液相色谱检测器的介绍-实验室

1/32液相色谱检测器的介绍2/32检测器•是高效液相色谱仪的核心部件，他负责把色谱柱分离出来的各组分快速、准确的检测出来，实行定量、定性分析。3/32检测器的分类1.紫外检测器(UV)2.光电二极管阵列检测器(PDA)3.荧光检测器(FD)4.示差检测器(RI)5.蒸发光散射检测器(ELSD)6.纳克级激光计数检测器（NQAD）4/32用于HPLC的检测器•没有任何一种单独的检测器可以适应所有的液相色谱分离！HPLC检测器可以分为：•溶质性质检测器（选择型）–对溶质的物理或化学性质响应，一般不反应流动相的变化（选择型）•整体性质检测器（通用型）–不管是否有溶质，对流动相任何物理性质的变化作出响应（通用型）5/32理想的HPLC检测器•高灵敏度；可忽略的基线噪音•宽的线性范围•独立于流动相及操作参数的响应–对压力、温度及流速等变化不敏感•长时间操作的稳定性•低死体积•非破坏性•选择性6/32灵敏度：信噪比•灵敏度是信号与噪音的比值；即峰高与基线噪音的比值（S/N）•检测限（LOD）：S/N=3•定量限（LOQ）：S/N=10•好的信噪比有利于：–更好的色谱峰确认–更好的定量–更好地完成色谱峰纯度/均一性6:1NS7/32选择液相色谱的检测器要考虑的因素：•你要分离的化合物/样品的化学特性–化学结构、分子量及紫外光谱等等•流动相的影响（溶剂、缓冲盐改性剂等）•梯度还是等度•灵敏度需求•是否有双检测的需求8/32紫外可见吸收检测器•紫外可见吸收检测器是HPLC分析中最常见的检测器，几乎所有的液相仪器都配有这种检测器，属于选择性检测器9/32紫外检测原理原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收优点：1）对温度和流速不敏感2）可用于梯度洗脱3）灵敏度较高，ng级检测4）费用相对低廉5）易于操作，可靠性强缺点：选择性检测器，仅适用于测定有紫外吸收的物质10/32紫外检测的应用大多数有机化合物有一定程度的吸光度，可以测定大多数的化合物，是目前实验室中使用最多的检测器--多数公司售出的检测器中75%以上是吸光度检测器（其中50%以上是紫外/可见检测器，25%是PDA）11/32光电二极管阵列检测器（PhotoDiodeArray）PhotoDiodeArray简称：PDA或DAD12/32原理：检测器的接收是由一组光电二极管（数量由35-1024个不等）接收，并转换为电信号。光电二极管的排列（数字分辨）和狭缝宽度（光学分析）决定了检测器的全波长分析能力。光电二极管阵列检测器原理13/32光电二极管阵列检测器特点一种三维水平的吸光度检测器--采集三维谱图兼顾紫外检测器及可见分光光度计的信息在收集色谱图的同时，得到光谱图提供许多有用的功能-色谱峰的纯度鉴定，色谱峰的确认-可以发现单波长检测时未测到的峰-任意波长的色谱再处理-光谱信息-光谱库的建立检索和拟合14/32优点：灵敏度比紫外检测器高，噪音低，线性范围宽，对流速和温度的波动不灵敏，适用于梯度洗脱及制备色谱局限：对紫外吸收差的化合物灵敏度很低，紫外吸收大的溶剂不能做流动相15/32新增PDA检测器原PDAPDA85池光路长50mm85mm池容量10uL9uL16/32灵敏度更高！17/32通信相关网线连接：设置相对应IP地址35900E:PDA信号通过35900E传送给电脑操作软件：EzchromforShiseidoOpenLABEEPDA18/32荧光（Fluorescence）检测原理原理：发荧光的化合物吸收光（UV或VIS）使其分子达到激发态，当其返回到基态时发射光的现象即荧光优点：1）荧光检测器灵敏度高,pg级检测2）受流速温度变化影响较小缺点：1）不是所有化合物都有荧光，必要时需要衍生2）线性范围窄3）衍生方法复杂19/32荧光检测器的应用环境中的污染物–多环芳烃(PAH)，多酚，氨基甲酸酯等食品、饮料–食品中的毒素；例如：黄曲霉毒素–染料–维生素及衍生氨基酸生物技术及制药氨基甲酸酯类杀虫剂OOOOOOCH3黄曲霉毒素多环芳烃（PAH）OHCH3CH3CH3CH3CH3维生素OOONHCH3CH3CH320/32示差折光（RefractiveIndex）检测•示差折光检测器（RI）是第一个商品化的液相色谱检测器（上世纪六十年代末、七十年代初）–通常被认为是一种通用检测器–检测溶液中所有被溶解的溶质－非特异性•任何光学介质的折光率都被定义为光在该介质中与真空中的速度之比值RS21/32示差折光（RI）检测的原理原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样各组分浓度。优点：通用型检测器缺点：1）对温度压力变化敏感2）不能用于梯度检测3）灵敏度低，ug级检测4）平衡时间长22/32示差检测器的应用示差折光检测器是通用型检测器,如果选择合适的溶剂，几乎所有的物质都可以检测特别适用于检测没有紫外吸收的化合物,例如糖类,醇类,酯类以及脂肪酸等高分子化合物GPC,GFC分析以及复杂样品纯化26/32Corona电喷雾检测器（Corona®CAD®：Corona®ChargedAerosolDetector®）加不挥发性物质的微粒子正电，检测带正电的粒子。所有的物质灵敏度基本都一样。灵敏度，比ELSD高一些。动态检测范围宽信号响应一致27/32Corona电喷雾检测器和蒸发光散射检测器•使用目的基本相同。价格也差不多（30-40万RMB).•不太适合对天然物质和生物样品的分析（选择性不够）。•适合对化学产品的纯度分析等，尤其是工业上的应用。28/32新的通用型检测器（NanoQuantityAnalyteDetector）纳克级（水凝粒子）激光计数检测器一般来说，选泽性和灵敏度是检测器最重要的两个要素。NQAD是通用型、高灵敏度检测器，适用于几乎所有物质（挥发性物质除外）的检测。FLECDUV(PDA)MS适用于：1)没有紫外吸收的物质2)离子化比较难的物质3)没有电化学活性的物质4)性质不明的物质等能够检测所有不挥发性及半挥发性物质ng级的高灵敏度从ng到µg，宽的动态响应范围使用干燥空气，更加环保操作简便、外观设计更加紧凑29/32的检测原理検出凝縮喷雾汽化使用空气（或氮气）通过雾化器进行喷雾。流动相和其他挥发性成分在蒸发器中汽化剩下的不挥发、难挥发物质颗粒进入到WCPC。在水蒸气饱和环境下，以该颗粒为核，水分凝聚体生成，并长大到微米水平。激光计数器计数水分凝聚体。核物质的性质对灵敏度影响不大，信号响应基本只与质量浓度相关。（Water-basedCondensationParticleCounter）（水凝聚粒子计数器）30/32检测凝结喷雾汽化检测荷电喷雾汽化检测喷雾汽化激光电散射与同类（气溶胶型）检测器的比较---原理直接计数粒子CAD检测粒子的电荷量（电雾式检测器）ELSD检测粒子造成的光散射量（蒸发光散射检测器）31/32LC上广泛使用的各种检测器与NQAD的比较对于没有紫外吸收的化合物，通常使用示差折光检测器（RI）来进行检测。RI的优点是不需要优化条件就可以直接进行测定，但却不能进行梯度分析，灵敏度也比较低。使用质谱(MS)可以解决这些问题，并且能够获得更多的信息，具有更高的选择性，但成本也颇高。除了以上两种方法，对于没有紫外吸收的物质，也可以使用蒸发光散射检测器（ELSD）来进行检测。而NQAD与ELSD非常相似，但却具有更高的灵敏度。各种检测器的特长详见下表。对无紫外吸收物质的适用性灵敏度梯度分析检测选择性经济性UV不适用★★★★★★★★★★★★★★★★MS★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★RI★★★★★★★不可无*注★★★★ELSD★★★★★★★★★★★★★无*注★★★NQAD★★★★★★★★★★★★★★无*注★★★32/32TheENDThankYou!