化学发光免疫分析技术的发展-PowerPoint演示文

化学发光免疫分析技术的发展深圳市新产业生物医学工程有限公司安徽省总代理:合肥兴科天合生物科技有限公司报告人:饶微（博士）、汪竟成（经理）概念化学发光免疫分析是将灵敏的化学发光或生物发光体系与特异的抗原抗体免疫测定结合于一体的检测技术。原理化学发光由于化学反应产生电子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量产生光子，从而导致的发光现象。免疫测定是利用抗原抗体反应来测定标本中微量物质的方法。化学发光反应参与的免疫测定分为二种类型第一种是以发光剂作为酶免疫测定的底物，通过发光反应增强测定的敏感性；第二种是以发光剂作为抗体或抗原的标记物，直接通过发光反应检测标本中抗原或抗体的含量。化学发光免疫分析目前分类按发光剂不同分为1.发光酶免疫测定技术（CLEIA）2.化学发光免疫测定技术(CLIA)3.电化学发光免疫测定技术(ECLIA)escenceimmunoassay发光酶免疫测定技术（CLEIA）属于酶免疫测定的一种。只是最后一步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应发出的光在特定的仪器上进行测定。技术类型根据酶促反应底物不同可分为1.荧光酶免疫测定技术2.化学发光酶免疫测定技术根据免疫学反应模式分1.双抗体夹心法和双抗原夹心法2.固相抗原竞争法：化学发光免疫测定技术（CLIA）用化学发光剂直接标记抗原或抗体,与待测标本中相应Ab或Ag、磁颗粒性的Ag或Ab反应，通过磁场把结合状态（沉淀部分）和游离状态的化学发光剂标记物分离开来，然后加入发光促进剂进行发光反应，通过对发光强度的检测进行定量或定性检测。技术类型1.分离方法常用磁颗粒分离技术2.免疫学反应模式同酶发光免疫测定技术3.不同只是相应标记物是吖啶酯而不是酶电化学发光免疫测定技术（ECLIA）是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，用化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+标记Ab，通过Ag-Ab反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度对待测的Ag或Ab进行定量。技术类型1.分离方法常用磁颗粒分离技术2.免疫学反应模式同酶发光免疫测定技术3.相应标记物是三联吡啶钌而不是酶发光免疫分析基本操作步骤（一步法）待测样品标记抗体或抗原洗涤去除未结合的反应物发光底物仪器检测包被抗体或抗原的反应管反应30-60分钟反应0-5分钟发光免疫分析基本操作步骤（二步法）待测样品洗涤去除未结合的反应物发光底物仪器检测包被抗体或抗原的反应管反应30-60分钟反应0-5分钟标记抗体或抗原洗涤去除未结合的反应物反应30-60分钟化学发光免疫分析的优点1、灵敏度高：这是CLIA关键的优越性，其灵敏度可达10-16/-21mol/L（RIA为10-12mol/L）。又如化学发光底物（如AMPPD）可检测出的碱性磷酸酶的浓度比显色底物要灵敏5х105倍。几种标记免疫技术灵敏度的比较酶标荧光放免发光灵敏度(mol/L)10-1810-1510-1210-9发光技术——临床免疫分析划时代的进步以TSH(促甲状腺素)为例第一代TSH检测试剂盒普通放免功能灵敏度1-2mIU/L基本无法测到正常值下限以下的血清TSH浓度对甲亢的诊断意义不大固相放免功能灵敏度0.1-0.2mIU/L在甲亢的诊断中开始发挥作用第二代TSH检测试剂盒发光免疫功能灵敏度0.01-0.02mIU/L成为甲亢诊断的首选指标之一发光免疫功能灵敏度0.001-0.002mIU/L一系列新的临床现象改写了垂体甲状腺轴的调控状态第三代TSH检测试剂盒第四代TSH检测试剂盒2．线性范围宽：发光强度在4～6个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度（OD值）为2.0的范围相比，优势明显。也优于放射免疫分析技术。几种标记免疫技术线性范围的比较酶标荧光放免发光线性范围1051041031023、安全性好：彻底消除了放射性危害，环保、安全。到目前为止，还未发现CLIA的危害性。4、试剂有效期长有效期可长达1年以上，放射免疫分析由于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一个月，而酶免的底物贮存性差，都无法与化学发光相比，有效期长可以降低使用成本，利于推广应用。几种标记免疫试剂的有效期比较酶标荧光放免发光有效期（月）18151296305、光信号持续时间长辉光型（glowtype）的CLIA产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实验操作及测量。容易实现连续、动态、重复测定6、分析方法简便快速绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂（或复合试剂）的一步模式，容易实现自动化。7、结果稳定、误差小样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免除了各种可能因素（光源稳定性、光散射、光波选择器等）给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。8、临床应用广1）甲状腺激素2）生殖激素3）肾上腺/垂体激素4）贫血因子5）肿瘤标记物6）感染性疾病7）糖尿病8）心血管系统9）病毒标记物10）骨代谢11）过敏性疾病12）治疗药物监测德国lumino准自动化学发光免疫分析系统介绍免疫定量分析的两大关键技术:1、标记技术：决定方法的理论灵敏度I125、HRP（luminol)、AKP、AE、ABEI、三联吡啶钌。2、分离技术：决定方法的实际灵敏度、速度、精密度。纳米磁性微珠分离非纳米磁性微珠分离技术：塑料微孔板、塑料试管、大塑料球、高分子微球化学发光分类酶促化学发光：HRP（lumino)、AKP★试剂稳定性差★反应速度慢★光信号与温度变化显著相关★综合成本高、发光底物不易保存直接化学发光：AE、ABEI、三联吡啶钌★试剂稳定性好★反应速度快★光信号与温度变化无关★综合成本底、发光底物易保存LUMINO准自动化学发光免疫分析仪器系统主要技术特点标记物：ABEI，发光过程3秒分离技术：纳米磁性微球，所有分析项目公用发光过程监测：自动感应试管，两个精密高速注射泵自动泵入发光底物，计算机控制自动测量光信号，确保监测的每一个发光过程一模一样。综合成本低：免费供应标准品、系统质控、定标物；两点定标自动修正标准曲线，节省试剂。发光底物成本低。项目菜单全：可供应多达97个测定项目。系统主要菜单介绍★甲状腺类：T3、T4、FT3、FT4、rT3、TSH、TGA、TMA、TRAb★性腺类：FSH、LH、PRL、E2、FE3、P、T、FT、HCG、FREE-β-HCG★糖尿病类：insulin、C-P、proinsulin、IAA、GAD-65系统主要菜单介绍★肿瘤标志物类：AFP、CEA、PSA、FPSA、PAP、NSE、FERRITIN、NMP22、TPA、CA125、CA153、CA199、CA50、CA242、CA724、CA211、S-100、CT、SCCA★心肌标志物类：TroponinI、Myoglobin、CK-MB、CRP(超敏）、NT-proBNP唐氏综合征产前筛查★早期筛查：PAPPA、F-β-HCG★中期筛查：F-β-HCG、AFP、FE3★配套产前筛查风险评估软件：经国家药监局正式注册系统主要菜单介绍★肝纤维化类：HA、PCⅢ、CⅣ、LN、CG、★乙肝两对半：HBsAg、AntiHBs、AntiHBc、HBeAg、AntiHBe★骨代谢类：PTH（intact）、CT、BGP、FA★内分泌激素类：ACTH、GH、ALD、Cortisol、AⅠ、AⅡ系统主要菜单介绍★特种蛋白检测：β2-MG、H-IgG、H-ALB、H-IgE、H-IgM、H-IgA★TORCH系列：ToxoIgG、ToxoIgM、RubellaIgG、RubellaIgM、CMVIgG、CMVIgM、HSV-1/2IgG、HSV-2IgG、HSV-1/2IgGM★EB病毒系列：EBNAIgG、EBVEAIgG、VCAIgG、EBVIgM、EBVIgA系统主要菜单介绍★药物监测类：DIGOXIN、CyclosporinA、FK506综述综上所述，德国Lumino准自动化学发光系统采用了目前世界领域内最先进的非酶的小分子有机化合物标记技术和最先进的纳米磁性微珠分离技术，具有最广泛的测定项目和最低的综合成本。