CTAB法所需溶液配置

CTAB法所需溶液配置一、提取液的配置1、1MTris-Hcl（PH7.5-8.0）10ml称121.1gTris（三羟甲基氨基甲烷分子量121.1）溶于800ml水中，搅拌条件下加入浓盐酸（PH调至7.5）。待接近所需PH时，用稀Hcl准确调PH值至所需值，加入重蒸水至总体积1L，分装，高压灭菌（温度为121℃，时间为30分钟）。注：如调PH7.4则大约加浓盐酸70ml，PH7.6加60ml，PH8.0加42ml2、5MNacl14ml称292.2gNacl，溶于800ml蒸馏水中，此时已接近饱和，所以溶解较慢，完全溶解后用蒸馏水定容至1L，分装，高压灭菌。3、0.5MEDTA（PH8.0）溶液10ml称186.1gEDTA-Na22H2O（冰乙二胺四乙酸二钠盐）加入800ml重蒸水，用磁力搅拌器搅拌，加入NaOH（10M）调PH至8.0（只有PH值约等于8.0时EDTA-Na22H2O才能完全溶解，待EDTA-Na22H2O完全溶解后，再用稀NaOH准确调PH=8.0），重蒸水定容至1L，灭菌。调PH值：用固体NaOH约20g左右用10mol/L的NaOH溶液约70ml10MNaOH的配置：称取40gNaOH溶于蒸馏水后定容至100ml4、CTAB1g5、ddH2O65ml6、2Mβ-巯基乙醇4℃保存1ml方法：1、2、3、4、5加热溶解后加入6（即2Mβ-巯基乙醇）二、氯仿/异戊醇（V/V=24：1）：贮于棕色瓶中取氯仿480ml（即从一瓶中取出20ml），再在瓶中加入异戊醇20ml，摇匀注：最好现配现用三、RNase（10mg/ml）1）称取100mgRNase溶于10ml10mmol/LTris-cl（PH7.5），15mmol/LNacl中，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装后于-20℃保存。2）25mg加2.5mlTE缓冲液，于100℃水浴，加热15min，缓慢冷却至室温，不要贴底，否则会产生絮状沉淀。注：水浴锅达不到100℃，用电炉子放上闷罐，水多些，放帖底。3）用水溶解RNase，终浓度10mg/ml，煮沸20min，缓慢冷却，分装，于-20℃下保存。四、TE（10mmol/LTris1mmol/LEDTA）：有7.4、7.6、8.0三种TE溶液分别由1ml的PH7.4、7.6、8.0的1mol/LTriscl缓冲液与0.2mlPH8.0的0.5mol/LEDTA溶液混合后，用重蒸水定容至100ml五、异戊醇（5瓶200份）：-20℃冰柜保存六、70%乙醇70ml无水乙醇加30mlddH2O