大黄中大黄素的提取、分离和鉴定

大黄中大黄素的提取、分离与鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握PH梯度提取法的原理和操作技术（3）掌握蒽醌类化合物鉴定方法（4）了解液液萃取法分离混合物的实验方法二、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要有效成分为大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚等蒽醌类化合物,其中大部分为结合的蒽醌,少量为游离的蒽醌。结合的蒽醌类化合物由于其苷元具有酚羟基,故呈弱酸性,能溶于水、乙醇、碳酸氢钠溶液,但在有机溶剂中的溶解度很小。游离的蒽醌易溶于氯仿、乙醚等有机溶剂而不溶于水。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。【1】本实验主要用薄层层析法分离纯化大黄素，其Rf值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。【2】大黄酸：黄色针状结晶mp.321—322℃（升华），不溶于水，能溶于吡啶、碳酸氢钠水溶液，微溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。大黄素：橙黄色针状结晶，mp.256—257℃（乙醇或冰醋酸），能升华。其溶解度如下：四氯化碳0.01%、氯仿0.07%、二硫化碳0.009%、乙醚0.14%、苯0.041%。易溶于乙醇，可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液，几乎不溶于水。【3】OOOHOHR1R2大黄酸R1=HR2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OHR2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H三、实验器材试药：大黄粗粉、20%硫酸溶液、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、硅胶CMC-Na板、石油醚、大黄素标准品等仪器：回流装置一套、烧杯、层析槽、试管、梨形分液漏斗、水浴锅、电热套、旋转蒸发仪循环水式多用真空泵、抽滤瓶、铁架台等四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉30g【4】20%H2SO4150ml加热1h,抽滤、干燥滤饼乙酸乙酯回流提取1h乙酸乙酯层5%NaHCO3萃取水层（紫红色）乙酸乙酯层5%Na2CO3水层（红色）乙酸乙酯层（弃掉）HCl黄色沉淀（粗品）水洗至中性，丙酮溶解，分离纯化大黄素结晶具体操作步骤：1.游离蒽醌的提取称取大黄粗粉30g，加20%H2SO4水溶液150mL，加热1小时，放冷，抽滤，同时滤饼水洗至近中性（除去H2SO4），于70℃干燥后，置回流装置中，加入乙酸乙酯300mL回流提取1小时，得到乙酸乙酯提取液。2.PH梯度萃取分离（1）将乙酸乙酯提取液加入分液漏斗中，用5%NaHCO3水溶液萃取三次，经观察乙酸乙酯层颜色变浅及无气泡产生为止。（2）经5%NaHCO3水溶液萃取后的乙酸乙酯层，继以5%Na2CO3水溶液萃取三次，乙酸乙酯层经薄层检查(标准大黄素作对照)，得知已提尽大黄素后，合并三次Na2CO3萃取液，并用HCl酸化，得大黄素沉淀。（注意:加酸时应缓慢加入，以防酸液溢出）。3.大黄素的精制过滤大黄素沉淀，水洗沉淀物至洗出液呈中性，用适量丙酮溶解，用自备薄层色谱分离纯化大黄素。薄层层析板上橙色层为大黄素，将其刮下溶于丙酮中。【2】用旋转蒸发仪浓缩丙酮溶液，得到大黄素结晶。4.大黄素的薄层色谱检识【5】薄层板：硅胶CMC-Na板样品液：自制大黄素溶液对照品：标准大黄素溶液展开剂：石油醚-乙酸乙酯（7：3）显色：观察斑点颜色及计算Rf值五、注意事项：（1)游离蒽醌的提取要控制温度，不宜太高（2)PH梯度萃取分离时，要检查是否萃取完全（3)注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。六、参考文献【1】黄兆胜，王宗伟。大黄素基原及药理作用研究｛J｝。国外医学中医中药分册，1997，19，9【2】康廷国主编，《中成药薄层色谱鉴别》.北京：人民出版社，1995【3】徐选明，刘新大黄中大黄素提取工艺的优化中国中医药信息杂志2004，11，5【4】李乃明，丁宙大黄素的分离和结构鉴定广州医学院学报1985，13，3【5】朱庆玲，李瑞和大黄中大黄素的提取工艺研究时珍国医国药2006，17，3