岛津LC-10ATvp型高效液相色谱仪标准操作规程

第1页共5页GMP工作标准题目：岛津LC-10ATvp型高效液相色谱仪标准操作规程SOP-QC-2016-01制定人：审核人：批准人：制定日期：审核日期：批准日期：颁发部门：质管部颁发数量：2份执行日期：分发部门：化验室、档案室、OA电子文稿目的：规范岛津LC-10ATvp型高效液相色谱仪的操作使用。范围：岛津LC-10ATvp型高效液相色谱仪。职责：化验人员负责执行，化验室主管负责监督实施。内容：1系统组成：本系统由2个LC-10ATvp溶剂输送泵（分主/A泵和副/B泵）、Rheodyne7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、CTO-10AS柱温箱、CBM双通道数据传送仪、CS-Light色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。2准备2.1准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤（水相用水系膜，有机相用有机膜），超声脱气20min。2.2根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。2.3配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。2.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。3开机：接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器、数据传送仪、柱温箱（有温度要求时开启），待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站，双击CS-LightRealTimeAnalysis1按钮。4.参数设定4.1波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需波长值，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。4.2流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。岛津LC-10Avp型高效液相色谱仪标准操作规程SOP-QC-2016-01第2页共5页4.3流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。4.4梯度设定4.4.1在A泵显示初始屏幕时，按[edit]键，[Enter]键。4.4.2用数字键输入时间，按[Enter]键，重复按[func]键选择所需功能（FLOW设定流速，BCNC设定流动相B的浓度），按[Enter]键，用数字键输入设定值，按[Enter]键。4.4.3重复上一步设定其它时间步骤。4.4.4用数字键输入停止时间，重复按[func]键直至屏幕显示STOP，按[Enter]键。按[CE]键退出。5更换流动相并排气泡5.1将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中。5.2逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀。5.3按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止。5.4将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。5.5如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。5.6如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。6平衡系统6.1按《CS-Light色谱中文数据系统参考手册》打开“在线色谱工作站CS-LightRealTimeAnalysis1按钮”，点击[单次分析]，输入实验信息并设定各项方法参数后，通过放大和缩小功能查看基线。6.2等度洗脱方式6.2.1按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。6.2.2检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。6.2.3观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按5.6操作。6.2.4观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为岛津LC-10Avp型高效液相色谱仪标准操作规程SOP-QC-2016-01第3页共5页系统已达到平衡状态，可以进样。6.3梯度洗脱方式6.3.1以检验方法规定的梯度初始条件，按6.2项下方法平衡系统。6.3.2在进样前运行1-2次空白梯度。方法：按A泵的[run]键，prog.run指示灯亮，梯度程序运行；程序停止时，prog.run指示灯灭。7进样7.1待基线平衡后，按检测器[zero]键调零，点击软件中[CBM调零]校正基线零点，点击[样品记录]填写样品信息，点击[开始]向CBM数据传送仪发出指令，等待进样。7.2用试样溶液清洗进样针，并排除气泡后抽取适量试样液，定量环进样抽取溶液量应远大于定量环的容积（定量环的容积3倍以上），进样阀处于inject状态下，插入进样针，旋转至load状态，注入样品液，再旋转至inject状态完成进样，拔下进样针。8数据处理参见《CS-Light色谱中文数据系统参考手册》。进样结束，数据处理完成后，关闭所有窗口，在主界面下退出系统，关闭软件，再依次关闭电脑主机、显示器、打印机。9清洗系统和关机9.1数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗10min后，换水冲洗。9.2清洗进样阀，用启动注射器吸10ml超纯水，将注射针导入口冲洗头连接到注射器出口上（不要针），并将它们一起接到进样口上使进样阀保持在Inject位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。9.3清洗柱9.3.1C18柱先用超纯水以1ml/min冲洗40min以上，再用甲醇或乙腈冲洗20min。9.3.2使用缓冲盐流动相，用水冲洗柱后，分别用20ml超纯水冲洗柱塞杆外部和法兰盘上小孔。9.3.3清洗完成后，先将流速降到0，再依次关闭泵、UPS，断开电源。9.3.4填写使用记录。10岛津液相色谱仪注意事项10.1流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质（使用0.45um或更细的膜过滤）。10.2流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。10.3不能用纯乙醇作为流动相，这样会使单相阀粘住而导致泵不进液。岛津LC-10Avp型高效液相色谱仪标准操作规程SOP-QC-2016-01第4页共5页10.4使用缓冲液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇（或甲醇水溶液）冲洗染店40分钟以上以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20分钟以上。10.5长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相（如甲醇），因为纯水易长霉。10.6每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。10.7C18柱绝对不能进蛋白样品，血样，生物样品。10.8堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。请洗方法：○1以异丙醇做作溶剂冲洗，○2放在异丙醇中间用超声波清洗○3用10%稀硝酸清洗。10.9气泡会导致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。10.10如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液，通常在输液前要进行流动相的清洗。10.11要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。10.12更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边清洗，然后插入新的流动相中，更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过滤一下。附表1：高效液相色谱仪使用记录岛津LC-10Avp型高效液相色谱仪标准操作规程SOP-QC-2016-01第5页共5页附表1：高效液相色谱仪使用记录SOP-QC-2016-01(1)使用日期被测物名称温度℃湿度%流动相及配比泵压Pa流速（ml/min）柱型号使用时间使用后状态使用人