G试验与GM试验

G试验与GM试验微生物室范会侵袭性真菌病(invasivefungaldisease,IFD)概念：又称侵袭性真菌感染，是指真菌侵入人体组织、血液，并在其中生长繁殖导致组织损害、器官功能障碍和炎症反应的病理改变及病理生理过程。侵袭性真菌感染因素增加真菌感染的诊断诊断标准由危险因素、临床特征、微生物学检查和组织病理学检查4部分组成。根据真菌感染的可能性将诊断结果分为三个级别:确诊、拟诊和疑似。诊断级别危险因素临床特征微生物学检查组织病理检查确诊++++拟诊+++-疑似++--真菌感染的诊断临床特征---特异性？影像学---特异性？真菌涂片、培养---特异性？敏感性？时间病理---特异性！敏感性？早期、快速、特异、敏感、采样方便G试验与GM试验G试验G试验（1-3）-β-D葡聚糖占真菌细胞壁成分50%以上与鲎试剂中的G因子发生级联凝固反应G试验检测范围检测底物：（1-3）-β-D葡聚糖诊断：侵袭性真菌感染（IFD）检测频率：每周一至周五真菌细胞壁成分：念珠菌、曲霉、镰刀霉、毛孢子菌、卡氏肺孢子菌、支顶孢、组织胞浆菌等不能检测：结合菌（毛霉、根霉）、隐球菌G试验原理----反应特异性G试验----国产检测方法国产：MB-80（金山川）.动态浊度法.cut-off：阴性＜10ug/ml，中介10-20ug/ml，阳性＞20ug/ml，儿童阳性＞50ug/ml国产：湛江安度斯生物有限公司.动态比色法.cut-off：阴性＜100.5pg/ml，中介100.5-151.5pg/ml，阳性＞151.5pg/ml标本：血浆G试验----试剂盒鲎试剂来源：东方鲎、美洲鲎检测方法：动态比浊法、动态比色法试剂反应性不同，检测结果不同，cut-off值不同30名AML、MDS念珠菌血症患者连续2次G试验阳性，可提高特异性、PPV（阳性预测值）确诊或拟诊IFD，平均比临床症状出现早10dG试验----影响因素假阳性：.抗肿瘤准备：蘑菇多糖、裂褶菌多糖.免疫准备：白蛋白、球蛋白.血透使用纤维素膜.手术中使用棉纱垫、棉拭子等.脂肪乳等假阴性：.棘白菌素类：抑制BDG合成G试验----小结无热源采血管、清洁的检测环境高NPV，连续2次G试验阳性，可提高特异性和PPVIFD早期诊断.比出现临床症状体征早约10天.比HRCT改变早约9天敏感性与感染程度（真菌负荷量）相关念珠菌定植不引起G试验升高动态反应感染程度和抗真菌治疗疗效儿童BDG水平高于成人GM试验GM试验诊断：侵袭性曲霉菌感染（IA）检测底物：半乳甘露聚糖.曲霉细胞壁成分.菌丝在组织中生长时释放.热稳定.可溶性：serum、BALF、CSF检测频率：一周两次GM试验----方法及原理伯乐试剂.原理：双抗体夹心法，采用小鼠单克隆抗体EBA-2，检测人血清中的曲霉菌半乳甘露聚糖。天津贻诺琦.GM试验----临床价值曲霉菌定植时很少释放入血，因此有利于鉴别侵袭与定植GM释放量与菌量成正比，可反映感染程度连续检测GM试验可作为治疗疗效的监测在造血干细胞移植患者中的诊断敏感性高非特异交叉反应：青霉较多、隐球菌GM试验----27项研究荟萃分析敏感性特异性确诊IA7781确诊或拟诊IA6993骨髓移植受体8286恶性血液肿瘤7092SOT受体2284推荐用于恶性血液肿瘤和HSCT(造血干细胞移植)受体不推荐用于SOT（实体器官移植）受体GM试验----假阳性抗菌药物：哌拉西林-他唑巴坦.采样：用药前，或药物浓度最低时高剂量使用激素透析：不能清除大份子GM化疗的严重黏膜炎的患者.谷类食物中的GM抗原通过肠道入血儿童和新生儿：假阳性占83%.母乳或配方食品中双歧杆菌与GM有交叉反应交叉反应真菌：青霉、拟青霉、隐球菌、头状地霉、组织胞浆菌等GM试验----假阴性抗真菌药物.三唑类--降低GM水平.米卡芬净--升高GM水平（能够破坏真菌细胞壁，但不能清除）低侵袭性曲霉菌病低曲霉负荷量GM试验----小结早期、快速、高特异性GM水平反映曲霉负荷量推荐用于恶性血液肿瘤、HSCT患者IPA可考虑BALF标本，并适当提高折点曲霉脑病可考虑CSF标本动态变化指导抗真菌药物使用结合患者临床情况进行分析G+GM----缩小病原谱种属GGM念珠菌属+-镰刀菌属+-隐球菌属-+曲霉菌属++青霉/拟青霉++结合菌纲--病例一男性，55岁，因“反复喘息发作31年，复发伴发热1月”入院既往史：支气管哮喘，过敏性鼻炎，糖尿病查体：37.6℃，双肺散在哮鸣音，未及湿罗音实验室检查：-血常规：WBC10.6×109/L,N51.5%,E15.2%-ESR78mm/h,CRP94.9mg/L-PPD皮试（-）-血ANA（-）-血清GM测定：阳性（3.193≥0.5）-痰真菌涂片及培养（-），细菌培养（-），抗酸（-）-肺功能：重度阻塞性通气功能障碍，低氧血症，支气管扩张试验（-）诊断：过敏性支气管肺曲霉病（ABPA）治疗及转归：抗炎、解痉、化痰、平喘，伊曲康唑+甲强龙静脉滴注；治疗后第三天出黑黄色痰栓，此后痰量渐少，气急好转，疗程两周后改伊曲康唑口服，激素递减。病情稳定后出院治疗后化验-血常规：WBC6.0×109/L,N86.5%,E0%-ESR7mm/h,CRP2.7mg/L病例二肝炎，右肺实变，右胸腔积液支气管镜做细菌、TB、真菌，血培养结果均阴性8月20日.痰涂片：在中性粒细胞内可见革兰阳性球菌少量.痰培养：光滑念珠菌.治疗：特治星+万古霉素.PCT7.9ng/mlPCT(ng/ml)变化情况WBC内可见革兰阳性球菌+光滑念珠菌不能脱机8月26日体温：38℃，不能脱呼吸机WBC：15.0×109/L8月27日：会诊COPD?非典病原体？PCP？真菌？抗菌药物？检查：G试验PCT(ng/ml)变化情况WBC内可见革兰阳性球菌+光滑念珠菌不能脱机G试验（pg/ml）变化情况体温的变化情况WBC（×109/L）的变化情况G+GMG试验与GM试验，为临床增加了侵袭性真菌感染的诊断手段，但不能完全依赖结合患者临床情况综合分析注意分析假阳性、假阴性影响因素注重动态监测，一次检测并不绝对涂片、培养、药敏仍是最基本的真菌学监测手段，实验室和临床均不可忽视