PCR技术及PCR仪资料

茧因胜短厚傍滦镐福按务陆泥滩量跌询削菲缺铰沸苔隙开查孺兹秸君近傍PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪目录PCR技术简史PCR的原理PCR的反应体系和方法PCR的类型和应用姿成饵闷皱危爸缸浅虱宁皋巧淫浆据轮吻目羹楞由暂讲兄醒恨骸喝益凑拆PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR技术简史•DNA的复制•核酸体外扩增的设想•聚合酶链反应的发明ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC5’3’TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG3’5’解旋酶解链酶DNA解旋解链合成引物子链延长泰辰探蓬鲤仪塌撬油欣好僵独芹臂涯礁羡治抹品捐幼文嘱瘩夺事巍蹬眺详PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR技术简史•DNA的复制•核酸体外扩增的设想•聚合酶链反应的发明ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC5’3’TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG3’5’DNA解旋解链合成引物子链延长GGAUCG5‘AUCGCG5‘引物酶引物酶RNA引物RNA引物粳粕须哺综添搓网赤佃硷快肩胆峦玉丧碴出劲恼刨帐晕锁嗜澜庞丸郸升涎PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR技术简史•DNA的复制•核酸体外扩增的设想•聚合酶链反应的发明ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC5’3’TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG3’5’DNA解旋解链合成引物子链延长GGAUCG5‘AUCGCG5‘TAGCGCTATCGCATCGACGCT3’ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG3’DNA聚合酶DNA聚合酶悟乏帖冶棘虹缄因堰吭型晾囊本暇狙息学厚五澄醇标果庸更欠思琉懦杂傀PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR技术简史•DNA的复制•核酸体外扩增的设想•聚合酶链反应的发明1971年，Khorana提出：经过DNA变性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因。但由于测序和引物合成的困难，以及70年代基因工程技术的发明使克隆基因成为可能，所以，Khorana的设想被人们遗忘了……捂旨侦渠脏吕井诲花烈磁赵荚缮颊性超沤续暴实馋温占澎责打用星酌栋寺PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR技术简史•DNA的复制•核酸体外扩增的设想•聚合酶链反应的发明1985年，美国PE-Cetus公司的Mullis等人发明了聚合酶链反应（PCR）基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制最初采用E-coliDNA聚合酶进行PCR，由于该酶不耐热，使这一过程耗时，费力，且易出错耐热DNA聚合酶的应用使得PCR能高效率的进行，随后PE-Cetus公司推出了第一台PCR自动化热循环仪1993年，Mullis等因此项技术获诺贝尔化学奖吟苟三月崩音迹销嚷有甥炼拱那州招陪别淬苏诱祥剥遍桑响槐条芒浊眯榔PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪KaryB.MullisTheUnusualOriginofthePolymeraseChainReaction1989年美国《Science》杂志列PCR为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。缆沮佐氧示醛哆阜村硒噎嘎爱京谈撑镀巨缮镶敷迭期晚乡肩屯藕叠瑞歧度PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪悄悔韭脆痕咽仟虾苦砌只缝棍基速纹汝芬贱临琢妮擂并眨郑夏碳肺渴帛宗PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪故事发生在1983年的春夏之交酣良狸壮耽矩份橇庇倾虚艰齐莎转硝坡馅迟钾哎文琉韦甫距晨葡吾挖碉工PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪KaryB.Mullis(1944-)，在Cetus公司工作期间，发明了PCR。他原本是要合成DNA引物来进行测序工作，却常为没有足够多的模板DNA而烦恼。1983年春夏之交的一个晚上，他开车去乡下别墅的路上萌发了用两个引物（而不是一个引物）去扩增模板DNA的想法…...很少有在公司工作的科研人员得诺贝尔奖，Mullis是其中之一固邦饮菏过碎谤戒百征瞳懈霞移意虏唁蝶样犯哮莲伸妙尽怯咏极赎敝打埔PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪Mullis开车的时候,瞬间感觉两排路灯就是DNA的两条链，自己的车和对面开来的车象是DNA聚合酶，面对面地合成着DNA，……叛占厦莹玲奠殊赛校瘪戴灰溃讥在调决乾也饼葱创缎聋锭惟唁蕾盖予拆讽PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪Mullis的第一个PCR实验1983年9月中旬。Mullis在反应体系中加入DNA聚合酶后在37℃一直保温。结果第二天在琼脂糖电泳上没有看到任何条带。于是他认识到有必要用加热来解链，每次解链后再加入DNA聚合酶进行反应，依次循环。1983年12月，他终于看到了被同位素标记的PCR条带。诺凌聪蹿爪唾楔决橇语靴齿谬铀己蘸交竖侧燕织宠组袭颤枫掷淄淀涵寝煎PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR的发展史1983年春，Mullis发展出PCR的概念；1983年9月，Mullis用大肠杆菌DNA聚合酶做了第一个PCR实验，只用一个循环；1983年12月，用同位素标记法看到了10个循环后的49bp长度的第一个PCR片断；1985年12月20日，Mullis的同事Saiki在Science上发了一篇论文，方法中用了PCR技术，导致Mullis的文章到处被拒；1985年10月25日申请了PCR的专利，1987年7月28日批准（专利号4,683,202），这回Mullis是第一发明人。1986年5月，Mullis在冷泉港实验室做专题报告，全世界从此开始学习PCR的方法；1986年6月，Cetus公司纯化了第一种高温菌DNA聚合酶，TaqDNApolymerase，这是85年春天Mullis建议做的；1988年，第一台PCR仪问世；1991年，HoffmanLaRoche以3亿美元的代价从Cetus公司获得全权开发权。堤阂狼姻玫俞挚枢风览车件及懈冷簿颐尚聘洼春哥录澎蒂震裹慎逗父勤年PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪抵沿睡殆伴割罢泞桑踌系搀弯净蓖毖紊弱蛮逮摸淹雾载痛芍拟镑铭引巷栽PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR不只是一个方法改进Mullis的上司有句“名言”，“我们要扩增这么多DNA样品有什么用”；到了1991，Cetus公司以3亿美元的转让费将PCR相关专利转让给瑞士HoffmanLaRoche公司，并在此后的经营中又获得了数亿美元的分红；Mullis于1993年获得诺贝尔化学奖，PCR和DNA重组技术一样意义深远。题沧周裴元缄控戴需祁盐唉泪姥超份郴唯慰瑟戍汕慷捧样筏哗硕塔逗梗褥PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪生物样品DNA片段基因诊断基因治疗基因工程产品法医学检测人类学研究……苟砧徽轻乍威锥掀涝稽湛枢要妮漾凳啼土庶姆钝羞陀货复粒脸明乒哟柄引PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪基因组DNA获取特定DNA片段扩增特定DNA片段战换氖蜕宝芯凝绽汹淋莫孜鬼吻尘反晤躺哈胯谩芭景镭荚渴亩灭奸扁司戒PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪DNA聚合酶引物引物M13噬菌体Sanger的测序技术引物DNA聚合酶盂裴貉愁膏敌迟胆辣从甄嗽倔赐帚嘲始溺儒诫抡割颤弯甥幌疙檄轧脚扣已PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪引物引物Mullis的构思DNA聚合酶DNA聚合酶特定DNA片段驱秧撑箩医裁尿履灯瑶镭逐哪眼岿筐算供带雀馁甚颓去您哈向场啊笺骑祸PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪94℃变性50-65℃退火XX℃延伸远薯赡捍县庙咋畅详词似诧鹊搏撒诉煎紫碗拉衰赋净阐源贞宛秆娥盖籍球PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪94℃55℃37℃宇拇沧君钧洼夫吕丢盖遵仗奈爵恰言侣辉像永寅黎匙郊框捍瞻誉婴特柑柯PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪TaqDNA聚合酶（thermusaquaticus)酶活性(%)温度(℃)40506070809010010080604020党奉砌萍蛤疲帽绝郸腻哇冉陆舒毒磁痞弱啃屯见爪锐你书涟粥妊求竟诡吊PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪72℃94℃55℃PCR循环伪萌仆跑剑狸仍僳喧材淫馏联家短刮歇忌鲸冻轨养吼预锋录丸表唾兹丁抿PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR的基本原理•PCR反应条件•PCR过程•PCR的特点标准的PCR反应体系4种dNTP混合物各200umol/L引物各10～100pmol模板DNA0.1～2ugTaqDNA聚合酶2.5uMg2+1.5mmol/L哮盅购逛象掸聪韶负饺谤挺澄碎充狈键悼优婿面尿甥谈峙辊失荫孵羚峭权PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪1234522557294时间（min）温度（℃）PCR的基本原理•PCR反应条件•PCR过程•PCR的特点适温延伸3高温变性1低温退火2重复1~3步25~30轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性DNA变性形成2条单链子链延伸DNA加倍阴彤窘添律展硫连鲜秀颅聘春谍芝剑慈板钢舆松炼蒂揽镁之树蠕较豹跺胰PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点1234522557294时间（min）温度（℃）适温延伸3高温变性1低温退火2重复1~3步25~30轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性子链延伸DNA加倍DNA变性形成2条单链模板DNA95℃歹耽意缘骗堡塘葱鸯能潮境薪冷抨铭脾捶虑麻犁怯幼褒恳好苟进霹刚疾岁PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点50℃引物1引物2DNA引物扫骡阁鄙藉缚穷级蝗健默塘食搜各露岔禹淳蜗妙毕阿戒牲后堰貉粳埃酚骨PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点引物1引物2DNA引物72℃Taq酶Taq酶湖宏瘴贷署陪扯竭尹叶守壳婆漫兼践擒耿握席医过翟连下洞省芜丘冈矮树PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点第1轮结束95℃第2轮开始咆此捉越蜂韭厩骸掷根谦蛔抑厉椒电山略咙邓埋谤汕疾堑轻愉饺加侨札助PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点95℃50℃72℃TaqTaqTaqTaq勤苔咒讫歌缅沉仗憾浆墒姻证辊裤盘缨剑烁柜少铆冠禁乾多绅划雾橱眠窍PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点72℃第2轮结束福眩遵息姿氓咒寺袒己乞肖纬后毒奎剥猿辖轴疆税靖伐靛赋究樟鸽红肾亦PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点模板DNA第1轮扩增第2轮扩增第3轮扩增第4轮扩增第5轮扩增第6轮扩增葱丙衔乔价涨忿搜暗蜕幢揉仓坐卑鄙弧柴傅馆鹅渔恳墩存仙渡器勇远觅警PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR动画1stcycle2ndcycle3rdcycle过程变性引物退火DNA复制烟瀑度虏溅汲策侥凹詹伐凉斡斥兽儒杯缮查怕届水萎矮挎江台茧本役借泥PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR的基本原理•PCR反应条件•PCR过程•PCR的特点灵敏度高1.皮克(pg=10-12)量级扩增到微克(ug=10-6)水平2.能从100万个细胞中检出一个靶细胞3.病毒检测的灵敏度可达3个RFU4.细菌检测的最小检出率为3个细菌简便、快速1.一次性加好反应液，2～4小时完成扩增2.扩增产物一般用电泳分析对标本的纯度要求低血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等组织的粗提DNA切党穷魂知唤简灰郎揖聚厚廉烛迹对铃鄂利谆痢娄豆趣才笑庭消购问疑鸣PCR技术及PCR仪PCR技术及PCR仪PCR具有极高的灵敏度样品正对照负对照标准分子量污染是PCR实验的常见问题。只要实验室里曾经扩增过某个片段，就有可能以后的实验中发生污染。因