南京大学实验报告-果蝇的三点测交

生命科学学院1/6果蝇的三点测交实验报告一、实验目的验证连锁互换定律，掌握并进行连锁分析，学习绘制遗传学图的原理和方法。了解伴性遗传与非伴性遗传的区别，了解伴性基因在正、反交中的差异。二、预备知识三点测交把三个基因包括在同一次交配中，即用三杂合体abc/+++或ab+/++c跟三隐性个体abc/abc测交。进行这种试验，一次就等于三次“两点试验”，而且带有另外两个优点。一次三点测验得到的三个重组值是在同一基因型背景、同一环境条件下得到的，而三次“两点试验”就不一定这样。重组值既受基因型背景的影响，也受各种环境条件的影响，所以，只有从三点试验所得到的三个重组值才是严格地可以互相比较的。通过三点测交试验，可以得到三次两点试验所不能得到的资料，即双交换的资料。果蝇的白眼、小翅、卷刚毛为X-连锁基因，全部隐性于各自的野生型基因（红眼、长翅、直刚毛），把白眼、小翅、卷刚毛雌蝇（wmsn/wmsn）与野生型雄蝇交配（＋＋＋/Y），F1雌蝇全部为野生型，雄蝇则全部表现为三隐性突变型，让F1互交，在F2中，不管雌雄性别，除了出现双亲类型外，还会出现新的表型种类，这是由于F1雌蝇中两个染色体之间发生了互换的结果，根据基因在染色体线性排列的遗传理论，对F2进行分析即可知不同基因间的连锁距离。因为这三个基因位于性染色体上，所以这个试验也可用来作为伴性遗传生命科学学院2/6试验。当基因位于X或Y染色体上时，一般不含相对的等位基因，产生伴性遗传，在正交和反交试验中产生不同的结果。三、供试材料野生型黑腹果蝇，白眼、小翅、卷刚毛三隐性果蝇。四、器材药品解剖镜、毛笔、麻醉瓶、白瓷板、标签、吸水纸、培养瓶(4瓶/人)、乙醚、75%乙醇五、实验步骤①选三隐性雌性处女蝇（wmsn/wmsn）和野生型雄蝇（＋＋＋/Y）5～6对置于新鲜培养瓶中作正交，同时选野生型雌性处女蝇（＋＋＋/＋＋＋）和三隐性雄蝇（wmsn/Y）同置于新鲜培养瓶中，作为反交，贴上标签，注明亲本类型，实验日期，组别及姓名。②自始自终进行果蝇生活周期的察看。写出观察日记：记录看到的果蝇行为，各发育阶段的主要现象及经历的时间等。③一周后，在实验室倒去亲本果蝇，一定要倒干净，一只也不能留。（此时瓶壁上应有黑色蛹)④二周后，F1蝇长出，实验室内观察F1雌蝇和F1雄蝇的各个性状，并观察正反交不同组合的结果如何。⑤取5-6对F1果蝇放入新鲜培养瓶中，正交放三瓶，反交一瓶。⑥三周后，倒去F1，必须倒干净，一只也不能留。F2果蝇表型类型（及基因型）数目重组区域生命科学学院3/6⑦四周后，F2成蝇长出，统计各类果蝇数，2～3天后再统计一次（要求统计数量1000只以上），统计过的果蝇处死。应该统计的F2果蝇是正交中F2，但如果其数目不多，可借用反交中F2的雄蝇加以统计。⑧在表格中记录实验结果。六、实验结果记录及分析1、数据记录：2、数据分析w-snw-mm-sn白小卷（wmsn/wmsn,wmsn/y）26462---红长直（+++/wmsn,+++/y）298白小直（wm+/wmsn,wm+/y）1227+-+红长卷（++sn/wmsn,+msn/y）15白长直（w++/wmsn,w++/y）48100++-红小卷（+msn/wmsn,+msn/y）52白长卷（w+sn/wmsn,w+sn/y）68142-++红小直（+m+/wmsn,+m+/y）74总计831127242169重组值15.28%29.12%20.34%双交换律3.25%生命科学学院4/6各基因间交换值：Ｐ（w-sn）＝15.28%Ｐ（w-m）＝29.12%Ｐ（m-sn）＝20.34%由实验结果可知，w-m间的交换值小于w-sn与m-sn间交换值之和，这是因为两个相距较远的基因发生了双交换的结果。根据表中数据观察以及遗传作图，可以分析出w-m间发生双交换能产出两种类型的果蝇：m+w（小翅、直刚毛、白眼）和+sn+(长翅、卷刚毛、红眼)，这两种果蝇计有27只（3.25%），在计算w-m间交换值时，这个组没有被计算进去。因为是双交换，所以再乘以2，得3.25%×2=6.50%。这就是校正值。校正之后的w-m间的重组值P（w-m）＝29.12%+6.50%=35.62%3、实验遗传连锁图wSnm15.2820.3435.62理论遗传连锁图wSnm15.119.634.6由上图对比可知，虽然与理论结果定量结果存在一定偏差，但是此实验还是可生命科学学院5/6以准确地反映三个基因的连锁位置关系。4、并发率及干涉并发率=0.0325/(0.1528x0.2034)=1.05干涉=1-1.05=-0.055、（附）遗传图谱分析七、实验讨论1、实验结果存在偏差的原因可能有：1)进行试验的环境条件有差异，由于不同环境条件下的重组值是有变化的。2)数量太少，进行三点测交需要大量的数量，实验数据越多越精确，实验室中果蝇数目有限这就对实验结果影响力加大，也是导致结果与理论值有偏差的原因之一。3)由于三隐性个体果蝇的生存力很弱，在幼虫密度较高时易在自然选择中被淘+++msn3wmsn3w×msn3wmsn3wmsn3w+++×（♂）♀（♂）♀msn3w+++msn3w+++msn3w+++msn3wm+++sn3w+++msn3wmsn3+++w++++sn3+msn3wm+w+++P：F1：（测交）生命科学学院6/6汰，在实验中此因素也有可能引起误差。4)观察果蝇时，有一些观察不到放走的，死掉的或者没有观察清楚的等等诸多因素都会影响到实验的结果。2、要保证实验的成功，必须要注意：1)果蝇要适度麻醉，挑蝇用毛笔，忌用镊子和其他工具，以免影响果蝇生长繁育。2)挑处女蝇时，每次只挑12小时内羽化成虫，超过12小时的成虫已逐渐有交配能力,必须一只不留地倒出处死,才能进行第二次挑选。3)刚羽化的果蝇色淡白，体软绵，难辨♀♂，务必小心区别。4)使用毛笔和瓷板，要用酒精棉球消毒，同时必须晾干才能使用。5)每个杂交组合放果蝇6~8对，用毛笔把果蝇扫进试管，试管要平放，待蝇醒后，方能竖起，避免果蝇粘在培养基上被闷死，杂交组合配好后，放回培养箱。6)两周后停止对F2代的计数，此时可能已有F3代混入影响结果。7)操作过程中注意无菌。8)尽量避免由于操作不当造成的果蝇的逃逸，这样会对最后的结果产生影响。9)果蝇的某一些性状本身可能会受到环境之类的影响从而出现与理论不相符的结果。10)因为此次实验的连续性很强，所以一定要注意每一步的时间和操作，否则就会产生不可逆的后果，严重的要进行重做。