【2019年整理】生物安全作业指导书

文件编号：**CADC/PGC-01-2010～**CADC/PGC-11-2010实验室生物安全作业指导书（第1版）编制人：审核人：批准人：受控状态：□受控□非受控发放/受控编号：持有人：2010年1月6日发布2010年1月20日实施*****疫病预防控制中心修订表版号规程号修订次序修订内容批准日期目录**CADC/PGC-01-2010实验室个人防护装备的总体要求.................................................................1**CADC/PGC-02-2010个人防护装备的穿戴和检查方法.................................................................3**CADC/PGC-03-2010实验室人员进出实验室的规程.....................................................................5**CADC/PGC-04-2010样品采集规程.................................................................................................6**CADC/PGC-05-2010样品包装和运送作业指导书.......................................................................10**CADC/PGC-06-2010电气设备作业指导书...................................................................................12**CADC/PGC-07-2010消毒剂配制作业指导书...............................................................................13**CADC/PGC-08-2010无菌室使用作业指导书...............................................................................15**CADC/PGC-09-2010实验室废弃物处理规程...............................................................................17**CADC/PGC-10-2010实验室意外事故处理规程...........................................................................19**CADC/PGC-11-2010生物安全实验室标识设置规程...................................................................20**CADC/PGC-01-2010实验室个人防护装备的总体要求1目的个人防护装备是减少操作人员暴露于气溶胶、喷溅物以及意外接种等危险的一个屏障。为了实验人员的安全，以保证实验室人员的安全及实验室环境不被污染。2适用范围适用于生物安全实验室选用个人防护装备（防护口罩、防护手套、防护服与防护鞋）的质量控制。3职责办公室组织有关人员采购符合要求的个人防护装备，并且严格控制其质量。4过程要求实验室所用的个人防护装备应符合国家标准GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》。在生物因子危害评估的基础上，按不同级别的防护要求选择适当的个人防护装备。4.1防护口罩根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》、GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》、《医用防护口罩技术要求》，生物安全实验室选用P2级的防护口罩，必须满足GB19083-2003以下条件：（1）长方形口罩展开后中心部分尺寸：长度不小于17cm、宽度不小于17cm；密合型拱形口罩尺寸：横径不小于14cm，纵径不小于14cm。（2）口罩表面不得有破洞、污渍；口罩带应调节方便，应有足够强度固定口罩位置。每根口罩带与口罩体连接点的断裂强力应不小于10N。（3）口罩滤料的颗粒过滤效率应不小于95％；经环氧乙烷灭菌的口罩，其环氧乙烷残留量应不超过10μg/g；不能从防护口罩中检出致病菌；口罩对皮肤无刺激。4.2防护手套实验室防护手套选择用国内生产的一次性乳胶手套和耐酸碱手套。技术要求见国标GB7543-1996。4.3防护鞋及鞋套防护鞋应该选择耐磨、防滑和舒适的合成材料制成的鞋类。鞋套应为塑料材质制成，可防水、要求一次性使用。4.4防护服BSL-2实验室试验操作人员的防护服装主要选择一次性的连体防护服，通常选用国内厂商合格的防护服。上下连体式，宜连鞋帽，无口袋、无横褶、腰带、接缝封缝、光洁。发尘量小、不易发生纤维剥落、断丝；不易产生静电和粘附粒子；耐有机溶剂，透明度低、柔软、舒适、不妨碍动作。**CADC/PGC-02-2010个人防护装备的穿戴和检查方法1目的正确穿戴和检查个人防护装备，才能有效保障实验人员的安全。2适用范围适用于生物安全实验室选用的个人防护装备，如：口罩、手套、防护服、帽子、护目镜和防毒面具等的使用。3职责各科室负责人负责培训实验室人员正确使用个人防护装备，并监督检查。4过程要求4.1手套4.1.1检查方法。打开手套口，让空气进入，用手捏紧手套口，使掌部和指头鼓起，检查手套是否泄漏。4.1.2穿脱方法。干燥手，先搓一下手套，让其蓬松，以便穿戴。在撕破、损坏或怀疑内部受污染时更换手套。脱手套前先用消毒液消毒手套，然后一手捏住另一手的手掌部位往外拉，使污染的部分包在里面，手套还未完全脱下时用同样方法脱下另一只手套。4.2口罩4.2.1检查方法。选择合适的口罩，检查是否破损，是否清洁。4.2.2穿脱方法。按要求穿脱，用手捏一下鼻部，使其紧贴皮肤，以防漏气。4.3帽子4.3.1检查方法。选择合适的帽子，检查是否破损。4.3.2穿脱方法。将所有头发包在帽子里，然后用手紧一下帽子，以防松动。4.4防护服4.4.1检查方法。选择合身的防护服，检查是否破损。4.4.2穿脱方法。穿戴时先穿裤子，后穿上衣，且用力小心，不要弄破衣服。实验完毕后，先脱上衣，后脱裤子。脱衣时抓住上衣衣边往上拉，从头部钻出，使污染风险大的一面在里面。连体防护服穿戴时，注意先穿裤子，后穿上衣。实验完后，先脱上衣，后脱裤子，脱上衣时抓住上衣衣边往上拉，从头部钻出。4.5护目镜4.5.1检查方法。检查松紧带是否失效，镜片是否破损和清洁。4.5.2穿脱方法。戴护目镜时，要压一下鼻部，防止鼻孔的气流进入护目镜里，以免产生湿气致使镜面模糊。4.6防毒面具4.6.1检查方法。检查是否破损，注意定期清洁，及时清除污染，存放在清洁卫生处。4.6.2穿脱方法。选择合体面具，戴面具前，先安装好过滤盒，将进气口的胶片撕去，以便呼吸顺畅。调整好松紧带，使面具周围的胶圈与面部相吻合，防止漏气。**CADC/PGC-03-2010实验室人员进出实验室的规程1目的制定BSL-2实验室人员进出的标准操作程序，保障实验室生物安全。2适用范围适用于BSL-2实验室人员进出程序。3职责实验室工作人员执行本程序的规定。各科室负责人负责监督执行。4规程要求4.1进入程序4.1.1实验室人员需将外衣挂在办公区内，避免将外衣与工作服混放。4.1.2实验室人员进入实验室前须佩戴胸卡（上岗证）。4.1.3人员进入BSL-2实验室前，应在更衣区脱掉自已所穿鞋，放入外侧鞋柜内，转向内侧，从内侧鞋柜取出工作鞋换上。4.1.4实验室工作人员进入更衣区，穿上医用白大褂或连体工作服。4.1.5按要求戴手套，口罩等防护用品。4.2退出程序4.2.1试验结束后，实验室工作人员在实验室脱掉一次性口罩和一次性乳胶手套，先用0.5%新洁尔灭或医用酒精对手进行消毒，再用消毒肥皂洗手。4.2.2在更衣区脱下医用白大褂，脱掉工作鞋，放入内侧鞋柜，转向外侧，从外侧鞋柜中取出自己所穿鞋。同时打开实验室及更衣区的紫外灯进行紫外消毒。4.2.3实验室工作人员退出实验室后，将BSL-2实验室入口门关好，离开实验室。**CADC/PGC-04-2010样品采集规程1目的为保障检测实验的顺利进行，规范采样程序，防止病原微生物在采样过程中产生污染。2适用范围适用于实验室样品的采集。3职责3.1采集检测样品的工作人员在采集过程中应当防止病原扩散，并对样本的来源、采集过程和处理方法等作详细记录。3.2检验人员必须严格按照本操作规程操作，不可擅自做出超出本规程的操作，所有实验人员对所从事的工作负相应的责任。4过程要求4.1工作要求采集和处理检测样品应当具备下列条件：4.1.1具有采集、处理样品所需要的生物安全防护设备；4.1.2具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员；4.1.3具有有效的防止病原扩散的措施；4.1.4具有保证检测样品质量的技术方法和手段。4.2实验材料准备灭菌的解剖器械（剪刀、镊子、手术刀、大刀、斧头等）、灭菌试管、平皿或自封袋、载玻片、棉签、营养肉汤、30%、50%甘油盐水缓冲液、加抗生素的PBS（病毒保存液）、50％甘油磷酸盐缓冲液、酒精灯、灭菌注射器、15mL的离心管、1.5mLEP管、记号笔、签字笔、防护服、无粉乳胶手套、防护口罩、铅笔、空白标签纸、胶布、75%酒精棉球、碘酒棉球、冰袋、冷藏容器、消毒药品、采样单等。4.3活畜样品的采集4.3.1血清样品的采集4.3.1.1采血方法以碘酊或75%的酒精，对采血部位的皮肤剃（拔）毛消毒，或直接逆毛消毒，待干燥后采血。采血方法推行生猪站立式前腔静脉、牛羊站立式颈静脉、禽类翅静脉采血，采血过程严格无菌。4.3.1.2采血数量单一病种抗体监测的每头（只）采血量为2～3mL，多病种抗体检测的每头（只）采血量为5～10mL。4.3.1.3血清分离采集好的血液转入试管，斜面放置，室温凝固后直接放在盛有冰块的保温箱，送实验室。从血液采出到血清分出的时间不超过10h。在室温凝固全血2～4h后，有血清析出时，用无菌针剥离血凝块，然后放入4℃冰箱4～8h后，待大量血清析出时，吸出血清。必要时经离心机3000rpm、30min离心，吸出血清。分离的血清，一般不加防腐剂。血清若在1～2周内即可检验，可放在4℃冰箱内保存；如果保存时间较长，应放在-20℃～-80℃冰箱内保存。运送血清时可将血清放在盛有冰块的保温箱中运送。4.3.2全血样品的采集血液采集后应直接注入盛有抗凝剂的试管中，立即摇动，充分混合。4.4活禽样品的采集咽喉拭子的采集：将棉签插入喉头及上颚裂处来回刮3～5次取咽喉分泌液。泄殖腔拭子的采集：将棉签插入泄殖腔转2～3圈并沾取少量粪便。将咽喉拭子、泄殖腔拭子一并放入盛有0.8～1.0mL加有抗生素PBS的EP管中，加盖，编号。4.5病死（屠宰）畜禽样品的采集4.5.1解剖前检查急性死亡的牛、羊、猪、马等动物，解剖之前应作临床检查，疑似炭疽病的应采血、镜检。排除炭疽病时，方可解剖。动物死亡后应在6h内进行剖检。解剖人员要做好自我防护工作。4.5.2肝、脾、肾、淋巴结、肺和牛、马心脏样品的采集在肝、脾、肾、淋巴结、肺和牛、马心脏有病变的部位各采取2～3cm3的小方块，分别置于灭菌的试管或平皿中。其他畜禽采集整个心脏，置于自封袋中。细菌分离样品的采集可用烧红的刀片烫烙脏器表面，在烧烙部位刺一孔，用灭菌后的铂金耳伸入孔内，取少量组织或液体，作涂片镜检或划线接种于适宜的培养基上。4.5.3脑、脊髓样品的采集取脑、脊髓2～3cm3浸入50%甘油盐水中或将整个头部（猪、牛、马除外）割下，用消毒纱布包裹，置于不漏水的容器中。4.5.4肠、肠内容物及粪便样品的采集肠样品的采集：选择病变最严重的部分，将其中的内容物弃去，用灭菌的生理盐水轻轻冲洗后，置于试