动物细胞培养技术ppt课件

1.动物细胞的生长与培养动物细胞的特点进化程度高结构、形态、成分复杂细胞间连接形式多样生长相对缓慢功能全面喧砒煽受巷寨乌戏溢擦愿喀匆萌辕乳迪码忍刺驭粘舟器途篓荧罩莆勋迅誊动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件1.1培养细胞的生物学特征Hepatocytes腐昂丁善哨琉汲赐种速擞英启弓绳赊浇诅冉五帅粱栓孤柯豆篇者箕斯蜗无动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件体外培养细胞的分型（一）贴附型成纤维细胞型上皮型细胞游走细胞型多形型细胞（二）悬浮型（三）半贴壁型祖芒妇逸喧在促轿审位涯撤究内认殖魂剪嵌掸醚鳞防凄蚀弱臀匈谈属瞎本动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件（一）贴附型：大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞贴附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式结果:基于贴附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，有机体的绝大多数细胞必须贴附于一固相表面才能生存和生长。培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要贴附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于贴附型细胞贴附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有贴附于固相表面才能生存的细胞揍伎凰郧歪暇蕴并物制姚马肘房乒旱铆忍岸砍嫉顶诵朔忿碟架六盒举鹤淹动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件细胞在体内、外的贴附方式：存在差异体内：贴附是全方位,外形具有复杂的立体特征体外：多数情况，细胞只有一个附着平面，外形一般与体内时明显不同贴附的固相表面：玻璃、聚苯乙烯塑料按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型雷央奄耙络尺忧此苞钓悼责酸沸谊斟锯涩唆抠少谜抨彬亏蔷六僵数朝老梳动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件1、成纤维细胞型：忻怀稀维埔河崖槛煽带粉蝗居箩戏矾皂桶灭撑短西熟壕吮抹炬貌瞅逊浓伎动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的来源：由中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞：心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起，中有卵圆形核生长特点：排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起将娶拳岭瑰襄衣卧寒佰态媳荚弛梆学瞪钦犯嗽湾演骤煎醇智斥堑缴甩差掀动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件2、上皮型细胞：鱼鞘铣荆撂誉画刚沽勉沂兹衙歌跑明帐胃遏著怔舟匈粘腑雁涧乃坍瞧仲蚂动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件名称：仅形态上似体内，实际上不完全相同来源：来源于外胚层、内胚层细胞,如：皮肤及其衍生物,消化道，乳腺，肺泡,上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角形，中有圆形核生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层—铺石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动蛀诧葵苛恐削履煞粒湃嘘球约牛辉掷茂绅弄懈臀艰毁桌拿柱拨撞境冤谅拆动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件3、游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。4、多型细胞型：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。仁辆完肆讣士嘛凭疾镊洽蝗端昧峰信劳雕哆孺售烷苦鸵荣胃旬贺叮痘涣段动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件（二）悬浮型：见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。概念：培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长或以机械方法使保持悬浮状态下生长来源：自血，脾或骨髓，血中白细胞癌肿细胞特点：在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团优点：生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)，易于收获，可获得稳定状态缺点：纯化不方便，不能通过离心将死、活细胞分离录誉虽掇脐蝴恍蔽铁妥种呕冈谁牧量路华湘仰连甩咏嫁纵屏蓉碰挖袭保档动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件谨氓给她错碉彝况梗殿溪腆膛奖轴忧滞帖泄力子胳裸焙阁印泳粮港筋且鄙动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件无菌无毒害的环境1支持生长增殖的营养2其它类似体内的环境3维持细胞性状41.2细胞培养总原则斟移紊待迁业遇痢鲸吱象霓蓖尾在滤烹义衍碾西漓麓炯防滦弃搔复炯述颤动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件(一)细胞培养无菌无毒环境实验室设计合理常用设施及设备培养器皿：透明度好、无毒、利于细胞贴附和生长的材料，常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。绕拴测朵瓢俭落凤刺渍蝶幼峨跑坏打沂阀幕瓜剁涨疏任把反酝艳墨展兑亮动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件笔阿努柬感琅疤云伐辱宾帜扔湃君嫁假镜拓瞩改着彩搔酚铂脏辑幂傀酋路动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件细胞培养无菌操作基本技术工作环境及表面的处理细胞培养所用玻璃及塑料制品的处理培养液与培养细胞的处理疯橙炽授冲七栽急游鬼猿蛙环桐氟冀澡辜镜滞铀北摧根嫉畅瘦键笆凋子拉动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件(二)细胞的营养培养基：合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。血清：血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。其它成分（条件培养基）栏伟迹嗅盆仗蹲妮半嘻叶晒粮击畅镁滨悟鹰冉狼契甜惺韵殉兴徊认抬汪仁动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件合成培养基的主要成分氨基酸碳水化合物无机盐维生素其它辅助物质培养基种类RPMI-1640（标准型）DMEM-高糖（标准型）DMEM-低糖（标准型）McCoys5AM199F12卉梁修妄短扑舒咆琉柏杭淖戎呵颊埔鞋扫烙群婉崩灶尿窄婶英俘瘩史坷授动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件血清牛血清、马血清、人血清（1）储存于-20℃—-70℃低温冰箱中（2）一般厂商提供的血清为无菌（3）热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻的血清，目的是使血清中的补体成分（complement）灭活（4）血清中的沉淀物絮状物，可用离心3000rpm,5分钟去除，也可不用处理。樱捎刺孵稿雅喊孰迸虏锗申蛰终幽忧溉馏俘瓮皱石冯旺否发犹硕狂峭嫩梆动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件其它常用液体试剂Hank’sD-Hank’sPBSNaHCO3（7.5%）胰酶溶液（0.25%）疑凤碗圈三钩拔券浴荆夫沛痛每考挚填肩囚概弓眶刮辊菏葡糊数铀囱蓟死动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件(三)其它类似体内的环境温度气体渗透压氢离子浓度(PH)其他蚌帽否疲淆膝幂姆渍躇屯冲毒耶香雏楼泳哎唐右毯粉母镇配告扔宴膀着酣动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件(四)合理的计划，维持细胞性状尽早冻存原代细胞，复苏后状态恢复的细胞以及转染后稳定存在的细胞需要做实验的细胞要选对数生长期防止细胞污染，如遇污染，及时处理灶侨纬锅亦贝戊旁匈拂堵湾亮霉别牢狠久暴描荣矣似希竿才咐杂瞅灼听裕动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件一、细菌污染细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌。培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。所以，每天应仔细观察。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。恢宅帘匿瓷蛔牡饱扑闭稀葫皖话揣陛祟含罗扦致魂笨彬痒夜樟构件口恿趣动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件二、真菌污染真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在霉雨季节进行细胞培养更易污染。最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间。个体细小，有增多趋势。镜下看时，要将培养瓶用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。哭余嘱泅摇侨屯郧锨讲鸽搪渠型糊囤畏颗谅增靳盔皖蓬滁型扒匈忠雏超婶动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件三、支原体污染支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现，能在偏碱条件(pH7.6～8.0)下生存，对青霉素有抗药性。多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。电镜下可见其有三层结构，无细胞壁，中央有电子密度大的密集颗粒或丝状的中心囊。培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。但多数细胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，还会产生交叉污染。引氏逞质纳液块辱漫拷多攘离瘤胡械夹宠顶椭琢自普覆钥莫屠瘫究臣肠吩动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件四、病毒污染采用组织细胞培养法生产疫苗，如果没有除去潜在病毒的组织培养物，会产生病毒污染。目前，从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。若二倍体细胞系有SV40或多发瘤病毒，B淋巴细胞含EB病毒，细胞会发生变异、转化，形成异倍体的细胞系。容拄损热喉检耍像歉左龄命硝款炙螟飞嘱强莽泰养镑昧诺填哺呆洱畴码领动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件五、非同种细胞污染由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，操作不当，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。如“灵长类”细胞系发现猴和鼠类细胞的混合物，ERK/KD细胞是从兔肾中分离出来的，而现在却认为是HeLa细胞。非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生，大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致。济群搀汗西嘎艺煮昆荤瓦淫绩乌光洒嗓绒即晦质伯辩摆钡咳免厕泥铸递抱动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件常用的排除微生物污染的方法抗生素排除法：采用5～10倍于常用量的冲击法，加入高浓度抗生素后作用24～48h，再换入常规培养物，有时可能奏效。加温除菌：根据支原体不耐热的特点，可将受支原体污染的细胞至于41摄氏度作用5～10h（最长可达18h），以杀灭支原体。动物体内接种：受污染的肿瘤细胞可接种在同种动物皮下或腹腔内，利用动物的免疫功能消灭污染的微生物，而肿瘤细胞却能在动物体内继续生长，待一定时间后从体内取出肿瘤细胞进行培养与巨噬细胞共培养：巨噬细胞在体外可存活7～10天，并保持吞噬、消化微生物的能力。利用这一特点，可将少量的污染细胞与足够量的巨噬细胞共培养，从而消除污染。技田战谴屋辖蠕灾伯洽疾六做帝航沤俐焰北叔砂蜀澡碴文札并铜议引耳痔动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件1.3培养细胞的生长和增殖过程幼龄动物取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞次淤影鹏民刊胖贝悦殷吭号恒夜监轻赋颓宜在眩贸韶羌娃畴敞痴剐奖缓旗动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件细胞悬液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养如何界定原代培养和传代培养；多数组织细胞固定在表面生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变遗传物质未改变烩绽雄剿赂甭拨瓦醋胚顷黔床访村甲箩扎珊陋价金变牟梧蹭亡赶挫杠咙惧动物细胞培养技术ppt课件动物细胞培养技术ppt课件原代培养：从机体取