天根动物组织总RNA提取试剂盒

操作步骤1．匀浆处理：每10-20mg组织加300μl裂解液RL（使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），用研磨杵将组织彻底研磨（如组织较难彻底研磨，可选用电动或玻璃匀浆器）；随后向匀浆液中加入590μlRNase-FreeddH2O和10μlProteinaseK，混匀后56℃处理10-20min。注意：组织量一定不要超过20mg，否则将导致RNA得率和质量下降。2．12,000rpm(~13,400×g)离心2-5min，取上清进行以下操作。3．缓慢加入0.5倍上清体积无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀），得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中（吸附柱放在收集管中），12,000rpm(~13,400×g)离心30-60sec，弃掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。4．向吸附柱CR3中加入350μl去蛋白液RW1，12,000rpm(~13,400×g)离心30-60sec，弃废液，将吸附柱放回收集管中。5．DNaseI工作液的配制：取10μlDNaseI储存液放入新的RNase-Free离心管中，加入70μlRDD溶液，轻柔混匀。6．向吸附柱CR3中央加入80μl的DNaseI工作液，室温放置15min。7．向吸附柱CR3中加入350μl去蛋白液RW1，12,000rpm(~13,400×g)离心30-60sec，弃废液，将吸附柱放回收集管中。8．向吸附柱CR3中加入500μl漂洗液RW（使用前请先检查是否已加入乙醇），室温静置2min，12,000rpm(~13,400×g)离心30-60sec，弃废液，将吸附柱CR3放回收集管中。9．重复步骤8。10．12,000rpm(~13,400×g)离心2min，倒掉废液。将吸附柱CR3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意：此步骤目的是将吸附柱CR3中残余的漂洗液去除，漂洗液的残留，可能会影响后续的RT等实验。产品简介本试剂盒可从动物组织中快速提取总RNA，可同时处理大量不同样品。提取的总RNA纯度高，没有蛋白和其它杂质的污染，可用于RT-PCR、RealTimeRT-PCR、芯片分析、NorthernBlot、DotBlot、PolyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等多种下游实验。预防RNase污染，应注意以下几方面1.经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。2.使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。3.RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。4.配制溶液应使用RNase-FreeddH2O。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%(v/v)，混匀后放置过夜，高压灭菌。）使用前注意事项1.操作前在RL中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1mlRL中加入10μlβ-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RL4℃可放置一个月，裂解液RL在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请加热溶解后使用。2.第一次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。3.以下操作如非指明，均在室温下进行。DNaseI储存液的配制将DNaseI干粉（1500U）溶解在550μlRNase-FreeddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存（可保存9个月）。注意：从-20℃融化后的DNaseI储存液保存于4℃（可保存6周），不要再次冻存。Order:010-59822688Toll-free:800-990-6057/400-810-6057TIANGENBIOTECH(BEIJING)CO.,LTD本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。版本号:DP121221产品内容产品组成DP431(50preps)裂解液RL(BufferRL)30ml去蛋白液RW1(BufferRW1)40ml漂洗液RW(BufferRW)15mlProteinaseK500μl研磨杵(GrindingPestles)10个RNase-FreeddH2O（瓶装）40mlRNase-Free吸附柱CR3(RNase-FreeSpinColumnsCR3)50个DNaseI(1500U)1支缓冲液RDD(BufferRDD)4mlRNase-FreeddH2O（管装）1mlRNase-Free离心管（1.5ml）(RNase-FreeCentrifugeTubes1.5ml)50个RNase-Free收集管（2ml）(RNase-FreeCollectionTubes2ml)50个储存条件RNase-FreeDNaseI,缓冲液RDD和RNase-FreeddH2O(管装)置于2-8℃保存；加入β-巯基乙醇的裂解液RL4℃可放置一个月；其他试剂室温(15-25℃)保存。RNAprepPureTissueKitRNAprepPure动物组织总RNA提取试剂盒（离心柱型）目录号：DP43111.将吸附柱CR3转入一个新的RNase-Free离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30-100μlRNase-FreeddH2O，室温放置2min，12,000rpm(~13,400×g)离心2min，得到RNA溶液。注意：洗脱缓冲液体积不应少于30μl，体积过小影响回收效率。RNA溶液请于-70℃保存。RNA纯度及浓度检测完整性：RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE电泳缓冲液；150V，15min)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA为rRNA，电泳后UV下应能看到非常明显的rRNA条带。28SrRNA的量约为18SrRNA的两倍，说明RNA的完整性较好。纯度：OD260/OD280比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD260/OD280读数在1.8-2.1之间，比值为2.0是高质量RNA的标志。OD260/OD280读数受测定所用溶液的pH值影响。同一个RNA样品，假定在10mMTris，pH7.5溶液中测出的OD260/OD280读数1.8-2.1之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。浓度：取一定量的RNA提取物，用RNase-FreeddH2O稀释n倍，用RNase-FreeddH2O将分光光度计调零，取稀释液进行OD260,OD280测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μl）=(OD260)×(稀释倍数n)×40