临床微生物学检验第五版第24章呼吸道病毒

第24章呼吸道病毒呼吸道病毒呼吸道病毒是指一大类能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病变或仅以呼吸道为入侵门户,主要引起呼吸道外组织器官病变的病毒。90%以上的急性呼吸道感染由该类病毒引起。呼吸道病毒分类正黏病毒科流感病毒副黏病毒科副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒其他病毒科腺病毒、风疹病毒、鼻病毒、冠状病毒、呼肠病毒一、流行性感冒病毒（influenzavirus）流行性感冒病毒（influenzavirus）简称流感病毒，是引起流行性感冒的病原微生物。第一节正黏病毒科（orthomyxoviridae）（一）分型据RNP和M蛋白抗原性分：甲、乙、丙三型甲型根据HA和NA抗原性不同，又分若干亚型（H1~H16、N1~N9）乙型、丙型至今未发现亚型（二）临床意义所致致病传染源-------患者或病毒携带者致病机制病毒-----呼吸道-----毒素样物质进入血液全身中毒症状局部黏膜上皮炎症同型有1～2年免力免疫物质为sIgA及中和抗体（IgG、IgM）免疫性：流行性感冒标本的采集液鼻腔鼻拭子咽喉拭子无菌pH7.2肉汤或送检(含漱液含漱液Hanks液可直接送检)支气管分泌物要求：1．早采集（前3d）2．标本应放冰瓶中，立即送检。3．如48h不能接种分离的标本，应置-70℃低温冻存。4．培养前将上述标本充分振荡10min沉淀取上清液3ml[加P-C（250u/m1）S-m（250μg/m1）]即可接种。混匀（三）微生物检验显微镜检查①免疫电镜特异性抗体+标本/细胞培养物，离心沉渣，电镜检查。②免疫荧光镜检鼻咽拭子涂片固定+抗甲型、乙型流感V抗体，加荧光标记的抗抗体染色，荧光镜观察。流行性感冒病毒的形态流感病毒的荧光电镜照片羊膜腔（初次分离）尿囊腔（传代）③动物接种少用。以雪貂最易感，也可用小鼠、地鼠、豚鼠。鼻腔洗液咽喉拭子传代狗肾C（MDCK）人胚肾C或换肾C7~10d一般无细胞病变效应（CPE）分离培养与鉴定（1）病毒的分离①细胞培养33~24℃甲、乙型流感V10~11日龄鸡胚丙型流感V9~8日龄鸡胚孵育2~3d（丙型5d）②鸡胚培养接种收获标本羊水或尿液血凝T检查其他鉴定方法补体结合反应（CF）中和试验测定病毒RNA（2）鉴定+血凝抑制试验（HI）-盲传一代-10~15d培养-血凝试验直接检测临床标本或IF（免疫荧光法）细胞培养物中流感VEIA（酶免疫测定）动态连续免疫荧光法直接检测甲型流感临床常用试剂盒直接检测甲型/乙型流感但不能识别二者直接检测甲型/乙型流感且能识别二者•抗原检测抗体检测取急性期（发生1~3d）、恢复期（病后3周）双份血检，测抗流感V的抗体水平。常用方法：HI和EIA。①从标本中提取病毒RNA，点样于尼龙膜上，干燥后与32P标记的流感病毒特异性cDNA探针进行分子杂交，孵育6h，经放射自显影检测点样膜是否结合有探针。②用RT-PCR技术扩增标本中流感VRNA。核酸检测二、禽流感病毒禽流感病毒(avianinfluenzavirus,AIV)是甲型流感病毒的一种亚型，可引起禽流行性感冒（简称禽流感）。近十几年，禽流感多次呈暴发性、大范围性流行,涉及多个国家和地区。原本只感染鸡的禽流感病毒亦令人类患病。目前发现最易感染人类的高致病性禽流感病毒亚型有H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3等，其中感染H5N1亚型的患者病情严重，致死率高。•三、甲型H1N1流感病毒引起甲型H1N1流感，在人群中传播。该病毒毒株包含猪流感、禽流感和人流感三种流感病毒的基因片段。人群对甲型H1N1流感病毒普遍易感，并可经人传染人，2009年开始，甲型H1N1流感在全球范围内大规模流行。2010年8月，世卫组织宣布甲型H1N1流感大流行期已经结束。第二节副黏病毒科（paramyxovirus）对人致病的副黏病毒主要有：麻疹病毒腮腺炎病毒副流感病毒呼吸道合胞病毒等麻疹病毒的传播人是麻疹病毒的自然宿主急性期患者为传染源通过飞沫或鼻腔分泌物传播一、麻疹病毒（measlesvirus）（一）临床意义麻疹病毒是麻疹的病原体，只有一个血清型。麻疹病毒的致病机制入侵（CD46为病毒受体）呼吸道上皮细胞内增殖入血（第一次病毒血症）侵入淋巴组织和单核吞噬细胞系统增殖后再次入血（第二次病毒血症）多种组织、器官受累，表现为细胞融合成多核巨细胞，核内形成嗜酸性包涵体等麻疹的临床表现潜伏期约10~12天体温略高、咳嗽、流涕、打喷嚏及泪眼，症状持续3~5天。体温突然升高（达到40~40.5C），口颊黏膜出现柯氏斑，随后出现红色班丘疹，从耳部开始，2~3天后遍及全身。4天后消退，脱屑。柯氏斑麻疹的并发症呼吸道：最为常见，如肺炎、肺结核消化道：腹泻、阑尾炎或盲肠炎营养失调神经中枢系统：亚急性硬化性全脑炎(SSPE)（二）微生物检验1．标本采集与处理取发病早期的鼻咽拭子、鼻咽洗液、痰、血、尿以及双份血清。2．标本直接检查3．病毒分离与鉴定4.抗原检测5.抗体检测6.核酸检测典型的麻疹可以根据临床症状确诊，轻型及其他不典型麻疹需进行实验室检验。传播特点病毒通过飞沫或直接接触传播咳嗽、喷嚏甚至说话都可传播病毒学龄儿童为易感人群出现症状前2~3天及症状消失后9天仍有传染性二、腮腺炎病毒（mumpsvirus）（一）临床意义腮腺炎病毒是流行性腮腺炎的病原体，只有一个血清型，人是其唯一宿主。临床表现潜伏期2~3周在上皮细胞和局部淋巴结内增殖入血，出现病毒血症病毒随血侵入腮腺及其他器官病程1~2周，主要症状为腮腺肿大，但约30%感染无症状并发症有睾丸炎、卵巢炎及病毒性脑炎病后可获牢固的免疫力（二）微生物学检验分离培养：标本：患者唾液、尿液或脑脊液方法：鸡胚羊膜腔、鸡胚细胞培养血清学诊断：病毒IgM或4倍上升的IgG方法：血凝抑制试验、ELISA和免疫荧光技术•副流感V是小儿急性下呼吸道感染的重要病原体。•只引起成人轻型上呼吸道症状。•主要通过与感染者密切接触或由飞沫经呼吸道传播•副流感病毒有4个血清型，1型和2型是主要致病因子3型常引起下呼吸道感染4型只引起轻型上呼吸道感染•1型和3型也是医院感染的重要病原三、副流感病毒（Parafluenzavirus，PIV)四、呼吸道合胞病毒（respiratorysyscytialvirus，RSV）引起婴幼儿急性哮喘性支气管炎或肺炎引起成人上呼吸道感染通过手、污染物品和呼吸道传播易在冬季流行是医源性感染的重要病原体传播途径粪-口途径呼吸道传播接触传播：手-眼途径性接触一、腺病毒（adenovirus）第三节其他呼吸道病毒（一）临床意义所致疾病咽炎急性呼吸系统疾病滤泡性结膜炎，流行性角膜结膜炎咽结膜热尿路感染(子宫颈炎、尿道炎、出血性膀胱炎)无症状的持续感染临床特征潜伏期为5~8天通常为局部感染一些病毒亚型可导致细胞病变（细胞肿胀、变圆，核内出现嗜碱性包涵体）约5%儿童急性呼吸道疾病及约10%婴幼儿腹泻由腺病毒引起脑膜脑炎可为腺病毒呼吸道感染的并发症标本：咽拭子、眼结膜分泌物直接检查：对鼻咽洗液、尿、粪便悬液等标本可用负染电镜技术观察病毒颗粒。（二）微生物学检验分离培养：接种原代人胚细胞后传代Hela细胞等上皮细胞，观察细胞病变效应血清学检测：酶联免疫、荧光免疫试验核酸检测：用PCR法检测病毒特异性DNA。二、风疹病毒（rubellavirus）儿童是主要易感者呼吸道传播局部淋巴节增殖后经病毒血症散播全身可垂直传播导致胎儿先天性感染风疹病毒是引起风疹（又名德国麻疹）的病原体。只有一个血清型，人是唯一自然宿主。1．风疹儿童是主要易感者。潜伏期10~25d，前驱期症状有发热、咽痛、咳嗽等。耳后及枕下L结肿大，有明显压痛，继而在面部首先出现浅红色斑丘疹迅速遍及全身。症状较轻，无需治疗。2．先天性风疹综合征（classicalcongenitalrubellasyndrome,CRS）。是孕妇在妊娠早期（妊娠20周内）感染风疹病毒，病毒经胎盘垂直传播感染胎儿，致使胎儿出生后患先天性心脏病、耳聋、失明、智力障碍，流产死胎。临床上检测母亲或胎儿血液或胎儿血液中抗风疹病毒IgM，抗体或检测胎儿绒毛膜中无风疹病毒Ag或取羊水进行病毒分离培养，以确定感染和中止妊娠。标本采集咽拭子、鼻拭子、鼻黏膜咽拭子和洗液鼻咽拭子、粪便检活检（感染后2~3d）胃肠—粪便验直接检查电镜、免疫电镜电镜呈日冕状或电镜查V颗粒冠状V颗粒方ELISA检测V的Ag法分离人二倍体细胞人胚气管鸡胚尿囊膜、尿囊根据对酸稳定及中和T有病毒生长用免疫HeLa、KB、FL鉴定血清型电镜鉴定血凝抑制抗体中和试验鉴定型别鼻病毒冠状病毒呼肠病毒临床意义普通感冒普通感冒感染呼吸道，胃肠炎SARS-CoV引起SARS三、鼻病毒（rhinovirus）、冠状病毒（coronavirus）和呼肠病毒（reovirus）SARS-CoV（PUMC01株）病毒颗粒电镜负染照片（18000）中国医学科学院协和医院倪安平教授提供