中GM测定：取5~10ml灌洗液置于无菌容器中，4h内送检；对于早期快速诊断侵袭性肺曲霉病，特别是气道曲霉感染的患者具有重要的临床价值。对于某些特殊病原体，如病毒、肺孢子菌及寄生虫等可通过BALF中的抗原或核酸测定进行诊断。30THANKYOU延迟符