中药作为兽用疫苗佐剂的应用

用于Toll样受体（TLR），通过一系列作用元件，从而启动干扰素IFNα/β的表达。该过程的一个显著特点是在病毒感染后的迅速表达，尤其双链RNA感染后特别明显，在其他病毒感染后也会有同样的干扰素表达，但产生速度较双链RNA稍慢。I类干扰素具有相同的细胞受体（IFNAR），当IFNα/β分泌表达至细胞外后与细胞受体结合，激活JAK-STAT通路，诱导相关抗病毒及免疫调节因子的表达，从而发挥生物学活性。IFNα/β与受体结合后，IFNAR-1和IFNAR-2的胞内区与TYK2和JAK1激酶相互作用，通过TYK2和JAK1激酶磷酸化而被激活，并把信号传递给磷酸化的STAT1和STAT2，随后STAT1和STAT2形成二聚体并进入细胞核，与IRF9结合形成转录因子复合物（ISGF3），ISGF3再与干扰素刺激反应元件(ISRE)共同结合到干扰素激活相关因子的启动子，激活干扰素相关因子的转录。3干扰素生物学活性在哺乳动物，干扰素具有抗病毒、抑制细胞增殖、免疫调节等多种生物学活性，它是机体防御系统中出现最早的细胞因子，并通过激活其他细胞因子的分泌表达，发挥其生物学活性。并且产生迅速，几乎作用于病毒复制的整个过程。目前研究最多的就是干扰素抗病毒作用。早在1994年，Muller用敲除IFNα和IFNβ受体的小鼠做实验时就发现，被敲除I类干扰素受体后的小鼠更易受到病毒的侵袭，2000年，有学者发现敲除IFNβ基因的小鼠对牛痘病毒易感性增加,证实干扰素具有抗病毒作用。随后，通过研究证明，干扰素并不是直接杀死病毒，而是通过诱导相关蛋白起到杀灭病毒的作用，其中，最重要的抗病毒蛋白就是蛋白激酶(PKR),寡腺苷酸合成酶（OAS）和Mx蛋白。调节机体免疫系统，提高抗肿瘤水平。干扰素能够使T、B淋巴细胞功能增强，激活自然杀伤细胞的活性，同时调动体液免疫使特异性和非特异性抗体迅速产生达到免疫保护水平，导致肿瘤细胞迅速破坏和减少，大大增强机体的细胞免疫功能。4猪用干扰素临床应用随着分子生物学的不断进步，在动物体上应用干扰素治疗病毒病的案例不断增多，尤其是作为我国主要养殖业的猪。近几年，随着5号病、高热病、病毒性腹泻、伪狂犬等的不断变异、返强！我国的养殖行业受疫情影响越来越严重，而针对病毒性疾病的快速治疗药物几乎为零。干扰素，尤其是I类干扰素杀灭病毒和II类干扰素提高免疫力的作用，可有效填补这个空白。在我国，年存栏4000多万头母猪，年出栏近7亿头肥猪的高密度养殖环境下，疾病尤其是病毒病的感染压力依然严峻，在未来几年病毒病仍然是困扰我们养殖业的一个肿大隐患。因此，在消除猪群亚健康，保证猪群、猪体健康的情况下，有效的免疫接种配合干扰素的预防治疗将成为净化病毒病的首选。■（编辑：狄慧）近年来，各种动物疾病的流行出现了一些新的特点，老的疫病临床症状非典型化、混合感染继发感染增多，一种疾病入侵打开机体门户、破坏免疫系统，其他疾病一哄而上，诱发更多疾病。源于2000多年前的《黄帝内经》提出“治未病”的理论基础，同样对于中兽医也十分适用，加强疾病预防措施成为养殖业健康发展的头等大事。疾病预防分为饲养管理、环境卫生、以及免疫接种等方面，疫苗接种为规模化养殖场的必修功课，而接种时间、接种部位、接种剂量、疫苗质量剂型等对免疫接种效果均有影响。早期疫苗追求免疫效果而对动物机体伤害较大、部分疫苗接种部位肿胀甚至坏死，应激反应较中药作为兽用疫苗佐剂的应用步帆，张凤强，秦立鑫（哈药集团生物疫苗有限公司黑龙江哈尔滨150069）安全用药doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2015.06.011ChaoXing安全用药多、发热、食欲不振现象时常出现。随着研究的发展，多肽疫苗、基因重组疫苗等不断问世，此类疫苗解决了传统疫苗存在的弊端、安全性更好。但由于抗原纯度高、分子量小、免疫原性相对减弱，需要协同免疫增强剂共同使用以增强效果。免疫增强剂即佐剂是疫苗制备过程中常用的一种物质，20世纪20年代发现氢氧化铝具有刺激机体免疫系统、增强免疫能力的效果，20世纪50年代，铝胶佐剂就被广泛的使用在人类的疫苗当中了，现在在美国仍然是容许使用的佐剂。佐剂作用机理主要包括以下几个方面：佐剂添加到抗原物质当中，可改变抗原的物理性状，延缓抗原降解和排除，延长免疫系统刺激作用时间；抗原与佐剂混合后，使抗原的表面积扩大、易于被巨噬细胞吞噬并增强其呈递能力；刺激淋巴细胞增生和分化，从而增强和扩大免疫应答的效应。现在研究发现佐剂能够增强疫苗抗原的免疫原性，促进细胞免疫和体液免疫，优化免疫应答；增强胞内感染病原的免疫反应，增进抗原与黏膜之间的传递以及免疫接触；可以用最小的抗原剂量、最少的接种次数、最小的不良反应获得最好的免疫应答。目前常用的免疫增强剂（佐剂）有几十种，例如常用的有铝盐及矿物质佐剂（氢氧化铝、硫酸锌、氯化钙）、油佐剂（弗式佐剂、白油）、蜂胶、左旋咪哇、转移因子和干扰素等。但油乳类、铝盐矿物类化学佐剂副作用较大，皮下注射时常有持续性肉芽肿、不能很好的吸收、也不能有效刺激保护性T细胞免疫。这些反应可能由于佐剂引起对特定抗原的免疫应答、产生炎症反应的细胞因子,从而导致炎症反应的产生。此外，这一类佐剂在机体内降解吸收慢、残留时间长、影响畜禽的外观及食用安全。中药是我国的国粹，具有天然、无毒、无副作用的突出特点，一些补中益气中药如人参、阿胶、党参、当归、黄芪等可提高免疫系统组织细胞的活性、提高机体免疫力，可研究成为新的疫苗佐剂。中药以整体调整、平衡阴阳为特点，可对机体液和细胞免疫系统进行全方位的调节，激活T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞等免疫细胞,还能促进细胞因子生成、活化补体。中药疫苗佐剂发挥作用可以分几个不同的方向：例如抗原呈递细胞佐剂、黏膜免疫佐剂、T细胞增强型佐剂。中药疫苗佐剂中的香菇多糖、当归提取物ASDL，可增强T细胞介导的免疫应答。中药疫苗佐剂的研究可分为单个中药有效成分研究和中药复方制剂两个方面。近些年对单味中药提取物中的多糖类研究较多，如黄芪多糖、蜂胶多糖、当归多糖、淫羊蕾多糖、板兰根多糖等。多糖类物质为众多中药的有效成分，可有效提高机体免疫水平、增强细胞与体液免疫效果。复方中药由若干单味药组成，但药效并非简单相加，而是根据药性及配伍原则而组成。乔海博等[1]研究表明，党参、山楂、熟地、川芎、何首乌、当归等11味中药组成复方中药多糖可提高鸡新城疫疫苗免疫效果，极显著提高新城疫抗体滴度、显著提高鸡超氧化物歧化酶含量。靳双星等[2]以连翘、板蓝根、黄芪、茯苓、白术等中药组成复方中药合剂，分别与NDClone-30疫苗、ND油乳剂灭活苗和IBD冻干苗合用，在不同程度上提高鸡血清DN和IBD抗体效价，说明该复方中药合剂有明显增强这３种疫苗免疫效果的作用。优秀的中药疫苗佐剂必须具备下列标准：①安全、且无短期及长期的毒副作用；②可通过肌肉、皮下、静脉、腹腔、滴鼻、口服等各种途径进入动物机体；③用较少的免疫剂量即可产生效力，进入体内的佐剂可自行降解且易于从体内清除；④化学成分和生物学形状清楚，制备批间差异小且易于生产；⑤不含与动物有交叉的抗原以避免诱发自身免疫反应，不应与抗体结合形成有害的免疫复合物。经过近些年的研究表明，无论是单味中药成分还是中药方剂均已证明具备免疫增强的功效，可以开发成为商品化的疫苗佐剂。人们现在重视生态安全与食品安全，中药佐剂具有资源丰富、作用广泛、安全低毒、不易产生耐药性、无污染、无残留等特点，具备广阔的发展空间。■（编辑：狄慧）参考文献：[1]乔海博,谷新利,朱晓庆.复方中药多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响[J].石河子大学学报（自然科学版）,2012,30(12):700-703.[2]靳双星,张桂枝,李新正.复方中药合剂对肉仔鸡疫苗免疫抗体效价的影响[J].西北农业学报,2014,23(2):26-29.ChaoXing