ABI-7500型使用维护操作规程

分子生物学室作业指导书文件编号：版本/修订号：A/0生效日期：主要内容ABI7500型荧光定量核酸扩增仪作业指导书受控状态：第1页共3页编制人审核人/日期审批人/日期ABI7500型荧光定量核酸扩增仪作业指导书1.目的：使ABI7500型核酸扩增荧光定量检测仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。2.范围：ABI7500型核酸扩增荧光检测仪。3.性能参数：详见说明书4.程序：4.1.依次打开电脑显示器及电脑主机电源，进入windowsXP界面4.2.打开PCR主机电源4.3.点击桌面7500softwareV2.0.6图标，打开软件4.4.主界面点击SETUP菜单下ADVANCEDSETUP4.4.1.在试验属性界面：选择正确的机器型号，试验类型及试剂类型（探针法/染料法）4.4.2.在platesetup界面，首先设定试验使用的探针，及样品名称，然后按照事先加样的位置顺序设定样品名称、类型，包括待检样本、阴性对照、阳性对照、阳性标准品、阳性室内质控样本。4.4.3.在runmethod界面，编辑与试剂盒提供的温度程序相同的温度程序，包括温度与时间，及循环数4.5.将预先加好的0.2ML样品管按照设定顺序放置到仪器里面，进入到RUN界面，点击绿色START按钮，弹出保存试验对话框，设定保存后，试验立即开始运行。界面显示运行倒计时。运行过程中在amplificationplot界面可以查看实时的扩增曲线，在temperatureplot界面可以查看实时的温度变化情况。温度循环结束后试验自动结束。5.结果分析5.1.在analysissetup里面修改各个探针的baseline与threshold数值，点击绿色analyze图标，软件及完成自动分析。分子生物学室作业指导书文件编号：版本/修订号：A/0生效日期：主要内容ABI7500型荧光定量核酸扩增仪作业指导书受控状态：第2页共3页编制人审核人/日期审批人/日期5.2.在amplificationplot界面查看所有样品的扩增曲线。6.整体曲线的观察,将所有曲线选中进行整体观察。6.1.观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），特别应注意大量曲线在同一Ct值出现上涨的情况。6.2.观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。7.对照、质控品、标准品的分析7.1.阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阴性标本。作用：用以监测实验室和前处理过程中是否存在污染。7.2.阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阳性标本。作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴性的出现。7.3.阳性室内质控品的分析：阳性室内质控品：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知或未知浓度的阳性室内质控血清。作用：用以监控日常实验的精密度。7.4.阳性标准品的分析：各梯度曲线的分布是否均匀，若各梯度曲线均未分开，则表明阳性标准品稀释可能存在问题，提示实验中存在较大人为误差。7.5.观察各曲线的Ct值是否在平日的正常位置：7.5.1.若出现低拷贝标准品做不出，而各曲线Ct值均后移，则判断是否为试剂扩增效率下降（如试剂过期或保存条件不合格）。7.5.2.出现低拷贝标准品做不出，而高拷贝曲线Ct值均正常，则提示可能存在低拷贝阳性标准品的降解情况。7.5.3.若高拷贝标准品出现Ct值后移，且能排除上述情况，则判断是否为试剂灵敏度下降。8.得出定量结果：调节基线和阈值以得到一较好的标准曲线。电脑据此曲线给出实验结果值。分子生物学室作业指导书文件编号：版本/修订号：A/0生效日期：主要内容ABI7500型荧光定量核酸扩增仪作业指导书受控状态：第3页共3页编制人审核人/日期审批人/日期9.发放报告：及时登记检测结果记录，发放临床报告。10.仪器维护10.1.注意开机关机顺序，机器开机后即可使用，无需预热。10.2.电脑上禁止使用U盘等移动存储设备，建议使用光盘刻录来转移数据。10.3.针对电脑硬盘，进行周期性碎片整理，并将试验数据备份到其他存储设备上（比如光盘）10.4.仪器表面与电脑表面应每月用软布擦拭（无需用水，禁用有机溶剂，会溶解机器表面的漆层）10.5.灯泡更换：在灯泡使用达到寿命后（2000小时），或者意外损坏后需要更换。机器关闭电脑30分钟后，打开前面上半册面板，取出旧灯泡，在操作过程中需要戴无尘手套操作，注意灯泡高温。然后将新灯泡，用气吹吹掉表面的灰尘，安装灯泡。10.6.样品孔清洁：样品孔污染后会影响PCR扩增的信号，是的该孔信号高于其他孔，造成假阳性的结果，需要每月执行background校正，针对信号值超过72000的孔，使用棉签与去离子水进行清洁。清洁时关闭机器电源，打开前面上半面板，将热盖板（黑色面板）推到后面，清洁相应的孔，然后恢复原状，重新执行background校正，直到所有的信号值均低于72000.11.相关记录11.1.PCR室主要仪器设备表11.2.设备维护和校准记录表