Cas9酶使用说明-唯尚立德

北京唯尚立德生物科技有限公司@v-solid.comCas9酶（Cas9）货号规格价格#E025S20U800元#E025L100U3200元浓度1U/ul储存-20℃反应条件37℃温育应用■Cas9/gRNA特异位点体外剪切DNA，如plasmids、genomicDNA,PCRproduct■体外检测gRNA的剪切靶点DNA的效率■Cas9蛋白结构与功能研究■用于体内注射概述CRISPR/Cas是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可特异剪切外源的病毒及DNA以对抗入侵。人工改造过的Cas9/gRNA系统通过gRNA（shortguideRNA）引导Cas9蛋白识别并剪切带有gRNA靶点的双链DNA，用于基因敲除和精确编辑DNA等操作。重组表达的Cas9蛋白分别在N端和C端带有NLS（入核）序列。来源重组带有NLS（入核）序列的Cas9蛋白反应条件1×Buffer[20mMHEPES，pH7.5，150mMKCl，10mMMgCl2，0.1mMEDTA，0.5mMDTT]，37℃温育。质保声明Cas9经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。请使用前务必仔细阅读本手册。单位定义在50μl反应体系中，37℃，gRNA足量时，1U等于1h能将1ug质粒或线性DNA完全酶切所需的Cas9蛋白量。注意事项1.Cas9切割dsDNA效率与gRNA靶点序列有关，每个gRNA的效率都会不同。2.所用枪头管子等都必须是RNasefree的，gRNA可以适当多加，防止因为部分降解而降低酶切效率。Cas9体外酶切法检测gRNA靶点效率实验步骤1、带有gRNA靶点的质粒或PCR扩增出的DNA片段，gRNA靶点最好不位于PCR片段中央，这样将切割出两条大小不同带便于判断。2、gRNA靶点设计与体外转录准备见唯尚立德Cas9/gRNA质粒构建试剂盒。3、反应体系：dsDNA200nMgRNA（体外转录）100nMCas90.5-1U10XBuffer2ulddH2OxulTotal20ul充分混合后，37℃反应1h，65℃煮5min,跑琼脂糖凝胶电泳检测分析酶切结果琼脂糖凝胶电泳检测分析酶切结果。图.Cas9酶切靶点序列效率。带有靶位点的DNA片段：680bp酶切后条带：500bp+180bp酶切率=切开条带/检测条带（按带的灰度计算）北京唯尚立德生物科技有限公司@v-solid.com使用限制本试剂仅限用于科学研究。储存与安全本品4℃运输，储存于-20℃，有效期12个月。长期储存请置于-80℃。本品采用蓝冰运输，蓝冰在使用前在-80℃冷冻至少72小时。实验证明，使用上述方法运输，即使到货时蓝冰已经融化，泡沫塑料盒中的温度仍然能保持在4℃或4℃以下24小时。比较干冰运输的产品，其活性和稳定性无任何差异。产品纯化整个过程都在4℃进行，且其贮存液经过优化，对保持酶活的稳定性起到重要作用。产品中含有50%甘油，可以使酶在-35℃下保持液态，若使用干冰运输，酶将被冷冻，发生反复冻融可能会导致酶活性下降。