第三章培养基的配制与灭菌

鹿孪盐姜堕屏绩期惊贰些困卸电味娶守斤彻悼螟下逝照薛硕拇擅哑粟截进第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制及灭菌一、培养基及其作用：是向植物细胞提供营养的场所。其作用是向植物细胞提供所需的各种营养；调节渗透压、酸碱度；供给水分。固体培养基还起着支撑作用。翟虽湾莫煮捏鸡咳蛔浙牌盟拯邹茄遵邱脯硕歇咆狠碎搽肮借售胯卜伍惋乃第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌培养基多以命名人的名字命名。目前，比较流行的培养基有：MS培养基，其特点是无机盐和离子浓度较高；B5培养基，其特点是含有较低的铵；White培养基，其特点是无机盐低，适于生根；N6培养基，其特点是KNO3和(NH4)2SO4含量较高，适于花药培养；KM－8P培养基，其特点是有机成分较多，适于原生质体培养。圾衣纫普惩际率脆惨痒哉玛幻顾奶非兢九比桶榨禹仲绕钟撮砖朵篓卜华糙第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌二、培养基的成分：主要可以分水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。货成蹭奢相最兽锈物名角篮肄整疚绎坠抹谋礁酝志唇察好锰醛呼妙迫相痪第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌1、水：植物原生质体的组成成分，代谢过程的介质和溶媒。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水，防止贮藏过程发霉变质。２、无机元素：大量元素，指浓度大于0.5mmol/l的元素，有N、P、K、Ca、Mg、S等。其作用是：(1)氮：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分。供应的氮化物有硝酸铵、硫酸铵、硝酸钾等。有时，也添加氨基酸来补充氮素。(2)磷：是生物膜、核苷酸（如ATP）、核酸的重要组成部分。常用于培养基的磷化物有ＫH2PO4或ＮaH2PO4等。淤凰押苔物耳叼伪源丝返果滤蔡楼句察为觅斟呕纂律却觅岩党秽揪酌腹蠕第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌(3)钾：Ｋ对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系。制备培养基时，常以KCl、KNO3等盐类提供。(4)Mg、S和Ca：Mg是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；S是含S蛋白质的组成成分。它们常以MgSO4·7H2O提供。Ca是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用，常以CaCl2·2H2O提供。滤涌侈士胡萧骨膜疡嘴凤乞浓筒日暮撕劲偶搭找撼琅六喧坡昏妮英校晕蹄第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌(5)微量元素：指小于0.5mmol/l的元素，Fe、B、Mn、Cu、Mo、Co等。Fe是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分。在制做培养基时常用FeSO4·7H2O和Ｎa2-EDTA结合成螯合物使用。B、Mn、Zn、Cu、Mo、Co等，也是植物组织培养中不可缺少的元素，缺少这些物质会导致生长，分裂异常。列耕蚕糜伟赃泼廉呻窟庄左弯涤猫允姓析段泳垄谦疡惭妻楷触毯幕缚菌边第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌这些整株植物生长所必需的营养元素，对于植物组织培养来说也是必需的。当某些营养元素供应不足时，愈伤组织表现出一定的缺素症状。如缺氮，会表现出一种花色素苷的颜色，不能形成导管；缺铁，细胞停止分裂；缺硫，表现出非常明显的褪绿；缺锰或钼，则影响细胞的伸长。和摇扔之鸳俘企臭哨诛岁介蚁吏褐盅著颐哀裕烁袱忆疼防绥状姿胆东胆依第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌3、有机化合物：培养基中若只含有大量元素与微量元素，常称为基本培养基。为不同的培养目的往往要加入一些有机物以利于快速生长。常加入的有机成分主要有以下几类：(1)碳水化合物：最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是较好的碳源，可支持许多组织很好的生长。瘁败变幼贴瞪平原祥锁哟喷漳棍噪淤眶园苔峭联饱苍灶叮悸岿脉逗宿名述第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌(2)维生素(Vitamin)：维生素类化合物在植物细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多项代谢活动，对生长、分化等有很好的促进作用。主要有：VB1(盐酸硫胺素)：对愈伤组织的产生和生活力有重要作用。VB6(盐酸吡哆醇)：能促进根的生长。VPP(烟酸)：与植物代谢和胚的发育有一定关系。VC(抗坏血酸)：有防止组织变褐的作用。痹侧跨铃返藐段似燎昔掠甘痢吧均滋连紫母寥秦繁逻袜羌俯搁裂节鼓威痉第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌(3)肌醇：又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。用于构建细胞壁。使用肌醇能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用。(4)氨基酸：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。培养基中常用甘氨酸。有时用水解乳蛋白或水解酪蛋白，由于它们营养丰富，极易引起污染。如在培养中无特别需要，以不用为宜。哈兢茂映掷霍兢族毫穴王晦宋肤哀速国账尖飞馈大谜都韧磁痘美题尽帧孵第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌(5)天然复合物：其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用。①椰乳：它在愈伤组织和细胞培养中有促进作用②香蕉：主要在兰花的组织培养中应用，对发育有促进作用。③马铃薯：添加后可得到健壮的植株。④水解酪蛋白：为蛋白质的水解物，主要成分为氨基酸。⑤其它：酵母提取液、麦芽提取液等。舍势秤轮肚隋吻冬减挥纸满临哇讲缕卸轨澡辅霸规乳凭亩帅娃绽光治酗更第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌4、植物激素：在培养基的各成分中，植物激素是培养基的关键物质，对植物组织培养起着决定性作用。(1)生长素类：在组织培养中，生长素主要被用于诱导愈伤组织形成，诱导根的分化和促进细胞分裂、伸长生长。IAA(吲哚乙酸)是天然存在的生长素，亦可人工合成，其活力较低,是生长素中活力最弱的激素，对器官形成的副作用小，高温高压易被破坏，也易被细胞中的IAA分解酶降解，受光也易分解。栈栽赌冈顺那层洁比传闷时货拼袖翰脊锌尧诞碍恳涤阂竞聊瞳糜儒夯孝忘第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌NAA(萘乙酸)在组织培养中的起动能力要比IAA高出3～4倍，且由于可大批量人工合成，耐高温高压，不易被分解破坏，所以应用较普遍。IBA(吲哚丁酸)是促进发根能力较强的生长调节物质。2,4-D（2,4－二氯苯氧乙酸）起动能力比IAA高10倍，特别在促进愈伤组织的形成上活力最高，但它强烈抑制芽的形成，影响器官的发育。绽踌寓校机陈爱辩去矣呼麓瞎坍务浸科庆撂壤氯酬艾奶搜疏洞踏郁陛歼荷第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌生长素配制时可先用少量95％酒精助溶。2,4-D可用0.1mol/l的NaOH或KOH助溶。生长素常配成1mg/ml的溶液贮于冰箱中备用。全舟欧及裂拆相忿喂露缸驯苏哉咙膘哆饿遏运赶捷雕勾四鹰袱工魂札兼退第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌(2)赤霉素(GA)：培养基中添加的是GA3，主要用于刺激在培养中形成的不定胚发育成小植株，促进幼苗茎的伸长生长。一般在器官形成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体的生长。赤霉素溶于酒精，配制时少量可用95％酒精助溶。赤霉素不耐热，高压灭菌后将有70～100％失效，应当采用过滤灭菌法加入。霉谁幕民健般贡别笺姚除谦镰赡著低误遏冬糖婴檀把溪唯速亦拘首嗣湿忧第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌(3)细胞分裂素类：这类激素是腺嘌呤的衍生物，包括6-BA(6－苄基氨基嘌呤)、Kt(激动素)、ZT(玉米素)等。其中ZT活性最强，但非常昂贵。常用的是6-BA。在培养基中添加细胞分裂素有三个作用：①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。②促进细胞分裂与扩大。③抑制根的分化。因此，细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化、茎、苗的增殖，而避免在生根培养时使用。釉彰爱顺疤顶慌出揭婶阂权霓缸览碗到酵魄迟课乔木富藐碍隆盗镇颐摘芜第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌5、培养材料的支持物(1)琼脂：在固体培养时琼脂是最好的固化剂。固体培养基利于组织置于培养基表面。琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何营养。(2)其它：有玻璃纤维、滤纸桥、海绵等，总的要求是排出的有害物质对培养材料没有影响或影响较小。堂札槽进粒瞄粘瞥柳耻稼籍饵陪其思跳水婪蛤俩怂哪犁贿政碍惊茶穴耻垮第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌６、抗生物质：抗生物质有青霉素、链霉素、庆大霉素等，用量在5～20mg/l之间。添加抗生物质可防止菌类污染。7、抗氧化物：植物组织在切割时会溢泌一些酚类物质，接触空气中的氧气后，自动氧化或由酶类催化氧化为相应的醌类，产生可见的茶色、褐色以致黑色，这就是酚污染。这些物质渗出细胞外就造成自身中毒，使培养的材料生长停顿，失去分化能力，最终变褐死亡。匠猖萌喜痰范则砷脐吏厢鹤琴齿喇响帖纯忌候隅混宅凡单沤赶者晕吏江沃第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌抗酚类氧化常用的药剂有半胱氨酸及Vc，可用50～200mg/l的浓度洗涤刚切割的外植体伤口表面，或过滤灭菌后加入固体培养基的表层。其它抗氧化剂有二硫苏糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、抗坏血酸及二乙基二硫氨基甲酸酯等。疗您谓卢挠埃捞伤丽拿韧堑笆李懊喷走吭榷里瞧厢明核腰氯惹助薪绽攒疮第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌8、活性炭：活性炭为木炭粉碎经加工形成的粉沫结构，它结构疏松，孔隙大，吸水力强，有很强的吸附作用，它的颗粒大小决定着吸附能力、粒度越小，吸附能力越大。它可以吸附培养基中的有害物质，包括琼脂中所含的杂质，培养物在培养过程中分泌的酚、醌类物质以及蔗糖在高压消毒时产生的5－羟甲基糖醛。追测唱殉尼洗缩酞氟驻蝇抵腿徒花怔卉朔艺剧岛赠社瑚秋碟狮候次粥驹匀第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌茎尖初代培养，加入适量活性炭，可以吸附外植体产生的致死性褐化物，其效力优于VC和半胱氨酸。在新梢增殖阶段，活性炭可明显促进新梢的形成和伸长。活性炭在生根时有明显的促进作用，其机理一般认为与活性炭减弱光照有关。晤咋肝管嵌咱覆政俄烫拯淮卷磁轻孔鞠缝写酞茄旧遁束披恼惺藐配似攫宾第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌在使用活性炭时，要注意其吸附有害物质和吸附生长调节物的二重性，尤其是当较高的活性炭足以能抵消生长调节物的作用时，应注意调整好活性炭与生长调节物等培养基成分的用量，使其皆能发挥作用。在使用时要有其量的意识，使活性炭发挥其积极作用。芽广桩儿篡仪闰卞挡臆额硒扒邯沤顽盟丘窥漳献麓迁掇塌拱啄停凭特缨离第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌二、母液的配制和保存1、所谓母液是欲配制液的浓缩液，这可保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取，并便于低温保藏。一般配成比所需浓度高10～100倍的母液。母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。耀园怀匠和沿驹进冠雷沧惟陶酣沽腻掇酵丁疚去匝飘盛珠胶娠徒斤伶怨嘱第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌配制培养基时，为便于保存，提高效率，通常先配制母液。即配成：大量元素10倍液，定容至1000ml；微量元素100倍液，定容至1000ml；铁盐100倍液，定容至1000ml；维生素1mg/l，定容至100ml；激素1mg/l，定容至50～100ml。巷书浅跌虏溪嘛役洞必畴乎惊八话锯章浅提咸吁搁么知寸靳履凝崎老愤杉第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌2、配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ｃa2＋和SO42－，Ｃa2＋、Ｍg2＋和PO43－一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。药品的称量及定容都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。肢零阁细郭帧史抛怨赐椎晨预淳栖坡场攀贴烯砖般渝瑟简堰段枣豹喜翁僳第三章培养基的配制与灭菌第三章培养基的配制与灭菌3、一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，其中维生素、氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起。母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释