生物安全二级(BSL-2)实验室标准操作手册培训

主讲人：陈贤平日期：2013.07.03生物安全二级（BSL-2）实验室标准操作手册培训【生物安全实验室】概念生物安全（biosafety）指避免危险生物因子造成实验室人员暴露，向实验室外扩散并导致危害的综合措施。WHO定义为“保护工作人员避免接触与所进行实验工作（临床或研究）有关的微生物因子的生物安全原则和技术的实践”。【生物安全实验室】概念生物安全实验室（biosafetylaboratory）是通过实验室设计建造、实验设备的配置、个人防护装备的使用，通过严格遵守预先制定的标准操作程序和管理规范等综合措施，确保操作生物危险因子的工作人员不受实验对象的伤害，确保周围环境不受其污染的实验室。生物安全标识生物安全标识【生物安全实验室】目的保护操作人员保护环境保护样品防护水平分为一级、二级、三级、四级，BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4（表示动物活体操作）一级防护水平最低，四级防护水平最高【生物安全实验室】实验室生物安全防护水平分级适用于操作在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物【生物安全实验室/适用性】适用性【1】一级（BSL-1）实验室适用于操作能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。【生物安全实验室/适用性】【2】二级（BSL-2）实验室适用于操作能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。【生物安全实验室/适用性】【3】三级（BSL-3）的实验室适用于操作能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。【生物安全实验室/适用性】【4】四级（BSL-4）实验室气溶胶aerosols悬浮于气体介质中的粒径一般为0.001μm～100μm的固态或液态微小粒子形成的相对稳定的分散体系【生物安全实验室/主要术语】主要术语生物安全柜biologicalsafetycabinet，BSC具备气流控制及高效空气过滤装置的操作柜，可有效降低实验过程中产生的有害气溶胶对操作者和环境的危害【生物安全实验室/主要术语】气锁airlock具备机械送排风系统、整体消毒灭菌条件、化学喷淋（适用时）和压力可监控的气密室，其门具有互锁功能，不能同时处于开启状态。缓冲间bufferroom设置在被污染概率不同的实验室区域间的密闭室，需要时，设置机械通风系统，其门具有互锁功能，不能同时处于开启状态【生物安全实验室/主要术语】高效空气过滤器（HEPA过滤器）highefficiencyparticulateairfilter通常以0.3μm微粒为测试物，在规定的条件下滤除效率高于99.97%的空气过滤器【生物安全实验室/主要术语】实验室的走廊和通道应不妨碍人员和物品通过应设计紧急撤离路线，紧急出口应有明显的标识【生物安全实验室/设计原则及基本要求】设计原则及基本要求房间的门根据需要安装门锁，门锁应便于内部快速打开需要时（如：正当操作危险材料时），房间的入口处应有警示和进入限制【生物安全实验室/设计原则及基本要求】应评估生物材料、样本、药品、化学品和机密资料等被误用、被偷盗和被不正当使用的风险，并采取相应的物理防范措施实验室内温度、湿度、照度、噪声和洁净度等室内环境参数应符合工作要求和卫生等相关要求【生物安全实验室/设计原则及基本要求】实验室设计还应考虑节能、环保及舒适性要求，应符合职业卫生要求和人机工效学要求实验室应有防止节肢动物和啮齿动物进入的措施【生物安全实验室/设计原则及基本要求】门应有可视窗并可锁闭，门锁及门的开启方向应不妨碍室内人员逃生墙壁、天花板、地面应易清洁、不渗水、耐化学品和消毒灭菌剂的腐蚀地面应平整、防滑，不应铺设地毯【生物安全实验室/设计原则及基本要求】不得循环使用动物实验室排出的空气动物实验室的设计，如：空间、进出通道、解剖室、笼具等应考虑动物实验及动物福利的要求【生物安全实验室/设计原则及基本要求】【生物安全实验室】二级生物安全实验室BSL－2BSL-2实验室在建筑物中的位置通常无特别要求；可根据实验活动的需要确定；当建筑条件允许时，宜设于人流、物流相对较少的僻静处，自成隔离区域。【生物安全实验室/BSL-2实验室】位置【生物安全实验室/BSL－2实验室】常压状态负压状态负压状态的生物安全防护性能高于常压状态。选择——根据需要类型【生物安全实验室/BSL－2/常压状态】“无特别要求”生物安全柜洗眼器/洗手池标志实验室主入口的门、放置生物安全柜实验间的门应可自动关闭实验室主入口的门应有进入控制措施常压状态若房间面积足够，宜在进口处设置隔断，形成前室和核心工作间核心实验间前室衣柜边台双扉传递窗【生物安全实验室/BSL－2/常压状态】实验室工作区域外应有存放备用物品的条件【生物安全实验室/BSL－2/负压状态】平面设置/布局压力梯度气流组织人流组织物流组织负压状态——建设要点【生物安全实验室/BSL－2/负压状态】平面布局——要点应符合人流组织物流组织其他各环节的生物安全性要求【生物安全实验室/BSL－2/负压状态】平面设置更衣室＋缓冲间＋主实验室［准备间/洗消间＋淋浴室＋样品库］使用独立空调时应设（预留）机房，无需设污物专用走廊及二更衣室基本平面结构示意图更衣室缓冲间核心工作间准备间边台传递窗【生物安全实验室/BSL－2/负压状态】【生物安全实验室/负压状态BSL－2/平面布局】人流进入路线公共清洁区更衣室缓冲间污染区【生物安全实验室/负压状态BSL－2/平面布局】人流退出路线污染区缓冲间淋浴间公共清洁区更衣室【生物安全实验室/负压状态BSL－2/平面布局】物品进、出路线清洁区双扉传递窗污染区【生物安全实验室/负压状态BSL－2/平面布局】平面结构示意图—淋浴更衣室缓冲间核心工作间准备间边台传递窗淋浴间淋浴平面结构示意图—样品库更衣室缓冲间核心工作间准备间边台传递窗淋浴间样品库样品库【生物安全实验室/负压状态BSL－2/平面布局】平面结构示意图—机房更衣室缓冲间核心工作间准备间边台传递窗机房【生物安全实验室/负压状态BSL－2/平面布局】【生物安全实验室/负压状态BSL－2/平面布局】平面设置缓冲间是指具有不同空气指标（气压、洁净度、温度、相对湿度）的区域之间相贯通时空气相互交换的减缓区，其作用仅在于最大程度地减少区域空气指标的损失。平面设置缓冲间在BSL-2实验室中，缓冲室最重要的作用是减少相邻相通房间负压差（Pa）的损失，起缩小泄压区的作用，使不同区域之间的空气交换量降低到最小程度；其次是减少洁净度等其他空气指标的损失。【生物安全实验室/负压状态BSL－2/平面布局】平面设置缓冲间缓冲室越小效果越好。在满足正常人流、物流的情况下，应尽量缩小建筑尺度；因此，缓冲室的面积通常取1300mm×〔1300～1500〕mm左右即可。【生物安全实验室/负压状态BSL－2/平面布局】【生物安全实验室/负压状态BSL－2/平面布局】缓冲扩增/分析（-25pa）生物安全柜培养箱机房缓冲(-10Pa)洗手池洗眼器BSL-2实验室冰箱(-20Pa)高压锅观察窗外准备水池更衣缓冲试剂准备离心机更衣柜边台【生物安全实验室/负压状态BSL－2/平面布局】【生物安全实验室/负压状态BSL－2/平面布局】各区域平面结构应规整空气处理核心措施气流组织保护实验人员（定向气流）负压梯度保护外部环境洁净度保护样品【生物安全实验室/负压状态BSL－2/核心措施】实验室区域整体气流组织清洁区缓冲区污染区排出【生物安全实验室/负压状态BSL－2/气流组织】主实验室气流组织清洁空气送入操作人员生物安全柜后排出生物安全柜【生物安全实验室/负压状态BSL－2/气流组织】【生物安全实验室/负压状态BSL－2/气流组织】人员核心实验间气流组织排风口送风口生安柜空气调节主实验室为对侧上送下排【生物安全实验室/BSL－2/负压状态】【生物安全实验室/BSL－2/负压状态】主实验室为对侧上送下排/上排均匀单向流空气调节送风口排风口宜采用全新风系统【生物安全实验室/BSL－2/负压状态】空气调节主实验室相对压强宜为-20Pa～-30Pa相邻相通房间压差为10Pa以上洁净度为7级～8级。【生物安全实验室/负压状态BSL－2/生物安全柜】生物安全柜BSC-II-A1型BSC-II-A2型BSC-II-B1型BSC-II-B2型BSC-II-A1型实验区有垂直层流前窗进风气流平均流速≥0.38m/s可向室内排风循环气流比例为70%有正压污染区不能用于挥发性有毒化学物、放射性物质的实验操作【生物安全实验室/负压状态BSL－2/生物安全柜】实验区有垂直层流前窗进风气流平均流速≥0.50m/s可向室内排风循环气流比例为70%正压污染区被负压区域包围无外接风道有外接风道BSC-II-A2型【生物安全实验室/负压状态BSL－2/生物安全柜】BSC-II-B1型实验区有垂直层流前窗进风气流平均流速≥0.50m/s用风道连接排至室外循环气流比例为30%正压污染区被负压区域包围【生物安全实验室/负压状态BSL－2/生物安全柜】实验区有垂直层流前窗进风气流平均流速≥0.50m/s用风道连接排至室外循环气流比例为0—全排正压污染区被负压区域包围BSC-II-B2型【生物安全实验室/负压状态BSL－2/生物安全柜】【生物安全实验室/负压状态BSL－2/生物安全柜】A1型、A2型排风方式室内循环室外排风外置风机排风管套筒连接【生物安全实验室/负压状态BSL－2/生物安全柜】排风管套筒接避免干扰生物安全柜自身的气流套筒排风管生安柜四种都可以通常选择BSC-II-A2型原因：安全—符合安装—简单：可直接排在室内【生物安全实验室/负压状态BSL－2/生物安全柜】生物安全柜选择排至室内生物安全柜排风在室内循环，室内应具备换气条件排至室外排风管应独立于建筑物其他公共通风系统管道；可以连接本实验室通风系统排风管【生物安全实验室/负压状态BSL－2/生物安全柜】说明实验设备布置生物安全柜与出入口不紧邻的墙体通讯设备生物安全柜对面洗手、洗眼装置门口孵箱靠近邻室气瓶处高压过灭均器靠近传递窗【生物安全实验室/负压状态BSL－2/设备布置】主实验室设备布置生安柜离心机箱培养洗眼/手灭菌器传递窗传真机【生物安全实验室/负压状态BSL－2/设备布置】实验室核心间内一台实验室所在建筑一台【生物安全实验室/负压状态BSL－2/设备布置】高压灭菌器洗手、洗眼装置水上下水下水处理？消毒液一次性洗眼瓶【生物安全实验室/负压状态BSL－2/面积】建筑面积（参考）以一台生物安全柜计总面积宜为35平方米～55平方米主实验室宜为10平方米～15平方米。增加一台生物安全柜，加10平方米。缓冲间可在1.3米×1.3米/1.5米左右。建筑结构墙体内表面光洁、防水、耐腐蚀、易于清洁消毒，所有缝隙必须密封。地面应无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀。阴角均采用圆弧线条密封。缓冲间的门均应自动联锁。【生物安全实验室/负压状态BSL－2/建筑结构】建筑结构阴角均采用圆弧线条密封【生物安全实验室/负压状态BSL－2/建筑结构】其他设置安全区域醒目位置设压力显示报警装置【生物安全实验室/负压状态BSL－2/其他设置】其他设置压力显示报警装置【生物安全实验室/负压状态BSL－2/其他设置】其他设置通讯设备：对讲机、传真机、电话、计算机等与外界保持联络将实验资料传出实验区【生物安全实验室/负压状态BSL－2/其他设置】【生物安全实验室/负压状态BSL－2/其他设置】通讯设备通讯设备警铃电话【生物安全实验室/负压状态BSL－2/其他设置】实验台柜/座椅易消毒底部留空【生物安全实验室/负压状态BSL－2/其他设置】耐腐蚀应稳固，边角应圆滑【生物安全实验室/负压状态BSL－2/其他设置】实验台柜