03-兽药残留检测-邵汇总

《食品理化检验》黎源倩主编第七章食品中兽药残留量的分析第一节概述使用兽药的目的兽药的主要用途有：防病治病、促进生长、提高饲料利用率、改善动物性食品的品质等。兽药和兽药残留兽药：预防和治疗畜禽疾病的药物；促进生长、提高生产性能、改善动物性食品的品质；也包括一些化学的、生物的动物保健品或饲料添加剂。兽药残留：“兽药在动物性食品中的残留”的简称，是指动物产品的任何可食部分所含兽药的母体化合物及（或）其代谢物，以及与兽药有关的杂质。抗生素类：四环素、氯霉素、磺胺类、呋喃类等；β-兴奋剂：盐酸克伦特罗、己烯雌酚、孕酮等；激素：己烯雌酚、孕酮等；抗寄生虫类：左旋咪唑、苯丙咪唑、克并咪唑、克球酚、吡喹酮等。兽药残留的类型兽药残留的来源在食品动物体内或动物性食品中发现的违章残留,大都是由用药错误造成的,其原因主要有:①不正确地应用药物,如用药剂量、给药途径、用药部位和用药动物的种类等不符合用药指示,这些因素有可能延长药物残留在体内的时间,从而需要增加休药的天数;②在休药期结束前屠宰动物;③屠宰前用药掩饰临床症状,以逃避屠宰前检查;④以未经批准药物作为添加剂饲喂动物;⑤药物标签上的用法指示不当,造成违章残留物;⑥饲料粉碎设备受污染或将盛过抗菌药物的容器用于贮藏饲料;⑦接触厩舍粪尿池中含有抗生素等药物的废水和排放的污水(如猪经常摄入这种污水);⑧任意以抗生素药渣喂猪或其他食品动物等滥用抗生素,是出现抗生素残留的主要原因。美国食品药物管理局(FDA)和美国兽医中心(CVM)的调查结果表明,引起违章药物残留的常见原因为:①不遵守休药期;②使用未经批准的药物;③未做用药记录;④饲料加工或运送错误;⑤盛放它种药物的贮存容器未充分清洗干净等。兽药残留的危害毒性作用：急性、慢性、三致耐药性：耐药菌株传递给人过敏反应：青霉素、磺胺类等激素（样）作用：潜在致癌性、发育毒性（儿童性早熟）等污染环境，影响生态：进入环境仍有活性兽药残留限量标90年代开始监控工作，2002最新《动物性食品中最高残留限量》：可用，不限量：88可用，需限量：94可用，不得检出9禁用，不得检出：31我国食品中部分兽药的最高残留限量药物食品最高残留限量(mg/kg)四环素畜禽：肌肉≤0.1肝≤0.3肾≤0.6氯霉素畜禽肉、水产品不得检出(检出限0.01)磺胺类畜禽（可食性组织）≤0.1水产品≤0.1(单种）猪肉、鸡肉、鸡蛋、牛肉≤0.1(以总量计)呋喃唑酮水产品不得检出鸡肉、鸡蛋≤0.1盐酸克伦特罗(瘦肉精）畜禽肉不得检出(检出限0.01)己烯雌酚畜禽肉、水产品不得检出(检出限0.05)兽药残留限量标准兽药残留分析技术的特点待测物质浓度低样品基质复杂，干扰物质多兽药残留代谢产物多样或不明动物种类多样，对药物代谢存在差异兽药残留的检验方法对检测方法的要求快速高通量定量准确度和精确度确证兽药残留的检验方法理想的仪器装备样品经简单处理即可上机测定不需萃取和净化快速、准确的定量分析自动的资料处理ELISA：简单、快速、灵敏度，但容易产生假阳性，一般只适用进行样品粗筛，阳性结果需进行确证。GC：灵敏度较高，但大多数兽药极性或沸点偏高，需繁琐的衍生化步骤，限制了应用。HPLC：操作简单，但灵敏度不高；某些残留，检出限达不到要求。仪器联用：分离、定性、定量一体，灵敏、准确、选择性都高，是国际公认的确认方法。GC/MS、LC/MS等兽药残留的分析方法筛选方法检测和确认方法：理化检验技术（GC、HPLC、TLC、GC-MS、HPLC-MS等）。微生物检验（微生物抑制试验）免疫法（免疫检测试剂盒）阳性兽药残留的分析方法兽药残留的检验分析方法包括筛选、检测和确认。GC和GC-MS的区别GC是指气相色谱仪。一般来说气象色谱仪使用的检测器有npdfidfpdecd等等如果气象色谱器没加上述常用检测器而是用质谱当做检测器那么就是GC-MS了，GC-MS一般指的是单级质谱如果是二级质谱就是GC-MS-MS了。GC就是一个分离装置严格说GC是没法单独用的必须加检测器只不过人们习惯吧GC-FID、GC-ECD、GC-FPD等等简称为GC而已。质谱分析MassSpectrometry，MS质谱分析法是通过对被测样品离子的质荷比的测定来进行分析的一种分析方法。化合物分子受到电子流冲击后，形成的带正电荷分子离子及碎片离子，按照其质量m和电荷z的比值m/z（质荷比）大小依次排列而被记录下来的图谱，称为质谱。质谱分析的过程与原理不同的物质有不同的质量谱——质谱，利用这一性质，可以进行定性分析（包括分子质量和相关结构信息）；谱峰强度也与它代表的化合物含量有关，可以用于定量分析。化合物C5H12O的质谱图GC-MS的基本流程GC-MS联用的优缺点色谱仪有很强的分离混合物的能力，但是对化合物定性的能力差。质谱分析试样必须是高度纯净物，而质谱本身无分离混合物的能力，但是能用来测定化合物的相对分子质量和化学结构，是一个优良的定性工具。GC-MS联用的优缺点气相色谱-质谱联用的时候，气相色谱法分离效能高，定量准确，故气相色谱仪是质谱法的理想分离器；同样，质谱法灵敏度高，定性能力强，几乎能检查出所有的有机化合物，故质谱仪是气相色谱法的理想检测器。气相色谱首先对挥发性的物质进行分离、定量；质谱法再通过测定离子质量和强度来进行成分分析和结构分析。因此，采用两者的联用，综合其优点，克服其不足。第二节食品中抗生素类兽药残留检验四环素类抗生素的残留检验氯霉素类抗生素的残留检验磺胺类兽药残留检验硝基呋喃类兽药残留检验四环素类抗生素的残留检验常用的四环素类四环素、土霉素、金霉素等允许使用，最高残留有限量常用的测定方法HPLC、TLC、ELISA等HPLC法测定四环素类兽药残留原理：样品提取，微孔滤膜过滤，反相色谱柱（ODS柱）分离，紫外检测器检测。样品处理：5%高氯酸提取、离心、过滤。测定时流动相中加入NaH2PO4，调节pH=2.5，可改善分离度及峰形。当pHpI时，蛋白质以阳离子形式存在，高氯酸与之沉淀，离心除去。四环素类抗生素的残留检验10-Mar-200818:14:01VAB951370-2Time0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.007.50%0100080310-11MRMof12ChannelsES+TIC1.00e51.931.2907-Apr-200811:11:49VAB951std5Time0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.007.50%0100080407-5MRMof12ChannelsES+TIC5.72e43.002.406.275.293.474.22（A）空白养殖虾样品（B）四种四环素类药物的养殖虾样品定量方法：用系列标准品的浓度～峰面积（峰高）绘制标准工作曲线，应该是一条通过原点的直线。0.000.050.100.150.200.250.300.000.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.00Minutes0.000.050.100.150.200.250.300.000.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.00Minutes0.000.050.100.150.200.250.300.000.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.00Minutes05010015020025001,0002,0003,0004,0005,000样品浓度响应值峰面积()氯霉素类抗生素的残留检验常用的氯霉素类（CAPs）氯霉素、无味氯霉素、乙酰氯霉素、甲砜霉素、弗甲砜霉素骨髓细胞、肝细胞毒性禁用，不得检出常用的测定方法GC、HPLC、LC-MS、ELISA等气相色谱法原理：样品提取、净化、衍生化，毛细管气相色谱柱分离，电子捕获检测器检测。样品处理：乙氰提取、离心—SPEC18柱净化-衍生化氯霉素类抗生素的残留检验氯霉素类抗生素的残留检验LC-MS法检测（确认检验）原理：乙酸乙酯提取，浓缩后水解，固相萃取柱净化，LC-MS联用检测GB-T22338-2008动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定磺胺类（SAs）兽药残留检验常用的磺胺类兽药磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶对过敏反应者有致敏作用；积蓄有肝肾毒性；还可影响造血系统我国规定残留限量≤0.1mg/kg磺胺类药物结构基本结构为对氨苯磺酰胺，简称磺胺，具有芳氨基和磺酰胺基，多为两性化合物H2NSOONHRsulfonamidebackboneRRR14Hsulfanilamide(SAN)NSsulfathiazole(STZ)NOsulfisozole(SIZ)NOH3CCH3sulfisoxazole(SIX)sulfamethoxazole(SMX)NOCH3NOCH3CH3Sulfatroxazole(STX)NNsulfadiazine(SDZ)NNsulfamerazine(SMR)CH3NNCH3CH3sulfamethazine(SMZ)orsulfadimidine(SDD)NNOCH3sulfamethoxypyridazine(SPMX)NNOCH3sulfameter(SME)NNOCH3sulfamonomethoxine(SMMX)NNH3COOCH3sulfadoxine(SD)Nsulfapyridine(SP)NNOCH3OCH3sulfadimethoxine(SDMX)NNOCH3OCH3sulfadimethoxine(SDMX)磺胺类药物的分子结构磺胺类兽药残留检验HPLC法测定磺胺类兽药残留（最常用）原理：乙腈提取，正己烷萃取除脂，加入正丙醇减压干燥，残留物用乙腈溶解，氧化铝柱净化，加入正丙醇，减压干燥，流动相溶解，HPLC紫外检测器检测。方法说明磺胺类最大吸收λ为260nm~280nm，检测时选用λ=270nm。样品极性较强，70%乙腈的极性要大于95%乙腈，洗脱效果更好。净化时用碱性氧化铝。硝基呋喃类（NFs）兽药残留检验概述硝基呋喃类及其代谢物可使动物癌变和基因突变禁用，在动物性食品和饲料中不得检出常用ELISA、HPLC、LC-MS检测HPLC法测定禽肉中呋喃唑酮原理：样品与C18柱填料研磨，混合装柱，正己烷淋洗，乙酸乙酯洗脱，浓缩，溶解，氧化铝柱净化，检测方法说明基质固相分散技术硝基呋喃类兽药残留检验第三节盐酸克伦特罗残留的检验概述盐酸克伦特罗兽药残留的检验20世纪70年代末,美国等发达国家进行了盐酸克伦特罗实用性开发研究工作,至80年代,盐酸克伦特罗作为饲料添加剂被广泛应用到畜禽生产中。1996年,我国一些大专院校、科研单位研究发现,盐酸克伦特罗对动物具有加强脂肪分解,促进蛋白质合成,实现动物营养再分配,提高胴体瘦肉率,加快动物生长等作用。养猪户在不改变管理模式、不增加饲料投入、不提高蛋白质的前提下,在育肥猪出栏前25～30d投喂盐酸克伦特罗,就能将瘦肉率提高10%,育肥增重提高10%～12%,因此在畜牧业生产中被大量使用。概述概述理化性质Clenbuterol，简称CLB，β-兴奋剂溶解性：易溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。化学性质稳定：瘦肉精化学性质稳定，不易破坏。172℃开始分解，经260℃油煎5min才会破坏减半。口服后在胃肠吸收迅速，10-20min起效，2-3h血液浓度达到峰值，作用维持5h左右，半衰期25-39h，消除5个半衰期（约97%）需5-8d。易在动物眼睛、毛发、肝、肺、肾等组织中蓄积。我国食品中的限量：马、牛肌肉0.1µg/kg，肝、肾0.5µg